背景與目的:沙眼衣原體（Chlamydia trachomatis,Ct）是一種嚴(yán)格胞內(nèi)寄生的革蘭陰性菌,是世界范圍內(nèi)引起性傳播感染的主要病原體之一。Ct生殖道感染通常呈慢性或無癥狀,容易形成上行性感染,導(dǎo)致嚴(yán)重并發(fā)癥,例如附睪炎、前列腺炎、子宮內(nèi)膜炎、輸卵管炎、異位妊娠和不育。深入研究Ct的致病機(jī)制、尋找藥物干預(yù)靶點(diǎn),將為臨床防治Ct感染提供重要的實驗及理論依據(jù)。由于Ct胞內(nèi)生存的特性,其在早期需要通過調(diào)控宿主相關(guān)信號通路、調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄,改變宿主細(xì)胞生物學(xué)行為從而實現(xiàn)免疫逃避,完成胞內(nèi)發(fā)育周期。本課題組前期發(fā)現(xiàn)的Ct唯一一種分泌型質(zhì)粒蛋白pORF5被證明是Ct必不可少的致病因子,在衣原體感染早期階段被分泌至宿主細(xì)胞胞漿中參與了衣原體致病過程。長鏈非編碼RNA（Long non-coding RNA,lncRNA）為一類重要的基因表達(dá)調(diào)控元件。本研究以人宮頸癌上皮細(xì)胞為模式細(xì)胞,構(gòu)建E型Ct持續(xù)性感染模型,在此模型基礎(chǔ)上探究宿主在衣原體急性感染和持續(xù)性感染過程中差異表達(dá)的lncRNA和mRNA及其相關(guān)信號傳導(dǎo)通路,隨后分析pORF5對宿主lncRNA 和未折疊蛋白反應(yīng)（Unfo... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：181 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

不同濃度IFN-γ對Ct子代感染率的影響

19圖1-2不同濃度青霉素G對Ct子代感染率的影響Fig1-2EffectsofdifferentconcentrationsofPenicillinGontheinfectivityofC.trachomatisDifferentconcentrationsofPenicillinGwereaddedintomediumtodetecttheprogenyinfectivity.ThenumberofinclusionexpressedasIFUs.DNA(blue)wasstainedbyHoechst33258,inclusions(green)wasstainedbyCy2.*,P<0.05;**,P<0.01;***,P<0.001.3.2持續(xù)性感染狀態(tài)下Ct包涵體的形態(tài)變化Ct持續(xù)性感染狀態(tài)下包涵體形態(tài)發(fā)生顯著變化。為探究不同誘導(dǎo)因素下包涵體形態(tài)的變化，分別用75U/mLIFN-γ和75U/mL青霉素G誘導(dǎo)持續(xù)性感染48h，IFA觀察高倍鏡下的包涵體形態(tài)。結(jié)果如圖1-3所示，與急性感染相比，青霉素G誘導(dǎo)后包涵體體積明顯減小，其結(jié)構(gòu)相對致密；而IFN-γ誘導(dǎo)后，包涵體結(jié)構(gòu)相對疏松，體積大小不一。計算不同誘導(dǎo)因素下的包涵體體積，結(jié)果表明，與急性感染相比（144.700±12.340）μm2，青霉素G誘導(dǎo)的持續(xù)性感染狀態(tài)下包涵體體積（48.170±8.853）μm2顯著減�。≒<0.01）；IFN-γ誘導(dǎo)的持續(xù)性感染狀態(tài)下包涵體體積偏�。�89.330±15.560）μm2，出現(xiàn)大小不均一的現(xiàn)象（P<0.05），且大于青霉素G誘導(dǎo)的持續(xù)性感染包涵體體積（P<0.05）。

20圖1-3持續(xù)感染下Ct包涵體的形態(tài)學(xué)變化（10×100）Fig1-3MorphologicalchangesofC.trachomatisinclusionbodiesindifferentpersistentinfection(10×100)Infectedcellswerefixedat48hpi.DNA(blue)wasstainedbyHoechst33258,inclusions(green)wasstainedbyCy2.Theareaofinclusionbodiesinpersistentstateinducedbydifferentreagents.TheareawascountedbyImageJsoftware.*,P<0.05;***,P<0.001.3.3移除持續(xù)性感染誘導(dǎo)因素后Ct感染能力的恢復(fù)IFN-γ和青霉素G誘導(dǎo)持續(xù)性感染24h時，更換不含誘導(dǎo)因素的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)16h后高倍鏡觀察衣原體生長形態(tài)。結(jié)果如圖1-4所示，移除誘導(dǎo)因素后，包涵體可部分恢復(fù)正常形態(tài)。移除誘導(dǎo)因素后16h，收集衣原體，檢測其子代感染率，結(jié)果如圖1-4所示，移除誘導(dǎo)因素后，與急性感染組（32.400±1.800）×106相比，移除IFN-γ后子代IFU為（12.600±0.520）×106，移除青霉素G后子代IFU為（14.400±1.375）×106，而未移除IFN-γ組子代IFU為（3.600±0.520）×106，未移除青霉素G組子代IFU為（3.900±0.300）×106，以上結(jié)果表明，持續(xù)性感染狀態(tài)下子代衣原體形成減少（P<0.05），移除誘導(dǎo)因素后，衣原體感染力得到部分恢復(fù)（P<0.05），移除IFN-γ和青霉素G后Ct感染力恢復(fù)無顯著差異（P>0.05）。


本文編號：3529858