第一章黃芩素通過MD2減輕TBHP誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞損傷目的:探討天然產(chǎn)物黃芩素減輕TBHP誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞損傷的機(jī)制,探尋黃芩素減輕TBHP誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞損傷的靶點(diǎn),闡明MD2在TBHP誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞損傷過程中的作用。方法:體外培養(yǎng)大鼠心肌H9C2細(xì)胞,用流式細(xì)胞儀檢測黃芩素對(duì)TBHP誘導(dǎo)的大鼠心肌H9C2細(xì)胞凋亡的影響,MTT實(shí)驗(yàn)檢測黃芩素對(duì)H9C2細(xì)胞的毒性,流式細(xì)胞儀檢測黃芩素預(yù)處理后TBHP誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞內(nèi)ROS,WST法檢測大鼠心肌H9C2細(xì)胞內(nèi)SOD,應(yīng)用MDA試劑盒檢測心肌H9C2細(xì)胞內(nèi)MDA,ELISA法檢測TBHP誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞炎癥因子水平,流式細(xì)胞儀和JC-1熒光染色法檢測TBHP誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞線粒體膜電位變化,細(xì)胞免疫熒光法檢測TBHP誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞細(xì)胞色素C釋放和NF-κB核轉(zhuǎn)移,western blot檢測凋亡和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白的表達(dá)。體外H9C2細(xì)胞,ELISA法檢測LPS誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞炎癥因子水平。采用表面等離子共振技術(shù)（SPR）實(shí)驗(yàn)檢測了黃芩素是否能與MD2蛋白發(fā)生直接結(jié)合;采用計(jì)算機(jī)模擬分子對(duì)接技術(shù)觀察黃芩素與MD2的... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：125 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

心肌缺血/再灌注損傷氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)作用示意圖

護(hù)心肌缺血/再灌注損傷的機(jī)制研究 蛋白（LPS-Binding protein，LBP）和 CD14 蛋白的輔復(fù)合物中的 MD2 直接結(jié)合，形成 LPS-MD2-TLR4 物誘導(dǎo) TLR-4 在細(xì)胞膜上的二聚和胞內(nèi)段構(gòu)象變化激級(jí)聯(lián)反應(yīng)，激活下游 MyD88 依賴和 TRIF 依賴的信號(hào)子-κB（NF-κB）和活化蛋白-1（AP-1）等轉(zhuǎn)錄因子活癥因子、趨化因子和粘附分子基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)[11]。

首 先 摸 索 TBHP 刺 激 H9C2 細(xì) 胞 凋 亡 的 濃 度 ， 終 濃 度 為50,100,150,200,300 μM TBHP 1 μl 刺激 24 h。收集細(xì)胞后經(jīng) Annexin-V /PI雙染色后用流式細(xì)胞儀檢測 TBHP 誘導(dǎo)的 H9C2 細(xì)胞凋亡（圖 3 A）。結(jié)果顯示 50,100,150 μM TBHP 刺激 H9C2 細(xì)胞 24 h 凋亡率較小，200,300 μMTBHP 刺激 H9C2 細(xì)胞 24 h 凋亡率明顯升高，故選擇 200 μM 作為 TBHP 刺激濃度。為了探索黃芩素對(duì) TBHP 誘導(dǎo)的 H9C2 細(xì)胞凋亡的影響，先加入黃芩素（終濃度為 2.5,5,10 μM）預(yù)處理 2 h，再加入 200 μM TBHP 刺激 24 h。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示黃芩素呈劑量依賴性降低 TBHP 誘導(dǎo)的 H9C2 細(xì)胞凋亡（圖 3 B）。該數(shù)據(jù)說明黃芩素對(duì) TBHP 誘導(dǎo)的 H9C2 細(xì)胞損傷有保護(hù)作用。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3405106