發(fā)布時間：2022-01-11 20:38

　　【目的】通過研究維甲酸誘導(dǎo)基因1（RIG1）與肝癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系,并分析miR-362-5p和RIG1之間的結(jié)合關(guān)系,研究miR-362-5p結(jié)合RIG1后,調(diào)控PI3K/AKT信號通路,調(diào)節(jié)微環(huán)境的細(xì)胞免疫反應(yīng),對肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響�！痉椒ā浚�1）免疫組織化學(xué)方法檢測RIG1在肝癌組織和癌旁組織中的表達(dá),分析其與肝癌的臨床病理特征的關(guān)系;（2）通過生物信息學(xué)方法預(yù)測能與RIG1基因相互作用的miRNA分子—miR-362-5p;（3）在肝癌組織和癌旁組織中分別用q RT-PCR檢測miR-362-5p的表達(dá)以及western blot檢測RIG1的表達(dá),分析miR-362-5p和RIG1之間的關(guān)系;（4）在不同轉(zhuǎn)移潛能的肝癌細(xì)胞株中用q RT-PCR技術(shù)檢測miR-362-5p以及western blot方法檢測RIG1、PI3K/AKT相關(guān)蛋白的表達(dá),分析肝癌細(xì)胞株中miR-362-5p表達(dá)與RIG1、PI3K/AKT相關(guān)蛋白表達(dá)之間的關(guān)系;（5）采用雙熒光素酶方法證實RIG1是miR-362-5p下游調(diào)控的靶基因;（6）研究miR-362-5p結(jié)合RIG1后,對PI3K/AK... 

【文章來源】：暨南大學(xué)廣東省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

RIG1在肝癌與癌旁組織中的表達(dá)A,癌旁組織HE染色；B,肝癌HE染色；

暨南大學(xué)博士學(xué)位論文miR-362-5p通過RIG1調(diào)控PI3K/AKT通路影響肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的機制研究-20-圖2miR-362-5p與RIG1在肝癌及癌旁組織中的表達(dá)A,miR-362-5p相對表達(dá)水平；B,RIG1表達(dá)水平；C,RIG1相對灰度值。*P＜0.01，**P＜0.01肝癌與癌旁組織比較。

暨南大學(xué)博士學(xué)位論文miR-362-5p通過RIG1調(diào)控PI3K/AKT通路影響肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的機制研究-29-圖3肝癌細(xì)胞中miR-362-5p、RIG1、PI3K、Akt表達(dá)關(guān)系A(chǔ),miR-362-5p相對表達(dá)水平；B,RIG1、PI3K、Akt檢測結(jié)果；C,RIG1、PI3K、Akt相對灰度值。*P＜0.01；**P＜0.01,MHCC97-H與MHCC97-L比較。3.2證實RIG1是miR-362-5p下游的靶基因通過miRanda在線軟件（http://www.microrna.org/microrna/）預(yù)測miR-362-5p和RIG1（DDX58）的結(jié)合位點，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-362-5p與RIG1（DDX58）3"-UTR存在結(jié)合位點（圖4），說明RIG1（DDX58）是miR-362-5p下游的調(diào)控靶基因。圖4miRanda在線軟件預(yù)測的miR-362-5p和RIG1（DDX58）結(jié)合位點為進(jìn)一步驗證miR-362-5p與RIG1（DDX58）結(jié)合，通過雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)檢測（實驗委托廣州銳博生物科技有限公司完成），結(jié)果發(fā)現(xiàn)：miR-362-5pmimic能夠抑制RIG1野生型（RIG1-WT）表達(dá)，而對RIG1突變型（RIG1-Mut）表達(dá)無顯著抑制作用(圖5),說明miR-362-5p能夠結(jié)合到野生型RIG1上相應(yīng)的3"-UTR位點，而無法結(jié)合到突變型RIG1上的3"-UTR位點。因此RIG1是miR-362-5p的下游靶基因，miR-362-5p可結(jié)合RIG1上的3"-UTR位點，并抑制其表達(dá)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3583426