肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是全球最常見的惡性腫瘤之一,約占所有原發(fā)性肝癌的90%,在男性和女性惡性腫瘤最常見致死病因中分別位于第二和第六位。我國是全球HCC發(fā)生率和死亡率最高的國家,其高度的異質(zhì)性是其較其他實(shí)體腫瘤更容易發(fā)生轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及耐藥的主要原因。肝癌干細(xì)胞（Liver cancer stem cells,LCSCs）是存在于肝癌組織中一亞群具有啟動(dòng)和維持腫瘤生長能力的細(xì)胞,其具有正常干細(xì)胞特性。由于LCSCs侵襲性行為特性及其與預(yù)后的關(guān)聯(lián)性,其在HCC發(fā)生發(fā)展中起到了關(guān)鍵作用。水通道蛋白9（Aquaporin-9,AQP9）是位于細(xì)胞膜上轉(zhuǎn)運(yùn)水分子跨膜運(yùn)動(dòng)的一種固有蛋白,據(jù)報(bào)道它還可以轉(zhuǎn)運(yùn)過氧化氫（Hydrogen peroxide,H₂O₂）。本課題組前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)AQP9的表達(dá)通過抑制上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial-to-mesenchymal transition,EMT）從而對(duì)肝癌侵襲和轉(zhuǎn)移發(fā)揮負(fù)性調(diào)控作用。另外,有研究發(fā)現(xiàn)胰島素樣生長因子2（Insulin-like growth f... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

AQP9在干細(xì)胞球中表達(dá)明顯下調(diào)

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文35圖1-2.AQP9在CD133+肝癌干細(xì)胞中表達(dá)明顯下調(diào)。Fig.1-2AQP9expressionisdownregulatedinCD133+LCSCs.AResultsfromtheflowcytometryanalysisforthepositivityrateofCD133inCD133-andCD133+cellssortedfromHuh7cellsusingsterileflowcytometry.BSpheroidformationofCD133+andCD133-cellsisolatedfromHuh7HCCcells.Scalebars,100μm.CCD133+/-cellsweresubcutaneouslyinjectedinto6-week-oldathymicBALB/Cnudemice,andtumorigenicitywasevaluatedatweekfive.DLevelsofCD133,Nanog,Oct4,Bmi-1andAQP9inCD133+andCD133-cellsweredetectedbyWesternblotting.Allexperimentswereperformedintriplicate(n=3).*P<0.05,**P<0.01,and***P<0.0012.3AQP9過表達(dá)抑制肝癌干細(xì)胞干性基因表達(dá)為了深入探討AQP9對(duì)LCSCs的調(diào)控作用，將過表達(dá)AQP9(LV-AQP9)或陰性對(duì)照(LV-CON)的慢病毒載體分別轉(zhuǎn)染MHCC97H、Huh7和CD133+Huh7細(xì)胞。AQP9過表達(dá)組中LCSCs相關(guān)干性基因CD133、CD90、CD44、Epcam、Oct4、Nanog和Bmi-1的mRNA表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組(圖2-1.A)。另外，在Huh7-CD133+細(xì)胞中，AQP9的過表達(dá)使CD133、CD90、CD44、Oct4、Nanog和Bmi-1的mRNA表達(dá)明顯下降(圖2-1.B)。在MHCC97H和Huh7細(xì)胞中，AQP9的過表達(dá)抑制CD133、Oct4、Nanog和Bmi-1的蛋白表達(dá)水平(圖2-1.C)。另外，在Huh7-CD133+LCSCs中，過表達(dá)AQP9對(duì)上述LCSCs干性基因蛋白的表達(dá)也表現(xiàn)出同樣的抑制趨勢(圖2-1.D)。

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文36圖2-1.AQP9過表達(dá)抑制肝癌干細(xì)胞干性基因的表達(dá)。Fig.2-1AQP9overexpressionsuppressesexpressionofLCSCsgenes.ARelativemRNAexpressionoftheLCSCs-relatedmarkersCD133,CD90,CD44,Epcam,Nanog,Oct4,andBmi-1inHuh7cellsstablyoverexpressingAQP9(LV-AQP9)orcontrol(LV-CON).β-Actinwasusedasaninternalcontrol.BRelativemRNAexpressionoftheLCSCs-relatedmarkersCD133,CD90,CD44,Nanog,Oct4,andBmi-1inHuh7-CD133+cellsstablyoverexpressingAQP9orthecontrol.CExpressionofCD133,Nanog,Oct4,Bmi-1andAQP9inMHCC97HandHuh7cellsstablyoverexpressingAQP9orthecontrolwereanalysedbyWesternblotting.DProteinexpressionofCD133,Nanog,Oct4,Bmi-1andAQP9inHuh7-CD133+cellsstablyoverexpressingAQP9orthecontrol.**P<0.012.4AQP9過表達(dá)抑制肝癌細(xì)胞成球能力腫瘤細(xì)胞自我更新能力是指單個(gè)腫瘤細(xì)胞在合適的條件培養(yǎng)基中自我更新的能力，一般用腫瘤細(xì)胞成球能力來表示。本實(shí)驗(yàn)在低黏附培養(yǎng)板中加入無血清、添加生長因子的培養(yǎng)基，在MHCC97H和Huh7細(xì)胞系中均發(fā)現(xiàn)：過表達(dá)AQP9后，腫瘤細(xì)胞成球數(shù)量明顯降低，提示AQP9可抑制腫瘤細(xì)胞自我更新能力(圖2-2)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Fusion of bone marrow-derived cells with cancer cells: metastasis as a secondary disease in cancer[J]. John M.Pawelek.  Chinese Journal of Cancer. 2014(03)



本文編號(hào)：3582609