1、研究背景和目的內(nèi)毒素血癥是一種由內(nèi)毒素（主要成分為脂多糖,LPS）進(jìn)入血液引起的急性病癥。LPS在血液中會(huì)激活巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞等,使其大量釋放促炎細(xì)胞因子,導(dǎo)致補(bǔ)體系統(tǒng)和凝血系統(tǒng)異常活化,引起多器官的微血管循環(huán)障礙、彌漫性血管內(nèi)凝血、休克甚至死亡。白介素-10（interleukin-10,IL-10）是一種重要的免疫調(diào)節(jié)因子,在內(nèi)毒素血癥中能抑制巨噬細(xì)胞等的活化和促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生,抑制過(guò)激的免疫反應(yīng),減少炎癥損傷。IL-10可以在內(nèi)毒素血癥的臨床試驗(yàn)中降低促炎細(xì)胞因子水平,在內(nèi)毒素血癥小鼠中也能抑制炎癥反應(yīng),提高生存率。中藥兩面針是蕓香科植物兩面針（Zanthoxylum nitidum）的干燥根,用于跌打損傷、牙齦炎、風(fēng)濕病等的治療。氯化兩面針堿（nitidine chloride,NC）是兩面針的主要活性成分。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)NC能促進(jìn)LPS刺激下樹(shù)突狀細(xì)胞中IL-10的表達(dá)。本研究旨在確定NC調(diào)控IL-10的作用特征,考察其作用靶點(diǎn)和作用機(jī)制,并在小鼠內(nèi)毒素血癥模型中考察其體內(nèi)抗炎活性。2、研究方法（1）NC調(diào)控IL-10表達(dá)的作用特征研究本研究使用了RAW264.... 

【文章頁(yè)數(shù)】：125 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略詞表
第一章 NC促進(jìn)LPS刺激下IL-10 的表達(dá)
    一、引言
        (一)IL-10 的免疫調(diào)節(jié)功能
        (二)兩面針及氯化兩面針堿
        (三)氯化兩面針堿與炎癥
    二、實(shí)驗(yàn)材料
        (一)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
        (二)實(shí)驗(yàn)試劑
        (三)儀器與設(shè)備
    三、實(shí)驗(yàn)方法
        (一)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)及倫理
        (二)原代細(xì)胞的制備及培養(yǎng)
        (三)傳代細(xì)胞系的培養(yǎng)
        (四)細(xì)胞毒性的測(cè)定
        (五)ELISA測(cè)定IL-10 蛋白濃度
        (六)qPCR測(cè)定IL-10 mRNA水平
        (七)數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        (一)NC的細(xì)胞毒性考察
        (二)NC調(diào)控IL-10 表達(dá)的時(shí)間特征
        (三)NC濃度依賴(lài)地促進(jìn)IL-10表達(dá)
    五、小結(jié)與討論
第二章 NC通過(guò)抑制TOP1 促進(jìn)IL-10 表達(dá)
    一、引言
        (一)拓?fù)洚悩?gòu)酶I
        (二)TOP1 抑制劑
        (三)TOP1 抑制劑與炎癥
    二、實(shí)驗(yàn)材料
        (一)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
        (二)實(shí)驗(yàn)試劑
        (三)儀器與設(shè)備
    三、實(shí)驗(yàn)方法
        (一)拓?fù)洚悩?gòu)酶I酶活性的測(cè)定
        (二)細(xì)胞因子表達(dá)測(cè)定
        (三)TOP1 干擾shRNA載體的構(gòu)建
        (四)干擾慢病毒的制備
        (五)慢病毒轉(zhuǎn)染THP-1 細(xì)胞
        (六)Western Blots
        (七)數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        (一)NC可抑制TOP1 酶活性
        (二)TOP1 抑制劑增強(qiáng)LPS刺激下IL-10 的表達(dá)
        (三)TOP1 干擾慢病毒的構(gòu)建及干擾效果考察
        (四)TOP1敲減對(duì)TOP1 抑制劑調(diào)控IL-10 的影響
    五、小結(jié)與討論
第三章 NC和 TOP1 抑制劑治療小鼠內(nèi)毒素血癥
    一、引言
        (一)內(nèi)毒素血癥及其動(dòng)物模型
        (二)內(nèi)毒素血癥與細(xì)胞因子
    二、實(shí)驗(yàn)材料
        (一)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
        (二)實(shí)驗(yàn)試劑
        (三)儀器與設(shè)備
    三、實(shí)驗(yàn)方法
        (一)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)處理及倫理
        (二)內(nèi)毒素血癥模型建立
        (三)小鼠血清及組織提取和細(xì)胞因子測(cè)定
        (四)組織H-E染色
        (五)IL-10 敲除小鼠和Anti-IL-10 抗體封閉
        (六)數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        (一)NC和 TOP1 抑制劑提高內(nèi)毒素血癥小鼠的生存率
        (二)NC和 TOP1 抑制劑影響小鼠體內(nèi)細(xì)胞因子產(chǎn)生
        (三)IL-10 介導(dǎo)了NC和 TOP1 抑制劑的抗炎作用
        (四)IL-10 影響了NC和 TOP1 抑制劑對(duì)促炎細(xì)胞因子的調(diào)控
    五、小結(jié)與討論
第四章 NC和 TOP1 抑制劑通過(guò)增強(qiáng)PI3K-AKT通路活化促進(jìn)IL-10 表達(dá)
    一、引言
        (一)IL-10 表達(dá)的調(diào)控
    二、實(shí)驗(yàn)材料
        (一)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
        (二)實(shí)驗(yàn)試劑
        (三)儀器與設(shè)備
    三、實(shí)驗(yàn)方法
        (一)細(xì)胞培養(yǎng)
        (二)mRNA降解測(cè)定和半衰期計(jì)算
        (三)細(xì)胞因子含量測(cè)定
        (四)Western Blots
        (五)單細(xì)胞凝膠電泳
        (六)小鼠模型中PI3K-Akt通路考察
    四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        (一)NC和 TOP1 抑制劑增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄促進(jìn)IL-10 表達(dá)
        (二)PI3K-Akt通路在NC調(diào)控IL-10 表達(dá)中發(fā)揮重要作用
        (三)NC和 TOP1 抑制劑增強(qiáng)LPS刺激下PI3K-Akt通路的活化
        (四)PI3K-Akt通路介導(dǎo)了NC和 TOP1 抑制劑對(duì)IL-10 的上調(diào)
        (五)NC通過(guò)活化PI3K-Akt通路緩解小鼠內(nèi)毒素血癥
        (六)NC和 TOP1 抑制劑通過(guò)PI3K-Akt通路抑制促炎細(xì)胞因子
    五、討論
第五章 NC和 TOP1 抑制劑通過(guò)激活DNA損傷應(yīng)答促進(jìn)IL-10表達(dá)
    一、引言
        (一)TOP1 抑制劑調(diào)控機(jī)制
        (二)DNA損傷應(yīng)答
    二、實(shí)驗(yàn)材料
        (一)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
        (二)實(shí)驗(yàn)試劑
        (三)儀器與設(shè)備
    三、實(shí)驗(yàn)方法
        (一)細(xì)胞培養(yǎng)
        (二)細(xì)胞因子含量測(cè)定
        (三)Western Blots
        (四)單細(xì)胞凝膠電泳
    四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        (一)NC和 TOP1 抑制劑調(diào)控IL-10 的可逆性考察
        (二)NC在無(wú)毒劑量下引起DNA損傷
        (三)NC和 TOP1 抑制劑激活DNA損傷應(yīng)答
        (四)阻斷DNA損傷應(yīng)答會(huì)影響NC和 TOP1 抑制劑的藥效
    五、討論
總結(jié)與討論
參考文獻(xiàn)
附錄
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Topoisomerase I in Human Disease Pathogenesis and Treatments[J]. Min Li,Yilun Liu.  Genomics,Proteomics ＆ Bioinformatics. 2016(03)
[2]氯化兩面針堿的研究近況[J]. 劉麗敏,劉華鋼.  時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥. 2007(01)

博士論文
[1]天然產(chǎn)物白首烏二苯酮的神經(jīng)保護(hù)作用和兩面針堿的免疫調(diào)控作用機(jī)制研究[D]. 岳榮彩.第二軍醫(yī)大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3732095