目的:（1）通過構(gòu)建骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞模型并給予不同濃度青蒿琥酯干預(yù)探究青蒿琥酯對(duì)軟骨細(xì)胞分解代謝、炎癥反應(yīng)、凋亡及NF-κB信號(hào)通路的影響。（2）通過構(gòu)建骨關(guān)節(jié)炎小鼠模型并給予不同劑量青蒿琥酯干預(yù)探討青蒿琥酯對(duì)骨關(guān)節(jié)炎軟骨下骨中OPG/RANKL/RANK通路及TGF-β/Smad2/3通路的影響。（3）探究青蒿琥酯對(duì)骨關(guān)節(jié)炎軟骨下骨異常增生的CD31^hiEmcn^hi血管的影響。方法:（1）1.ATDC5細(xì)胞經(jīng)ITS誘導(dǎo)后,用阿爾新藍(lán)染色和qRT-PCR測(cè)定ATDC5細(xì)胞成軟骨水平。2.通過CCK-8和PE-Annexin V/7-ADD雙染評(píng)估青蒿琥酯對(duì)正常的和IL-1β干預(yù)的軟骨細(xì)胞活性影響。3.通過RT-PCR和Western Blot檢測(cè)青蒿琥酯對(duì)IL-1β干預(yù)的軟骨細(xì)胞中分解代謝、炎癥反應(yīng)及細(xì)胞凋亡的影響。4.通過Western Blot評(píng)估青蒿琥酯對(duì)NF-κB通路的影響。（2）1.預(yù)實(shí)驗(yàn)設(shè)立6組,即假手術(shù)組,ACLT+安慰劑組,ACLT+4種計(jì)量的青蒿琥酯組。術(shù)后評(píng)估軟骨退變情況確定最佳用藥劑量。正式試驗(yàn)設(shè)立3組,即假手術(shù)組,AL... 

【文章來源】：新疆醫(yī)科大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：134 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

阿爾新藍(lán)染色

新疆醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文26圖1-1阿爾新藍(lán)染色Fig.1-1Alcianbluestaining圖1-2qPCR定量不同誘導(dǎo)時(shí)間點(diǎn)Ⅱ型膠原與Ⅹ型膠原的表達(dá)水平Fig.1-2ExpressionlevelsofTypeIICollagenandTypeXCollagendetectedbyqPCRatdifferenttimpoints2.2青蒿琥酯對(duì)軟骨樣ATDC5細(xì)胞活性的影響本研究通過CCK-8實(shí)驗(yàn)分析不同干預(yù)措施對(duì)軟骨樣ATDC5細(xì)胞活性的影響。首先，我們進(jìn)行單獨(dú)用藥對(duì)細(xì)胞活性的影響評(píng)估。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，青蒿琥酯的藥物濃度在3.125-12.5μM劑量范圍內(nèi)，軟骨樣ATDC5細(xì)胞活性與無藥物干預(yù)的對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。當(dāng)青蒿琥酯的濃度升高至25μM和50μM時(shí)，軟骨樣ATDC5細(xì)胞活性急劇下降，且與無藥物干預(yù)的對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）（圖1-3）。隨后，我們進(jìn)行青蒿琥酯對(duì)IL-1β干預(yù)的軟骨樣ATDC5細(xì)胞活性的影響評(píng)估。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常對(duì)照組相比，IL-1β明顯抑制了軟骨樣

27ATDC5的細(xì)胞活性。在此基礎(chǔ)上，隨著不同濃度青蒿琥酯（藥物劑量在3.125-12.5μM范圍內(nèi)）的干預(yù)，軟骨樣ATDC5細(xì)胞活性隨藥物梯度的增加而增加。然而，當(dāng)青蒿琥酯濃度達(dá)到25μM時(shí)，細(xì)胞活性出現(xiàn)不升反降的抑制現(xiàn)象，并且在50μM時(shí)，細(xì)胞活性將至最低（圖1-4）。根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們選取3.125μM，6.25μM和12.5μM青蒿琥酯進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。圖1-3青蒿琥酯對(duì)ATDC5軟骨樣細(xì)胞活性的影響Fig.1-3EffectofARTonthecellviabilityofchondrocyticATDC5cells**對(duì)照組與青蒿琥酯組相比，P<0.01**ThecomparisonbetweenTGF-β1groupandcontrolgroup,P<0.01圖1-4不同濃度青蒿琥酯與IL-1β聯(lián)合培養(yǎng)24小時(shí)后的ATDC5軟骨樣細(xì)胞活性Fig.1-4ChondrocyticATDC5cellsweretreatedwithIL-1βplusARTatdifferentconcentrationsfor24h#對(duì)照組與IL-1β組相比，P<0.05；*IL-1β組與青蒿琥酯組相比，P<0.05；**IL-1β組與青蒿琥酯組相比，P<0.01#ThecomparisonbetweencontrolgroupandIL-1βgroup,P<0.05;*ThecomparisonbetweenIL-1βgroupandARTgroup,P<0.05;**ThecomparisonbetweenIL-1βgroupandARTgroup,P<0.01新疆醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]血清基質(zhì)金屬蛋白酶3水平與早期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病情評(píng)估[J]. 劉夢(mèng)珂,王露辰,胡凡磊.  北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2018(06)



本文編號(hào)：3627030