目的:在本研究中,我們將關(guān)注益氣除痰方抑制EGFR-TKIs獲得性耐藥的作用,以及探討其抑制獲得性耐藥的潛在分子機(jī)制。方法:第一部分:（1）運(yùn)用XTT實(shí)驗(yàn)檢測益氣除痰方單用或者聯(lián)合吉非替尼,在EGFR突變的人源非小細(xì)胞肺癌耐藥細(xì)胞系H1975以及H1650上,對細(xì)胞活力以及耐藥性的影響。（2）通過Ed U實(shí)驗(yàn)檢測益氣除痰方單用或者聯(lián)合吉非替尼對EGFR突變的人源非小細(xì)胞肺癌耐藥細(xì)胞系H1975細(xì)胞增殖的影響。（3）通過流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn),考察益氣除痰方和吉非替尼對EGFR突變的人源非小細(xì)胞肺癌耐藥細(xì)胞系H1975以及H1650細(xì)胞周期的影響。（4）采用流式細(xì)胞術(shù)檢測蛋白實(shí)驗(yàn),考察益氣除痰方聯(lián)合吉非替尼對EGFR突變的人源非小細(xì)胞肺癌耐藥細(xì)胞系H1975以及H1650的PI3K/Akt/m TOR通路及自噬的主要蛋白PI3K、Akt、m TOR、LC3A和LC3B的影響。（5）采用m TOR抑制劑、自噬激動劑,驗(yàn)證益氣除痰方的作用效果和作用靶點(diǎn)。第二部分:（1）運(yùn)用轉(zhuǎn)錄組測序的方法檢測益氣除痰方對EGFR突變的人源非小細(xì)胞肺癌耐藥細(xì)胞系H1975差異基因表達(dá)的影響。（2）運(yùn)用基因... 

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第一章 文獻(xiàn)研究
    1.1 肺癌流行病學(xué)研究
    1.2 EGFR-TKIs的作用機(jī)理
    1.3 EGFR-TKIs獲得性耐藥定義與機(jī)制
        1.3.1 EGFR-TKIs獲得性耐藥的定義
        1.3.2 EGFR-TKIs獲得性耐藥的機(jī)制
    1.4 中醫(yī)藥在治療EGFR-TKIs耐藥中的作用
        1.4.1 中藥單體或單藥與EGFR-TKIs獲得性耐藥的研究
        1.4.2 中成藥或中藥時方與EGFR-TKIs獲得性耐藥的研究
        1.4.3 益氣除痰方與EGFR-TKIs獲得性耐藥的研究
第二章 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)藥品
        2.1.2 細(xì)胞來源
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.5 溶液的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 H1975和H1650細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.2 XTT實(shí)驗(yàn)
        2.2.3 EdU實(shí)驗(yàn)
        2.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期
        2.2.5 流式細(xì)胞術(shù)測定蛋白含量
        2.2.6 統(tǒng)計分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 益氣除痰方對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞活力和耐藥性的影響
        2.3.2 益氣除痰方對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期的影響
        2.3.3 益氣除痰方對非小細(xì)胞肺癌PI3K/Akt/m TOR通路及自噬的影響
        2.3.4 益氣除痰方作用靶點(diǎn)的進(jìn)一步驗(yàn)證
    2.4 小結(jié)與討論
第二章 轉(zhuǎn)錄組測序
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)藥品
        3.1.2 細(xì)胞來源
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 H1975細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.2.2 RNA提取
        3.2.3 RNA測序
        3.2.4 數(shù)據(jù)處理和功能注釋
        3.2.5 統(tǒng)計分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 益氣除痰方對非小細(xì)胞肺癌差異基因表達(dá)的影響
        3.3.2 益氣除痰方對非小細(xì)胞肺癌影響的功能富集分析
        3.3.3 益氣除痰方干預(yù)非小細(xì)胞肺癌分子通路的潛在靶點(diǎn)
    3.4 小結(jié)與討論
第四章 動物實(shí)驗(yàn)
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)藥品
        4.1.2 動物來源
        4.1.3 細(xì)胞來源
        4.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.5 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 H1975和H1650細(xì)胞的培養(yǎng)
        4.2.2 益氣除痰方水提物的制備
        4.2.3 益氣除痰方動物飼料的制備
        4.2.4 裸鼠非小細(xì)胞肺癌耐藥移植瘤模型的建立
        4.2.5 HE染色實(shí)驗(yàn)
        4.2.6 Western blot實(shí)驗(yàn)
        4.2.7 統(tǒng)計分析
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 益氣除痰方對荷瘤裸鼠體重和瘤積的影響
        4.3.2 益氣除痰方對荷瘤裸鼠瘤重的影響
        4.3.3 益氣除痰方對荷瘤裸鼠腫瘤形態(tài)學(xué)的影響
        4.3.4 益氣除痰方對PI3K/Akt/m TOR通路及自噬的影響
    4.4 小結(jié)與討論
結(jié)語
參考文獻(xiàn)
附錄
在校期間發(fā)表論文情況
致謝
統(tǒng)計學(xué)審核證明


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]益氣除痰方維持治療Ⅲ-Ⅳ期非小細(xì)胞肺癌的隊(duì)列研究[D]. 黎智燊.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 2016
[2]益氣除痰法聯(lián)合TKI治療晚期非小細(xì)胞肺癌EGFR突變患者的生存質(zhì)量研究[D]. 林寶琪（Li Baoqi）.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 2015
[3]益氣除痰方對中晚期肺癌機(jī)體免疫功能的影響及誘導(dǎo)失巢凋亡相關(guān)機(jī)制的研究[D]. 宋妮.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 2010



本文編號：3719305