目的:探索半枝蓮、白花蛇舌草、半枝蓮+白花蛇舌草提取物在體內(nèi)外水平上的抗肝細(xì)胞癌（HCC）活性、抗HBV活性及從circ RNAs調(diào)控角度,探討半白提取物對HCC生長的可能分子作用機(jī)制,為半白提取物治療HCC的作用機(jī)制研究提供理論基礎(chǔ)。方法:本研究采用完全隨機(jī)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)類型,1.分別通過乙醇加熱回流的方法制備半枝蓮、白花蛇舌草、半枝蓮+白花蛇舌草提取物,并進(jìn)行總黃酮及其活性成分木犀草素和芹菜素含量測定;2.通過CCK-8、平板克隆形成、流式細(xì)胞術(shù)、Transwell小室、細(xì)胞免疫熒光及裸鼠皮下接種Hep3B移植瘤模型等實(shí)驗(yàn),明確半白提取物對HBV相關(guān)性Hep G2.2.15和Hep3B細(xì)胞生長、侵襲、轉(zhuǎn)移、HBV活性及裸鼠移植瘤的影響;3.通過高通量測序技術(shù)對circ RNAs的差異表達(dá)進(jìn)行初步檢測,觀察半白提取物調(diào)控Hep3B細(xì)胞circ RNAs差異表達(dá)譜變化,應(yīng)用生物信息學(xué)方法預(yù)測靶基因、GO功能和KEGG信號通路,并構(gòu)建circ RNA-mi RNA-gene共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)圖。結(jié)果:1.半枝蓮、白花蛇舌草及半枝蓮+白花蛇舌草提取物的總黃酮含量分別為（5.69±0.34）%、（2.4... 

【文章來源】：上海中醫(yī)藥大學(xué)上海市

【文章頁數(shù)】：135 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
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中文摘要
Abstract
引言
第一部分 半白提取物對肝細(xì)胞癌體內(nèi)外生長的影響
    1 材料與方法
        1.1 藥物、細(xì)胞株和動(dòng)物
        1.2 主要試劑和溶液配制
        1.3 主要儀器和耗材
        1.4 半枝蓮和白花蛇舌草乙醇提取物的制備
        1.5 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.6 CCK-8實(shí)驗(yàn)
        1.7 平板克隆形成實(shí)驗(yàn)
        1.8 細(xì)胞周期
        1.9 細(xì)胞凋亡
        1.10 Western Blot測定相關(guān)蛋白的表達(dá)
        1.11 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
        1.12 Transwell小室遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)
        1.13 細(xì)胞形態(tài)和自噬小體超微結(jié)構(gòu)的觀察
        1.14 免疫熒光檢測自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)
        1.15 RT-PCR檢測細(xì)胞中HBsAg、HBV-DNA的表達(dá)
        1.16 裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)
        1.17 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    2 結(jié)果
        2.1 半枝蓮和白花蛇舌草乙醇提取物的制備
        2.2 半白提取物對HepG2.2.15和Hep3B細(xì)胞生長的影響
        2.3 半白提取物對細(xì)胞平板克隆的影響
        2.4 半白提取物對細(xì)胞周期的影響
        2.5 半白提取物對細(xì)胞凋亡的影響
        2.6 半白提取物對細(xì)胞增殖和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
        2.7 半白提取物對細(xì)胞劃痕愈合的影響
        2.8 半白提取物對細(xì)胞Transwell遷移的影響
        2.9 半白提取物對細(xì)胞Transwell侵襲的影響
        2.10 半白提取物對細(xì)胞形態(tài)和自噬體超微結(jié)構(gòu)的影響
        2.11 半白提取物對細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
        2.12 半白提取物對裸鼠致瘤性的影響
        2.13 半白提取物對細(xì)胞、肝組織、血清和移植瘤中HBV活性的影響
第二部分 半白提取物對circRNAs差異表達(dá)的影響
    1 材料與方法
        1.1 藥物和細(xì)胞株
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
        1.4 樣品及分組信息
        1.5 樣品準(zhǔn)備
        1.6 文庫構(gòu)建
        1.7 簇生成和測序
        1.8 生物信息學(xué)分析
    2 結(jié)果
        2.1 circRNAs轉(zhuǎn)錄組比對
        2.2 差異circRNAs表達(dá)譜和鑒定
        2.3 差異circRNAs聚類分析
        2.4 差異表達(dá)circRNAs來源基因GO功能分析
        2.5 差異表達(dá)circRNAs來源基因KEGG通路分析
        2.6 circRNA-miRNA相互作用預(yù)測
        2.7 circRNA-miRNA-gene共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建
        2.8 circRNAs可視化
討論
    1 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對肝細(xì)胞癌的認(rèn)識
        1.1 流行病學(xué)研究
        1.2 發(fā)病機(jī)理
        1.3 肝細(xì)胞癌的治療
    2 中醫(yī)藥抗肝細(xì)胞癌研究概述
        2.1 中醫(yī)藥抗肝細(xì)胞癌機(jī)制的研究
        2.2 中醫(yī)藥抗肝細(xì)胞癌的現(xiàn)狀
    3 本次研究的理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)
        3.1 半枝蓮治療肝細(xì)胞癌的臨床及實(shí)驗(yàn)研究
        3.2 白花蛇舌草治療肝細(xì)胞癌的臨床及實(shí)驗(yàn)研究
        3.3 半枝蓮和白花蛇舌草抗肝癌的研究基礎(chǔ)
        3.4 CircRNAs對肝細(xì)胞癌的研究意義
        3.5 從CircRNAs角度研究半白提取物影響HCC生長的背景
    4 本次研究結(jié)果分析
        4.1 半白提取物對肝細(xì)胞癌體內(nèi)外生長的結(jié)果分析
        4.2 半白提取物對circRNAs差異表達(dá)的結(jié)果分析
    5 不足和展望
創(chuàng)新點(diǎn)
結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄一 :HepG2.2.15細(xì)胞部分結(jié)果
    附錄二 :文庫制備的接頭和引物
    附錄三 :綜述 半枝蓮和白花蛇舌草抗肝細(xì)胞癌作用及機(jī)制的研究進(jìn)展
        參考文獻(xiàn)
    附錄四 :在校期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文、獲獎(jiǎng)情況及參加學(xué)術(shù)會(huì)議


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]白花蛇舌草和半枝蓮總黃酮提取工藝優(yōu)化及抗氧化性研究[J]. 張蜀艷,蒲建萍,李政.  食品研究與開發(fā). 2019(04)
[2]白花蛇舌草中黃酮、多酚、多糖提取工藝及抗氧化研究[J]. 楊新周,田孟華,楊子仙,馬艷粉,田先嬌.  化學(xué)研究與應(yīng)用. 2019(01)
[3]原發(fā)性肝癌證型分布及用藥分析[J]. 錢麗麗,趙向麗,馮曉軍,黃雪,張樹輝.  河南中醫(yī). 2018(08)
[4]姜黃素通過活化PI3K/Akt信號通路逆轉(zhuǎn)肝癌耐藥細(xì)胞株Bel7402/ADR的耐藥性[J]. 魏蔚,劉玉華.  中國老年學(xué)雜志. 2018(12)
[5]半枝蓮水提液和去納米顆粒水提液在體內(nèi)外抗肝腫瘤作用的對比研究[J]. 黃新偉,鄭建華,陳文濱,程金生.  中國醫(yī)院用藥評價(jià)與分析. 2018(05)
[6]一貫煎治療肝癌的分子機(jī)制生物信息學(xué)分析[J]. 單思,謝斌,嚴(yán)小軍,劉紅寧.  中華中醫(yī)藥雜志. 2018(05)
[7]姜黃素聯(lián)合聲光動(dòng)力療法對人肝癌HepG2細(xì)胞的作用及機(jī)制研究[J]. 朱文婷,許桐瑛,李隆敏,王玉鳳,楊維,胡佳荷,謝蕊,白玉賢.  中國激光醫(yī)學(xué)雜志. 2018(02)
[8]中藥半枝蓮有效成分抗腫瘤作用機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 吳曉龍,崔思遠(yuǎn),王琰,徐瑞榮.  中華中醫(yī)藥雜志. 2018(04)
[9]央芪膏外敷配合深部熱療對中晚期肝癌患者生存質(zhì)量、免疫功能及Survivin蛋白的影響[J]. 唐萬和,王熙,余智勇,周勇,孫易娜,何威華,佘茁萃,盧舜,王紅榮,李娜,唐思思.  中醫(yī)學(xué)報(bào). 2018(02)
[10]白花蛇舌草對肝癌的作用機(jī)制研究[J]. 陳晨,張吉菲,房鑫.  河南中醫(yī). 2018(01)

博士論文
[1]索拉菲尼聯(lián)合薏苡仁油治療肝細(xì)胞肝癌的療效及機(jī)制研究[D]. 陳琳.蘭州大學(xué) 2018
[2]基于c-FLIP和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路相互作用探討解毒方改善索拉非尼耐藥的作用機(jī)制[D]. 劉棟.第二軍醫(yī)大學(xué) 2017
[3]小柴胡湯調(diào)控miR-122逆轉(zhuǎn)肝癌多藥耐藥的作用機(jī)制[D]. 趙錦燕.福建中醫(yī)藥大學(xué) 2016
[4]人肝細(xì)胞癌發(fā)生機(jī)制的研究[D]. 徐立斌.中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué) 2005

碩士論文
[1]乙肝病毒X蛋白對肝癌HepG2細(xì)胞DNA雙鏈斷裂修復(fù)的影響[D]. 劉慶.華中科技大學(xué) 2011



本文編號：3643391