目的:目前非酒精性脂肪性肝�。╪on-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）的發(fā)病率日益增長。在發(fā)達國家,80%患有肥胖或糖尿病的成年人同時患有NAFLD^[1]。由于NAFLD與胰島素抵抗、肥胖、血脂異常等密切相關(guān),其被認為是代謝綜合征在肝臟的臨床表現(xiàn)^[2]。NAFLD包括單純性脂肪肝、脂肪性肝炎及脂肪性肝炎相關(guān)肝硬化,其可發(fā)展為肝癌^[3]。而即使是單純性脂肪肝,目前也已經(jīng)證實與心腦血管疾病有關(guān),影響人們生存質(zhì)量。因此NAFLD的防治已成為當今醫(yī)學界所關(guān)注的熱點。NAFLD的發(fā)病主要與過多的脂質(zhì)沉積在肝臟有關(guān)。由于胰島素抵抗,肝細胞攝入過多的自由脂肪酸（free fatty acid,FFA）致使肝細胞發(fā)生脂肪變性;隨后引起的氧化應(yīng)激反應(yīng)、脂質(zhì)過氧化及其異常細胞因子的作用致使肝小葉局部炎性變化而形成脂肪性肝炎。因此NAFLD的實質(zhì)是過多脂質(zhì)沉積在肝臟導致肝臟一系列的變化。目前認為自噬與肝內(nèi)脂質(zhì)沉積密切相關(guān)。自噬是生物體內(nèi)一種相對固定的對本身進行分解代謝的過程。自噬可“自我清除”細胞內(nèi)一些... 

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分:利拉魯肽對脂毒性肝損傷自噬的影響
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料與試劑
            2.1.1 實驗材料
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器設(shè)備
            2.1.4 主要溶液配制
        2.2 NAFLD動物模型建立,評估
            2.2.1 實驗動物的分組與NAFLD大鼠模型建立
            2.2.2 NAFLD大鼠模型評估方法
            2.2.3 標本采集
        2.3 細胞培養(yǎng)及分組
            2.3.1 細胞培養(yǎng)
            2.3.2 實驗分組
        2.4 指標檢測
            2.4.1 大鼠代謝指標
            2.4.2 透射電子顯微鏡檢測自噬
            2.4.3 MTT法檢測細胞存活率
            2.4.4 細胞內(nèi)甘油三酯(TG)測定
            2.4.5 Real-time RT-PCR方法檢測NAFLD大鼠肝臟組織及HepG2 細胞LC3II、Beclin1、Atg7 mRNA水平變化
            2.4.6 Western blot方法檢測LC3、Beclin1、Atg7 蛋白表達水平
        2.5 統(tǒng)計學分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 NAFLD大鼠模型的建立
        3.2 利拉魯肽對大鼠肝臟大體及組織形態(tài)學的影響
            3.2.1 大鼠肝臟大體形態(tài)學變化
            3.2.2 大鼠肝臟組織形態(tài)學變化
        3.3 利拉魯肽對NAFLD大鼠體重、肝指數(shù)及血清生化指標的影響
        3.4 利拉魯肽對HepG2 細胞脂毒性損傷的影響
        3.5 利拉魯肽對大鼠肝組織中自噬小體的影響
        3.6 利拉魯肽干預NAFLD大鼠自噬相關(guān)蛋白m RNA及蛋白的表達
            3.6.1 自噬相關(guān)蛋白LC3 mRNA及蛋白的表達
            3.6.2 自噬相關(guān)蛋白Beclin1 mRNA及蛋白的表達
            3.6.3 自噬相關(guān)蛋白Atg7 mRNA及蛋白的表達
        3.7 利拉魯肽對HepG2 細胞自噬效應(yīng)的影響
            3.7.1 自噬相關(guān)蛋白LC3 mRNA及蛋白的檢測
            3.7.2 自噬相關(guān)蛋白Beclin1 mRNA及蛋白的檢測
            3.7.3 自噬相關(guān)蛋白Atg7 mRNA及蛋白的檢測
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分:利拉魯肽通過AMPK通路對自噬的干預研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 細胞培養(yǎng)
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器設(shè)備
            2.1.4 主要試劑配制
        2.2 實驗方法及指標檢測
            2.2.1 細胞培養(yǎng)
            2.2.2 實驗分組
            2.2.3 Western blot方法檢測自噬相關(guān)蛋白表達水平及AMPK相關(guān)通路蛋白水平
        2.3 統(tǒng)計學分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 在AMPK通路抑制的情況下利拉魯肽對肝細胞自噬作用的影響
            3.1.1 自噬相關(guān)蛋白LC3 蛋白的檢測
            3.1.2 自噬相關(guān)蛋白Beclin1 的檢測
            3.1.3 自噬相關(guān)蛋白Atg7 蛋白的檢測
        3.2 在AMPK通路抑制的情況下利拉魯肽對AMPK通路相關(guān)蛋白的作用
            3.2.1 在AMPK通路抑制的情況下利拉魯肽對p-AMPK/AMPK蛋白水平的影響
            3.2.2 在AMPK通路抑制的情況下利拉魯肽對細胞內(nèi)TSC1 蛋白的影響
            3.2.3 在AMPK通路抑制的情況下利拉魯肽對p-m TOR/mTOR水平的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Glucagon-like peptide-1 analogue prevents nonalcoholic steatohepatitis in non-obese mice[J]. Takaya Yamamoto,Yukiomi Nakade,Taeko Yamauchi,Yuji Kobayashi,Norimitsu Ishii,Tomohiko Ohashi,Kiyoaki Ito,Ken Sato,Yoshitaka Fukuzawa,Masashi Yoneda.  World Journal of Gastroenterology. 2016(08)
[2]Effects of glucagon-like peptide-1 receptor agonists on non-alcoholic fatty liver disease and inflammation[J]. Xing-Chun Wang,Aaron M Gusdon,Huan Liu,Shen Qu.  World Journal of Gastroenterology. 2014(40)
[3]Incretin based therapies:A novel treatment approach for non-alcoholic fatty liver disease[J]. Kristina Blaslov,Tomislav Bulum,Karin Zibar,Lea Duvnjak.  World Journal of Gastroenterology. 2014(23)
[4]GLP-1對非酒精性脂肪肝大鼠肝氧化應(yīng)激及TNF-α、TGF-β1的影響[J]. 高慧亭,徐麗姝,李東風,關(guān)麗嫦,鄧衛(wèi)平.  南方醫(yī)科大學學報. 2013(11)
[5]What about non-alcoholic fatty liver disease as a new criterion to define metabolic syndrome?[J]. Giovanni Tarantino,Carmine Finelli.  World Journal of Gastroenterology. 2013(22)
[6]What is the role of adiponectin in obesity related non-alcoholic fatty liver disease?[J]. Carmine Finelli,Giovanni Tarantino.  World Journal of Gastroenterology. 2013(06)



本文編號：3693602