目的:（1）通過構建骨關節(jié)炎軟骨細胞模型并給予不同濃度青蒿琥酯干預探究青蒿琥酯對軟骨細胞分解代謝、炎癥反應、凋亡及NF-κB信號通路的影響。（2）通過構建骨關節(jié)炎小鼠模型并給予不同劑量青蒿琥酯干預探討青蒿琥酯對骨關節(jié)炎軟骨下骨中OPG/RANKL/RANK通路及TGF-β/Smad2/3通路的影響。（3）探究青蒿琥酯對骨關節(jié)炎軟骨下骨異常增生的CD31^hiEmcn^hi血管的影響。方法:（1）1.ATDC5細胞經ITS誘導后,用阿爾新藍染色和qRT-PCR測定ATDC5細胞成軟骨水平。2.通過CCK-8和PE-Annexin V/7-ADD雙染評估青蒿琥酯對正常的和IL-1β干預的軟骨細胞活性影響。3.通過RT-PCR和Western Blot檢測青蒿琥酯對IL-1β干預的軟骨細胞中分解代謝、炎癥反應及細胞凋亡的影響。4.通過Western Blot評估青蒿琥酯對NF-κB通路的影響。（2）1.預實驗設立6組,即假手術組,ACLT+安慰劑組,ACLT+4種計量的青蒿琥酯組。術后評估軟骨退變情況確定最佳用藥劑量。正式試驗設立3組,即假手術組,AL... 

【文章來源】：新疆醫(yī)科大學新疆維吾爾自治區(qū)

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【學位級別】：博士

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阿爾新藍染色

新疆醫(yī)科大學博士學位論文26圖1-1阿爾新藍染色Fig.1-1Alcianbluestaining圖1-2qPCR定量不同誘導時間點Ⅱ型膠原與Ⅹ型膠原的表達水平Fig.1-2ExpressionlevelsofTypeIICollagenandTypeXCollagendetectedbyqPCRatdifferenttimpoints2.2青蒿琥酯對軟骨樣ATDC5細胞活性的影響本研究通過CCK-8實驗分析不同干預措施對軟骨樣ATDC5細胞活性的影響。首先，我們進行單獨用藥對細胞活性的影響評估。實驗結果表明，青蒿琥酯的藥物濃度在3.125-12.5μM劑量范圍內，軟骨樣ATDC5細胞活性與無藥物干預的對照組相比差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。當青蒿琥酯的濃度升高至25μM和50μM時，軟骨樣ATDC5細胞活性急劇下降，且與無藥物干預的對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）（圖1-3）。隨后，我們進行青蒿琥酯對IL-1β干預的軟骨樣ATDC5細胞活性的影響評估。實驗結果發(fā)現(xiàn)，與正常對照組相比，IL-1β明顯抑制了軟骨樣

27ATDC5的細胞活性。在此基礎上，隨著不同濃度青蒿琥酯（藥物劑量在3.125-12.5μM范圍內）的干預，軟骨樣ATDC5細胞活性隨藥物梯度的增加而增加。然而，當青蒿琥酯濃度達到25μM時，細胞活性出現(xiàn)不升反降的抑制現(xiàn)象，并且在50μM時，細胞活性將至最低（圖1-4）。根據(jù)以上實驗結果，我們選取3.125μM，6.25μM和12.5μM青蒿琥酯進行后續(xù)實驗。圖1-3青蒿琥酯對ATDC5軟骨樣細胞活性的影響Fig.1-3EffectofARTonthecellviabilityofchondrocyticATDC5cells**對照組與青蒿琥酯組相比，P<0.01**ThecomparisonbetweenTGF-β1groupandcontrolgroup,P<0.01圖1-4不同濃度青蒿琥酯與IL-1β聯(lián)合培養(yǎng)24小時后的ATDC5軟骨樣細胞活性Fig.1-4ChondrocyticATDC5cellsweretreatedwithIL-1βplusARTatdifferentconcentrationsfor24h#對照組與IL-1β組相比，P<0.05；*IL-1β組與青蒿琥酯組相比，P<0.05；**IL-1β組與青蒿琥酯組相比，P<0.01#ThecomparisonbetweencontrolgroupandIL-1βgroup,P<0.05;*ThecomparisonbetweenIL-1βgroupandARTgroup,P<0.05;**ThecomparisonbetweenIL-1βgroupandARTgroup,P<0.01新疆醫(yī)科大學博士學位論文

【參考文獻】：
期刊論文
[1]血清基質金屬蛋白酶3水平與早期類風濕關節(jié)炎病情評估[J]. 劉夢珂,王露辰,胡凡磊.  北京大學學報(醫(yī)學版). 2018(06)



本文編號：3627030