目的:調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）是具有抑制免疫反應和免疫自穩(wěn)功能的一類T細胞亞群,通過發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能而防止自身免疫病的發(fā)生。Treg細胞保證其譜系特性的核心是持續(xù)的Foxp3蛋白表達和發(fā)揮免疫抑制功能。探索維持Treg譜系穩(wěn)定性的調(diào)控網(wǎng)絡,具有重要的理論價值和臨床應用前景。研究發(fā)現(xiàn)Lkb1可通過控制T細胞發(fā)育及活化以維持機體免疫平衡,而對Lkb1在Treg中的功能機制研究仍是一片空白。我們的前期數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)在TCR刺激下Treg胞內(nèi)Lkb1蛋白水平上調(diào),提示Lkb1可能在調(diào)控Treg免疫調(diào)節(jié)功能中發(fā)揮作用。本研究將探索Lkb1對Treg細胞生物學功能及免疫平衡的調(diào)控作用及其分子機制,為臨床上免疫性疾病的治療策略提供科學依據(jù)。方法:構建Treg特異性Lkb1敲除小鼠（Foxp3Cre-YFPLkb1f/f）;觀察野生型（Fop3Cre-YFP,WT）及Lkb1條件敲除（cKO）小鼠一般體征,分析淋巴器官和細胞特征、各器官病理及觀察生存期;流式細胞術檢測小鼠T細胞極化和活化情況,Treg比例、數(shù)量、凋亡水平、細胞周期分析及轉(zhuǎn)錄因子磷酸化水平;構建Foxp3CreAMPKa1/fAMPKa2f/... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：110 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．?Ｌｋｂｌ蛋白在ＴＣＲ刺激后在Ｔｒｅｇ中上調(diào)??＋－＋＋－

圖２．構建并驗證Ｔ，．ｅｇ細胞特異性敲除Ｌｋｂｌ的基因編輯小鼠模型??（Ａ）構建仏嘩５＆＜：—ＹＦＰＺ姑７ｆ／ｆ條件性基因敲除小鼠示意圖；（Ｂ）Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測Ｌｋｂｌ??白在／＇〇Ａｙ３Ｇ？ＹＦＰ與八Ｕｐ３ｅｎ＞ＹＦＰａＷｆ／ｆ小鼠脾臟Ｔ＿與Ｔｒｅｇ細胞中的表達水平。??．?細胞中Ｌｋｂｌ特異性敲除導致小鼠出生后４０天內(nèi)死亡??相比野生型小鼠，嚴敲除小鼠出生后即表現(xiàn)為體型??小、活動減少、弓背、塌耳和尾部多處皮膚潰瘍，體重不隨年齡増加等體征（圖??

Ｂ?，－?ｏｃｒｅ?Ｆ〇Ｘ〇３?Ｃｆｅ??Ｆ—，?Ｌｋｂ１?－??Ｔ＾ｎ?Ｔｒｅｇ?Ｔｃ〇ｎ?Ｔｒｅｇ??ｋｕａ??—４３??ｊ?）�。�?廣，??圖２．構建并驗證Ｔ，．ｅｇ細胞特異性敲除Ｌｋｂｌ的基因編輯小鼠模型??（Ａ）構建仏嘩５＆＜：—ＹＦＰＺ姑７ｆ／ｆ條件性基因敲除小鼠示意圖；（Ｂ）Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測Ｌ白在／＇〇Ａｙ３Ｇ？ＹＦＰ與八Ｕｐ３ｅｎ＞ＹＦＰａＷｆ／ｆ小鼠脾臟Ｔ＿與Ｔｒｅｇ細胞中的表達水平?細胞中Ｌｋｂｌ特異性敲除導致小鼠出生后４０天內(nèi)死亡??相比野生型小鼠，嚴敲除小鼠出生后即表現(xiàn)為小、活動減少、弓背、塌耳和尾部多處皮膚潰瘍，體重不隨年齡増加等體征Ａ，?Ｂ），并在出生后４０天內(nèi)小鼠幾乎全部死亡（圖３Ｃ）。以上結果提示ＬｋｂｌＴｒｃｇ細胞內(nèi)發(fā)揮至關重要的功能，從而在全身水平影響小鼠體內(nèi)穩(wěn)態(tài)，最終Ｏ小鼠出現(xiàn)早發(fā)性死亡。??Ａ?＾ｅ?＾＇ｅ??


本文編號：3450318