黃芩素靶向MD2保護心肌缺血/再灌注損傷的機制研究
發(fā)布時間：2021-09-23 05:14
第一章黃芩素通過MD2減輕TBHP誘導的H9C2細胞損傷目的:探討天然產(chǎn)物黃芩素減輕TBHP誘導的H9C2細胞損傷的機制,探尋黃芩素減輕TBHP誘導的H9C2細胞損傷的靶點,闡明MD2在TBHP誘導的H9C2細胞損傷過程中的作用。方法:體外培養(yǎng)大鼠心肌H9C2細胞,用流式細胞儀檢測黃芩素對TBHP誘導的大鼠心肌H9C2細胞凋亡的影響,MTT實驗檢測黃芩素對H9C2細胞的毒性,流式細胞儀檢測黃芩素預處理后TBHP誘導的H9C2細胞內(nèi)ROS,WST法檢測大鼠心肌H9C2細胞內(nèi)SOD,應用MDA試劑盒檢測心肌H9C2細胞內(nèi)MDA,ELISA法檢測TBHP誘導的H9C2細胞炎癥因子水平,流式細胞儀和JC-1熒光染色法檢測TBHP誘導的H9C2細胞線粒體膜電位變化,細胞免疫熒光法檢測TBHP誘導的H9C2細胞細胞色素C釋放和NF-κB核轉(zhuǎn)移,western blot檢測凋亡和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關(guān)蛋白的表達。體外H9C2細胞,ELISA法檢測LPS誘導的H9C2細胞炎癥因子水平。采用表面等離子共振技術(shù)（SPR）實驗檢測了黃芩素是否能與MD2蛋白發(fā)生直接結(jié)合;采用計算機模擬分子對接技術(shù)觀察黃芩素與MD2的...
【文章來源】：廣西醫(yī)科大學廣西壯族自治區(qū)
【文章頁數(shù)】：125 頁
【學位級別】：博士
【部分圖文】：
心肌缺血/再灌注損傷氧化應激和炎癥反應作用示意圖
護心肌缺血/再灌注損傷的機制研究 蛋白（LPS-Binding protein，LBP）和 CD14 蛋白的輔復合物中的 MD2 直接結(jié)合，形成 LPS-MD2-TLR4 物誘導 TLR-4 在細胞膜上的二聚和胞內(nèi)段構(gòu)象變化激級聯(lián)反應，激活下游 MyD88 依賴和 TRIF 依賴的信號子-κB（NF-κB）和活化蛋白-1（AP-1）等轉(zhuǎn)錄因子活癥因子、趨化因子和粘附分子基因的轉(zhuǎn)錄和表達[11]。
首 先 摸 索 TBHP 刺 激 H9C2 細 胞 凋 亡 的 濃 度 ， 終 濃 度 為50,100,150,200,300 μM TBHP 1 μl 刺激 24 h。收集細胞后經(jīng) Annexin-V /PI雙染色后用流式細胞儀檢測 TBHP 誘導的 H9C2 細胞凋亡（圖 3 A）。結(jié)果顯示 50,100,150 μM TBHP 刺激 H9C2 細胞 24 h 凋亡率較小，200,300 μMTBHP 刺激 H9C2 細胞 24 h 凋亡率明顯升高，故選擇 200 μM 作為 TBHP 刺激濃度。為了探索黃芩素對 TBHP 誘導的 H9C2 細胞凋亡的影響，先加入黃芩素（終濃度為 2.5,5,10 μM）預處理 2 h，再加入 200 μM TBHP 刺激 24 h。流式細胞儀檢測結(jié)果顯示黃芩素呈劑量依賴性降低 TBHP 誘導的 H9C2 細胞凋亡（圖 3 B）。該數(shù)據(jù)說明黃芩素對 TBHP 誘導的 H9C2 細胞損傷有保護作用。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]心肌收縮帶壞死在心源性猝死中的病理學特征[J]. 葛延昌,黃莉娜,馬開軍. 法醫(yī)學雜志. 2015(06)
[2]Outline of the Report on Cardiovascular Disease in China,2010[J]. National Center for Cardiovascular Disease,China HU Sheng Shou 1,KONG Ling Zhi 2,GAO Run Lin 1,ZHU Man Lu 1,WANG Wen 1,WANG Yong Jun 3,WU Zhao Su 4,CHEN Wei Wei 1,LIU Ming Bo 1 1.National Center For Cardiovascular Diseases,Beijing 100037,China;2.Ministry of Health of the People’ Republic of China,Beijing 100044,China;3.Beijing Tiantan Hospital,Beijing 100050,China;4.Beijing Anzhen Hospital,Beijing 100029,China. Biomedical and Environmental Sciences. 2012(03)
[3]Ischemia/reperfusion injury and cardioprotective mechanisms:Role of mitochondria and reactive oxygen species[J]. Maria-Giulia Perrelli,Pasquale Pagliaro,Claudia Penna. World Journal of Cardiology. 2011(06)
本文編號：3405106
【文章來源】：廣西醫(yī)科大學廣西壯族自治區(qū)
【文章頁數(shù)】：125 頁
【學位級別】：博士
【部分圖文】：
心肌缺血/再灌注損傷氧化應激和炎癥反應作用示意圖
護心肌缺血/再灌注損傷的機制研究 蛋白（LPS-Binding protein，LBP）和 CD14 蛋白的輔復合物中的 MD2 直接結(jié)合，形成 LPS-MD2-TLR4 物誘導 TLR-4 在細胞膜上的二聚和胞內(nèi)段構(gòu)象變化激級聯(lián)反應，激活下游 MyD88 依賴和 TRIF 依賴的信號子-κB（NF-κB）和活化蛋白-1（AP-1）等轉(zhuǎn)錄因子活癥因子、趨化因子和粘附分子基因的轉(zhuǎn)錄和表達[11]。
首 先 摸 索 TBHP 刺 激 H9C2 細 胞 凋 亡 的 濃 度 ， 終 濃 度 為50,100,150,200,300 μM TBHP 1 μl 刺激 24 h。收集細胞后經(jīng) Annexin-V /PI雙染色后用流式細胞儀檢測 TBHP 誘導的 H9C2 細胞凋亡（圖 3 A）。結(jié)果顯示 50,100,150 μM TBHP 刺激 H9C2 細胞 24 h 凋亡率較小，200,300 μMTBHP 刺激 H9C2 細胞 24 h 凋亡率明顯升高，故選擇 200 μM 作為 TBHP 刺激濃度。為了探索黃芩素對 TBHP 誘導的 H9C2 細胞凋亡的影響，先加入黃芩素（終濃度為 2.5,5,10 μM）預處理 2 h，再加入 200 μM TBHP 刺激 24 h。流式細胞儀檢測結(jié)果顯示黃芩素呈劑量依賴性降低 TBHP 誘導的 H9C2 細胞凋亡（圖 3 B）。該數(shù)據(jù)說明黃芩素對 TBHP 誘導的 H9C2 細胞損傷有保護作用。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]心肌收縮帶壞死在心源性猝死中的病理學特征[J]. 葛延昌,黃莉娜,馬開軍. 法醫(yī)學雜志. 2015(06)
[2]Outline of the Report on Cardiovascular Disease in China,2010[J]. National Center for Cardiovascular Disease,China HU Sheng Shou 1,KONG Ling Zhi 2,GAO Run Lin 1,ZHU Man Lu 1,WANG Wen 1,WANG Yong Jun 3,WU Zhao Su 4,CHEN Wei Wei 1,LIU Ming Bo 1 1.National Center For Cardiovascular Diseases,Beijing 100037,China;2.Ministry of Health of the People’ Republic of China,Beijing 100044,China;3.Beijing Tiantan Hospital,Beijing 100050,China;4.Beijing Anzhen Hospital,Beijing 100029,China. Biomedical and Environmental Sciences. 2012(03)
[3]Ischemia/reperfusion injury and cardioprotective mechanisms:Role of mitochondria and reactive oxygen species[J]. Maria-Giulia Perrelli,Pasquale Pagliaro,Claudia Penna. World Journal of Cardiology. 2011(06)
本文編號：3405106
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