1、研究背景和目的內(nèi)毒素血癥是一種由內(nèi)毒素（主要成分為脂多糖,LPS）進入血液引起的急性病癥。LPS在血液中會激活巨噬細胞、樹突狀細胞等,使其大量釋放促炎細胞因子,導致補體系統(tǒng)和凝血系統(tǒng)異�；罨�,引起多器官的微血管循環(huán)障礙、彌漫性血管內(nèi)凝血、休克甚至死亡。白介素-10（interleukin-10,IL-10）是一種重要的免疫調(diào)節(jié)因子,在內(nèi)毒素血癥中能抑制巨噬細胞等的活化和促炎細胞因子的產(chǎn)生,抑制過激的免疫反應(yīng),減少炎癥損傷。IL-10可以在內(nèi)毒素血癥的臨床試驗中降低促炎細胞因子水平,在內(nèi)毒素血癥小鼠中也能抑制炎癥反應(yīng),提高生存率。中藥兩面針是蕓香科植物兩面針（Zanthoxylum nitidum）的干燥根,用于跌打損傷、牙齦炎、風濕病等的治療。氯化兩面針堿（nitidine chloride,NC）是兩面針的主要活性成分。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)NC能促進LPS刺激下樹突狀細胞中IL-10的表達。本研究旨在確定NC調(diào)控IL-10的作用特征,考察其作用靶點和作用機制,并在小鼠內(nèi)毒素血癥模型中考察其體內(nèi)抗炎活性。2、研究方法（1）NC調(diào)控IL-10表達的作用特征研究本研究使用了RAW264.... 

【文章頁數(shù)】：125 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略詞表
第一章 NC促進LPS刺激下IL-10 的表達
    一、引言
        (一)IL-10 的免疫調(diào)節(jié)功能
        (二)兩面針及氯化兩面針堿
        (三)氯化兩面針堿與炎癥
    二、實驗材料
        (一)實驗細胞株
        (二)實驗試劑
        (三)儀器與設(shè)備
    三、實驗方法
        (一)實驗動物飼養(yǎng)及倫理
        (二)原代細胞的制備及培養(yǎng)
        (三)傳代細胞系的培養(yǎng)
        (四)細胞毒性的測定
        (五)ELISA測定IL-10 蛋白濃度
        (六)qPCR測定IL-10 mRNA水平
        (七)數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計學分析
    四、實驗結(jié)果
        (一)NC的細胞毒性考察
        (二)NC調(diào)控IL-10 表達的時間特征
        (三)NC濃度依賴地促進IL-10表達
    五、小結(jié)與討論
第二章 NC通過抑制TOP1 促進IL-10 表達
    一、引言
        (一)拓撲異構(gòu)酶I
        (二)TOP1 抑制劑
        (三)TOP1 抑制劑與炎癥
    二、實驗材料
        (一)實驗細胞株
        (二)實驗試劑
        (三)儀器與設(shè)備
    三、實驗方法
        (一)拓撲異構(gòu)酶I酶活性的測定
        (二)細胞因子表達測定
        (三)TOP1 干擾shRNA載體的構(gòu)建
        (四)干擾慢病毒的制備
        (五)慢病毒轉(zhuǎn)染THP-1 細胞
        (六)Western Blots
        (七)數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計學分析
    四、實驗結(jié)果
        (一)NC可抑制TOP1 酶活性
        (二)TOP1 抑制劑增強LPS刺激下IL-10 的表達
        (三)TOP1 干擾慢病毒的構(gòu)建及干擾效果考察
        (四)TOP1敲減對TOP1 抑制劑調(diào)控IL-10 的影響
    五、小結(jié)與討論
第三章 NC和 TOP1 抑制劑治療小鼠內(nèi)毒素血癥
    一、引言
        (一)內(nèi)毒素血癥及其動物模型
        (二)內(nèi)毒素血癥與細胞因子
    二、實驗材料
        (一)實驗細胞株
        (二)實驗試劑
        (三)儀器與設(shè)備
    三、實驗方法
        (一)動物實驗處理及倫理
        (二)內(nèi)毒素血癥模型建立
        (三)小鼠血清及組織提取和細胞因子測定
        (四)組織H-E染色
        (五)IL-10 敲除小鼠和Anti-IL-10 抗體封閉
        (六)數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計學分析
    四、實驗結(jié)果
        (一)NC和 TOP1 抑制劑提高內(nèi)毒素血癥小鼠的生存率
        (二)NC和 TOP1 抑制劑影響小鼠體內(nèi)細胞因子產(chǎn)生
        (三)IL-10 介導了NC和 TOP1 抑制劑的抗炎作用
        (四)IL-10 影響了NC和 TOP1 抑制劑對促炎細胞因子的調(diào)控
    五、小結(jié)與討論
第四章 NC和 TOP1 抑制劑通過增強PI3K-AKT通路活化促進IL-10 表達
    一、引言
        (一)IL-10 表達的調(diào)控
    二、實驗材料
        (一)實驗細胞株
        (二)實驗試劑
        (三)儀器與設(shè)備
    三、實驗方法
        (一)細胞培養(yǎng)
        (二)mRNA降解測定和半衰期計算
        (三)細胞因子含量測定
        (四)Western Blots
        (五)單細胞凝膠電泳
        (六)小鼠模型中PI3K-Akt通路考察
    四、實驗結(jié)果
        (一)NC和 TOP1 抑制劑增強轉(zhuǎn)錄促進IL-10 表達
        (二)PI3K-Akt通路在NC調(diào)控IL-10 表達中發(fā)揮重要作用
        (三)NC和 TOP1 抑制劑增強LPS刺激下PI3K-Akt通路的活化
        (四)PI3K-Akt通路介導了NC和 TOP1 抑制劑對IL-10 的上調(diào)
        (五)NC通過活化PI3K-Akt通路緩解小鼠內(nèi)毒素血癥
        (六)NC和 TOP1 抑制劑通過PI3K-Akt通路抑制促炎細胞因子
    五、討論
第五章 NC和 TOP1 抑制劑通過激活DNA損傷應(yīng)答促進IL-10表達
    一、引言
        (一)TOP1 抑制劑調(diào)控機制
        (二)DNA損傷應(yīng)答
    二、實驗材料
        (一)實驗細胞株
        (二)實驗試劑
        (三)儀器與設(shè)備
    三、實驗方法
        (一)細胞培養(yǎng)
        (二)細胞因子含量測定
        (三)Western Blots
        (四)單細胞凝膠電泳
    四、實驗結(jié)果
        (一)NC和 TOP1 抑制劑調(diào)控IL-10 的可逆性考察
        (二)NC在無毒劑量下引起DNA損傷
        (三)NC和 TOP1 抑制劑激活DNA損傷應(yīng)答
        (四)阻斷DNA損傷應(yīng)答會影響NC和 TOP1 抑制劑的藥效
    五、討論
總結(jié)與討論
參考文獻
附錄
文獻綜述
    參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Topoisomerase I in Human Disease Pathogenesis and Treatments[J]. Min Li,Yilun Liu.  Genomics,Proteomics ＆ Bioinformatics. 2016(03)
[2]氯化兩面針堿的研究近況[J]. 劉麗敏,劉華鋼.  時珍國醫(yī)國藥. 2007(01)

博士論文
[1]天然產(chǎn)物白首烏二苯酮的神經(jīng)保護作用和兩面針堿的免疫調(diào)控作用機制研究[D]. 岳榮彩.第二軍醫(yī)大學 2013



本文編號：3732095