最新的腫瘤數(shù)據(jù)統(tǒng)計顯示,在世界范圍內(nèi),肺癌是在男性繼前列腺癌,女性繼乳腺癌之后發(fā)病率第二,死亡率第一的惡性腫瘤。肺癌的發(fā)生是一個多步驟、多因素、多分子參與的復雜過程,目前對肺癌發(fā)生發(fā)展的分子機制仍不清楚。蛋白質是生命活動的主要執(zhí)行者,其表達豐度和功能異常與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關。研究證據(jù)表明,蛋白翻譯后泛素化修飾是調(diào)控蛋白質表達和活性的關鍵機制之一。與泛素化修飾相關的酶包括E1激活酶,E2結合酶,E3連接酶和去泛素酶,而去泛素化酶能夠將泛素分子特異性地從靶蛋白上水解下來,逆轉泛素化過程,在泛素化修飾中起著重要的作用。由于去泛素化酶種類及作用的復雜性,對于去泛素化酶在肺癌中的作用及其所涉及的多種機制研究仍需進一步探索。越來越多的證據(jù)發(fā)現(xiàn)很多去泛素化酶的表達在腫瘤中均發(fā)生改變,并且與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關。因此,從去泛素化酶的角度研究肺癌發(fā)生發(fā)展的分子機制,具有重要的臨床研究價值,可能為治療肺癌提供新的靶點。為了探究去泛素化酶在肺癌中是否存在異常表達及發(fā)揮重要功能,我們首先利用GEO數(shù)據(jù)庫比較去泛素化酶在83對肺癌與配對癌旁組織中的表達,結合體外的遷移,侵襲,增殖實驗的驗證,尋找與肺癌發(fā)... 

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
引言
第一部分 OTUB2 在肺癌中的功能研究
    前言
    1 材料與方法
        1.1 細胞系
        1.2 肺癌組織樣本
        1.3 主要試劑及檢測試劑盒
        1.4 主要儀器
        1.5 主要溶液配制
        1.6 引物序列
        1.7 siRNA序列
        1.8 抗體及所用比例
        1.9 臨床組織及細胞總RNA提取
        1.10 臨床組織及細胞總蛋白提取
        1.11 cDNA合成及Real time PCR
        1.12 Western blot實驗
        1.13 siRNA轉染
        1.14 質粒轉化擴增和提取
        1.15 慢病毒感染
        1.16 增殖實驗
        1.17 克隆形成實驗
        1.18 細胞體外侵襲和遷移實驗
        1.19 細胞損傷愈合實驗
        1.20 ECAR和 OCR
        1.21 葡萄糖檢測
        1.22 乳酸檢測
        1.23 統(tǒng)計學方法
    2 結果
        2.1 鑒定促進肺癌進展的去泛素化酶
        2.2 OTUB2 在肺癌組織中表達上調(diào),并且與臨床分期和腫瘤的轉移復發(fā)相關
        2.3 OTUB2 對肺癌細胞系體外增殖和克隆形成能力的影響
        2.4 OTUB2 對肺癌細胞系的體外侵襲與遷移能力的影響
        2.5 OTUB2 對肺癌細胞系的體外損傷愈合能力的影響
        2.6 OTUB2 對肺癌細胞糖酵解的影響
        2.7 OTUB2 對肺癌細胞的線粒體能量代謝的影響
        2.8 OTUB2 對肺癌細胞的葡萄糖吸收及乳酸產(chǎn)出的影響
        2.9 OTUB2 調(diào)控糖酵解相關酶和AKT/mTOR信號通路
    3 討論
    4 小結
第二部分 OTUB2 促進肺癌發(fā)生發(fā)展的分子機制研究
    前言
    1 材料與方法
        1.1 細胞系及實驗動物
        1.2 肺癌組織樣本
        1.3 主要試劑及檢測試劑盒
        1.4 主要儀器
        1.5 主要溶液配制
        1.6 引物序列
        1.7 siRNA序列
        1.8 抗體及所用比例
        1.9 細胞總RNA提取
        1.10 臨床組織蛋白和細胞總蛋白提取
        1.11 cDNA 合成及 Real time PCR
        1.12 Western Blot實驗
        1.13 siRNA轉染
        1.14 質粒轉化擴增和抽提
        1.15 慢病毒感染
        1.16 增殖實驗
        1.17 克隆形成實驗
        1.18 細胞體外侵襲和遷移實驗
        1.19 ECAR
        1.20 葡萄糖檢測
        1.21 乳酸檢測
        1.22 免疫共沉淀
        1.23 質譜
        1.24 體外泛素化實驗
        1.25 皮下肺癌移植瘤模型
        1.26 統(tǒng)計學方法
    2 結果
        2.1 OTUB2 直接與U2AF2 蛋白結合
        2.2 OTUB2 在蛋白水平調(diào)控U2AF2 的表達
        2.3 OTUB2 穩(wěn)定U2A2
        2.4 OTUB2對U2AF2 蛋白的泛素化修飾的機制研究
        2.5 U2AF2 對肺癌細胞的體外增殖,克隆形成和遷移侵襲能力的影響
        2.6 U2AF2 對肺癌細胞的糖酵解能力的影響
        2.7 U2AF2 對肺癌細胞中糖酵解相關酶和AKT/mTOR信號通路的影響
        2.8 GEO數(shù)據(jù)庫分析U2AF2 在肺癌組織中上調(diào)并與患者預后復發(fā)相關
        2.9 U2AF2 在肺癌組織中mRNA水平的表達
        2.10 OTUB2與U2AF2 在肺癌組織中蛋白水平水平的表達呈正相關
        2.11 OTUB2 促進肺癌細胞的皮下移植腫瘤生長
        2.12 OTUB2與U2AF2 降低肺癌細胞PGK1的mRNA水平表達
        2.13 OTUB2,U2AF2和PGK1 的高表達與肺癌患者的預后顯著相關
        2.14 OTUB2在NSCLC中的作用機制模式圖
    3 討論
    4 小結
總結
參考文獻
發(fā)表論文及獲獎情況



本文編號：3684842