近年來,在諸多癌癥中均觀察到血清N-聚糖的異常變化,表明血清N-聚糖能夠作為癌癥診斷的新型生物標(biāo)志物。然而,鑒于天然N-聚糖的性質(zhì),在N-聚糖標(biāo)志物研究中仍面臨諸多挑戰(zhàn)。因此,本文建立了多種衍生策略用于N-聚糖的定性定量分析,并對特異性癌癥標(biāo)志物進(jìn)行篩選。主要研究內(nèi)容如下:將甲胺化和還原化雙衍生策略同nano LC-ESI-MS相結(jié)合用于血清N-聚糖異構(gòu)體的分離分析。通過對胰腺癌和健康樣本血清N-聚糖異構(gòu)體進(jìn)行統(tǒng)計,篩選出25個具有顯著差異的異構(gòu)體,其中4個異構(gòu)體的AUC值超過0.90,表現(xiàn)出較高的診斷準(zhǔn)確度。另外,這些異構(gòu)體還被用于胰腺癌早期診斷研究。與數(shù)據(jù)歸一化不同,本文將d0/d5-苯甲酰氯和甲胺化共衍生策略用于N-聚糖定量分析,更直觀地展現(xiàn)N-聚糖的變化。利用微波輔助快速酶切實現(xiàn)糖胺的快速釋放,有效縮短了分析流程。此外,天然酸性N-聚糖在MALDI-MS中會發(fā)生源內(nèi)或源后裂解,而甲胺化不僅能穩(wěn)固唾液酸,還能提高N-聚糖的信號響應(yīng),進(jìn)而實現(xiàn)中性糖和酸性糖的同時定量分析。以不同的摩爾比對核糖核酸酶B（RNase B）N-聚糖進(jìn)行分析,其線性相關(guān)系數(shù)均超過了0.9992,展現(xiàn)了良好的... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：158 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

酶系統(tǒng)驅(qū)動的聚糖合成[1]

華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文3類型的不同，又可將N-聚糖分成三個亞型：高甘露糖型（high-mannose）、雜合型（hybrid）和復(fù)合型（complex）[4]。O-聚糖也有其特有的連接方式，它通過糖鏈核心區(qū)的N-乙酰半乳糖胺（GalNAc）與Ser/Thr相連。另外，機(jī)體內(nèi)的糖基轉(zhuǎn)移酶會對O-聚糖的核心結(jié)構(gòu)進(jìn)行更為精細(xì)的修飾，豐富了其類型。糖胺聚糖是一種能夠維系機(jī)體抗壓能力的多糖，由諸多二糖單位構(gòu)成，其與蛋白鏈結(jié)合后便形成另外一種糖綴合物—蛋白聚糖（proteoglycan），它與糖蛋白是有區(qū)別的，后者更為復(fù)雜。圖1-2.聚糖類型[2]。Figure1-2.Typesofglycan[2].在上述幾種聚糖中，N-聚糖一直都是糖組學(xué)研究的熱點，其在結(jié)構(gòu)和功能上往往具有多樣性，并且在機(jī)體微環(huán)境作用下，這種多樣性往往是呈動態(tài)變化的。另外，許多研究已經(jīng)證實N-聚糖的差異性變化與疾病之間存在著密切聯(lián)系。因而，對N-聚糖的深入研究將有助于臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展，為有效探索其背后的生物學(xué)機(jī)理提供了契機(jī)。

華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文4圖1-3.N-聚糖核心五糖結(jié)構(gòu)[3]。Figure1-3.CorepentasaccharidestructureofN-glycan[3].圖1-4.N-聚糖類型[4]。Figure1-4.TypesofN-glycans[4].


本文編號：3604001