發(fā)布時間：2022-12-11 18:47

　　目的:在本研究中,我們將關(guān)注益氣除痰方抑制EGFR-TKIs獲得性耐藥的作用,以及探討其抑制獲得性耐藥的潛在分子機(jī)制。方法:第一部分:（1）運用XTT實驗檢測益氣除痰方單用或者聯(lián)合吉非替尼,在EGFR突變的人源非小細(xì)胞肺癌耐藥細(xì)胞系H1975以及H1650上,對細(xì)胞活力以及耐藥性的影響。（2）通過Ed U實驗檢測益氣除痰方單用或者聯(lián)合吉非替尼對EGFR突變的人源非小細(xì)胞肺癌耐藥細(xì)胞系H1975細(xì)胞增殖的影響。（3）通過流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期實驗,考察益氣除痰方和吉非替尼對EGFR突變的人源非小細(xì)胞肺癌耐藥細(xì)胞系H1975以及H1650細(xì)胞周期的影響。（4）采用流式細(xì)胞術(shù)檢測蛋白實驗,考察益氣除痰方聯(lián)合吉非替尼對EGFR突變的人源非小細(xì)胞肺癌耐藥細(xì)胞系H1975以及H1650的PI3K/Akt/m TOR通路及自噬的主要蛋白PI3K、Akt、m TOR、LC3A和LC3B的影響。（5）采用m TOR抑制劑、自噬激動劑,驗證益氣除痰方的作用效果和作用靶點。第二部分:（1）運用轉(zhuǎn)錄組測序的方法檢測益氣除痰方對EGFR突變的人源非小細(xì)胞肺癌耐藥細(xì)胞系H1975差異基因表達(dá)的影響。（2）運用基因... 

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第一章 文獻(xiàn)研究
    1.1 肺癌流行病學(xué)研究
    1.2 EGFR-TKIs的作用機(jī)理
    1.3 EGFR-TKIs獲得性耐藥定義與機(jī)制
        1.3.1 EGFR-TKIs獲得性耐藥的定義
        1.3.2 EGFR-TKIs獲得性耐藥的機(jī)制
    1.4 中醫(yī)藥在治療EGFR-TKIs耐藥中的作用
        1.4.1 中藥單體或單藥與EGFR-TKIs獲得性耐藥的研究
        1.4.2 中成藥或中藥時方與EGFR-TKIs獲得性耐藥的研究
        1.4.3 益氣除痰方與EGFR-TKIs獲得性耐藥的研究
第二章 細(xì)胞實驗
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗藥品
        2.1.2 細(xì)胞來源
        2.1.3 實驗試劑
        2.1.4 實驗儀器
        2.1.5 溶液的配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 H1975和H1650細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.2 XTT實驗
        2.2.3 EdU實驗
        2.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期
        2.2.5 流式細(xì)胞術(shù)測定蛋白含量
        2.2.6 統(tǒng)計分析
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 益氣除痰方對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞活力和耐藥性的影響
        2.3.2 益氣除痰方對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期的影響
        2.3.3 益氣除痰方對非小細(xì)胞肺癌PI3K/Akt/m TOR通路及自噬的影響
        2.3.4 益氣除痰方作用靶點的進(jìn)一步驗證
    2.4 小結(jié)與討論
第二章 轉(zhuǎn)錄組測序
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗藥品
        3.1.2 細(xì)胞來源
        3.1.3 實驗試劑
        3.1.4 實驗儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 H1975細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.2.2 RNA提取
        3.2.3 RNA測序
        3.2.4 數(shù)據(jù)處理和功能注釋
        3.2.5 統(tǒng)計分析
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 益氣除痰方對非小細(xì)胞肺癌差異基因表達(dá)的影響
        3.3.2 益氣除痰方對非小細(xì)胞肺癌影響的功能富集分析
        3.3.3 益氣除痰方干預(yù)非小細(xì)胞肺癌分子通路的潛在靶點
    3.4 小結(jié)與討論
第四章 動物實驗
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗藥品
        4.1.2 動物來源
        4.1.3 細(xì)胞來源
        4.1.4 實驗試劑
        4.1.5 實驗儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 H1975和H1650細(xì)胞的培養(yǎng)
        4.2.2 益氣除痰方水提物的制備
        4.2.3 益氣除痰方動物飼料的制備
        4.2.4 裸鼠非小細(xì)胞肺癌耐藥移植瘤模型的建立
        4.2.5 HE染色實驗
        4.2.6 Western blot實驗
        4.2.7 統(tǒng)計分析
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 益氣除痰方對荷瘤裸鼠體重和瘤積的影響
        4.3.2 益氣除痰方對荷瘤裸鼠瘤重的影響
        4.3.3 益氣除痰方對荷瘤裸鼠腫瘤形態(tài)學(xué)的影響
        4.3.4 益氣除痰方對PI3K/Akt/m TOR通路及自噬的影響
    4.4 小結(jié)與討論
結(jié)語
參考文獻(xiàn)
附錄
在校期間發(fā)表論文情況
致謝
統(tǒng)計學(xué)審核證明


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]益氣除痰方防治化療相關(guān)性疲勞的療效觀察[J]. 關(guān)潔珊,歐陽明子,肖志偉,林麗珠,曾科學(xué).  遼寧中醫(yī)雜志. 2016(06)
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[6]益氣除痰方含藥血清對順鉑耐藥肺癌細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期的影響[J]. 張恩欣,周岱翰,侯超.  山東醫(yī)藥. 2016(06)
[7]大黃素逆轉(zhuǎn)非小細(xì)胞肺癌EGFR-TKI耐藥的機(jī)制研究[J]. 歐陽學(xué)農(nóng),房文錚,吳淡森,林少琴,陳娟,余宗陽.  臨床腫瘤學(xué)雜志. 2014(11)
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[9]益氣除痰方調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)抑制H1650肺癌生長的研究[J]. 孫玲玲,方若鳴,張景濤,林麗珠.  廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報. 2014(04)
[10]益氣化痰法為主中醫(yī)藥治療方案對老年非小細(xì)胞肺癌中位生存期的影響:一項多中心、前瞻性臨床隊列研究[J]. 周岱翰,林麗珠,田華琴,吳萬垠,賈英杰,張軍一,劉魁鳳,鄧力,胡作為,徐天舒,謝強,鄧運宗,林清,謝德榮,王樹堂.  世界中醫(yī)藥. 2014(07)

碩士論文
[1]益氣除痰方維持治療Ⅲ-Ⅳ期非小細(xì)胞肺癌的隊列研究[D]. 黎智燊.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 2016
[2]益氣除痰法聯(lián)合TKI治療晚期非小細(xì)胞肺癌EGFR突變患者的生存質(zhì)量研究[D]. 林寶琪（Li Baoqi）.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 2015
[3]益氣除痰方對中晚期肺癌機(jī)體免疫功能的影響及誘導(dǎo)失巢凋亡相關(guān)機(jī)制的研究[D]. 宋妮.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 2010



本文編號：3719305