發(fā)布時間：2021-09-12 18:13

　　目的:1.觀察體內(nèi)、外實驗中smoking復合物NNK、CSE對胰腺癌細胞株的影響,了解其對肝、肺轉(zhuǎn)移和HDAC4抑制劑對EMT和侵襲作用的影響作用。2.了解NNK、CSE對HDAC4的蛋白質(zhì)水平和Yes-associated Protein（Yap）水平易位至細胞核的作用,以及HDAC4抑制劑對此效應的影響。3.發(fā)現(xiàn)NNK、CSE對胰腺癌細胞向小鼠肝、肺轉(zhuǎn)移的影響和HDAC抑制劑對此效應的作用。4.觀察大黃素（EMO）對胰腺癌細胞株Bx Pc3,Mia Pa Ca-2的生物學效應及對smoking的促EMT和侵襲作用的影響。5.探討EMO對HDAC4,YAP,RON在細胞及細胞核中表達的影響和EMO對smoking誘導的胰腺癌肝肺轉(zhuǎn)移的影響作用。方法:用不同劑量的4-（甲基硝基-S-氨基）-1-（3-吡啶基）-1-丁酮（NNK）和香煙煙霧復合物提取物（CSE）處理胰腺癌細胞,檢測癌細胞存活率,上皮標記物間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)變（EMT）以及侵襲等情況。在胰腺癌的同系模型中,用NNK和組蛋白脫乙酰酶（HDAC）I/II抑制劑處理小鼠影響的情況下測量包括轉(zhuǎn)移至肺和肝等情況。用一定劑量的EMO處理胰... 

【文章來源】：上海中醫(yī)藥大學上海市

【文章頁數(shù)】：117 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
英文縮略詞表
中文摘要
英文摘要
引言
第一部分 HDAC協(xié)調(diào)YAP/RON信號預防smoking誘導胰腺癌肝肺轉(zhuǎn)移
    1.引言
    2.實驗材料
        2.1 實驗細胞
        2.2 實驗器材
        2.3 實驗試劑
        2.4 實驗用液體配制
            2.4.1 藥品的配制
            2.4.2 細胞培養(yǎng)中主要試劑配方
            2.4.3 Western-Blot實驗中常用試劑
    3.實驗方法
        3.1 細胞培養(yǎng)
            3.1.1 胰腺癌細胞和CTC的培養(yǎng)與傳代
            3.1.2 細胞的復蘇
            3.1.3 細胞的凍存
        3.2 細胞增殖檢測(MTT Assay)
        3.3 細胞侵襲試驗(Invasion Assay)
        3.4 Western-Blot
            3.4.1 smoking和 Saha對胰腺癌細胞株的影響
            3.4.2 細胞收集
            3.4.3 方法
                3.4.3.1 蛋白質(zhì)免疫印記分析
                3.4.3.2 Bradford法測定蛋白濃度
                3.4.3.3 蛋白質(zhì)免疫印記凝膠電泳操作步驟
                    3.4.3.3.1 蛋白質(zhì)SDS-PAGE電泳
                    3.4.3.3.2 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)膜
                    3.4.3.3.3 抗體雜交
        3.5 細胞核和細胞質(zhì)的提取(Nuclear and Cytoplasmic Extraction,#78833 Thermo Scientific)
            3.5.1 需要額外材料
            3.5.2 細胞培養(yǎng)制備
            3.5.3 細胞質(zhì)、細胞核的提取
        3.6 免疫沉淀 Immunoprecipitation(IP)
            3.6.1 試劑
            3.6.2 其他試劑及器械材料
            3.6.3 Western印跡法所需關于免疫沉淀材料
            3.6.4 Catch and Release步驟
    4.動物實驗
        4.1 UN-KPC-961細胞培養(yǎng)和收集
            4.1.1 UN-KPC-961的培養(yǎng)和傳代
            4.1.2 UN-KPC-961的復蘇
            4.1.3 UN-KPC-961細胞的收集
        4.2 動物模型的制備
            4.2.1 動物分組
            4.2.2 NNK注射
            4.2.3 Saha注射
            4.2.4 造模
            4.2.5 給藥處理
            4.2.6 分籠及藥物注射情況
            4.2.7 標本采集
    5.統(tǒng)計方法
    6.結(jié)果
        6.1 細胞實驗結(jié)果
            6.1.1 smoking對 HDAC4 的影響
            6.1.2 Smoking和Lmk-235對腫瘤細胞存活率和侵襲力的影響
            6.1.3 smoking和 Saha對腫瘤細胞的影響
                6.1.3.1 smoking和 Saha對 Mia Pa Ca-2 的影響
                6.1.3.2 smoking和 Saha對 Bx Pc3 的影響
            6.1.4 smoking和 Saha對 CTC的影響
            6.1.5 smoking和Saha對腫瘤細胞核的影響
                6.1.5.1 smoking和 Saha對 Mia Pa Ca-2 細胞核的影響
                6.1.5.2 smoking和 Saha對 Bx Pc3 細胞核的影響
            6.1.6 smoking和 Saha對 CTC細胞核的影響
            6.1.7 Smoking和Saha對腫瘤細胞和CTC細胞核HDAC4/Yap蛋白復合物的影響
                6.1.7.1 Smoking和Saha對腫瘤細胞HDAC4/Yap蛋白復合物的影響
                6.1.7.2 smoking和 Saha對 CTC細胞核HDAC4/YAP蛋白復合物的影響
            6.1.8 smoking和 Saha對 EMT的影響
                6.1.8.1 smoking和 Saha在 Mia Pa Ca-2 中對EMT的影響
                6.1.8.2 smoking和 Saha在 Bx Pc3 中對EMT的影響
        6.2 動物實驗結(jié)果
    7.結(jié)論
    8.討論
    9.參考文獻
第二部分 大黃素對HDAC協(xié)調(diào)YAP/RON信號通路預防smoking誘導胰腺癌肝肺轉(zhuǎn)移影響的研究
    1.引言
    2.實驗材料
        2.1 實驗細胞
        2.2 實驗器材
        2.3 實驗試劑
        2.4 實驗用液體配制
            2.4.1 藥品的配制
            2.4.2 細胞培養(yǎng)中主要試劑配方
            2.4.3 Western-Blot實驗中常用試劑
    3.實驗方法
        3.1 細胞培養(yǎng)
            3.1.1 細胞培養(yǎng)和傳代
            3.1.2 細胞的復蘇
            3.1.3 細胞的凍存
        3.2 細胞增殖的檢測(MTT Assay)
        3.3 Emodin對胰腺癌細胞形態(tài)學的影響
        3.4 細胞侵襲試驗(Invasion Assay)
        3.5 細胞核和細胞質(zhì)的提取(Nuclear and Cytoplasmic Extraction#78833 Thermo Scientific)
            3.5.1 需要額外材料
            3.5.2 細胞培養(yǎng)制備
            3.5.3 細胞質(zhì)、細胞核的提取
        3.6 Western-Blot
            3.6.1 smoking和 Emodin對胰腺癌細胞的影響
            3.6.2 細胞收集
            3.6.3 方法
                3.6.3.1 蛋白質(zhì)免疫印記分析
                3.6.3.2 Bradford法測定蛋白濃度
                3.6.3.3 蛋白質(zhì)免疫印記凝膠電泳操作步驟
                    3.6.3.3.1 蛋白質(zhì)SDS-PAGE電泳
                    3.6.3.3.2 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)膜
                    3.6.3.3.3 抗體雜交
    4.動物實驗
        4.1 UN-KPC-961細胞培養(yǎng)和收集
            4.1.1 UN-KPC-961的培養(yǎng)和傳代
            4.1.2 UN-KPC-961細胞的復蘇
            4.1.3 UN-KPC-961細胞的收集
        4.2 動物模型的制備
            4.2.1 動物分組
            4.2.2 藥物注射
            4.2.3 Emodin給藥
            4.2.4 動物造模
            4.2.5 NNK和Emodin維持用藥
            4.2.6 分籠及藥物注射
            4.2.7 標本采集
    5.統(tǒng)計方法
    6.結(jié)果
        6.1 實驗結(jié)果
            6.1.1 細胞實驗結(jié)果
            6.1.2 動物實驗結(jié)果
    7.結(jié)論
    8.討論
    9.參考文獻
創(chuàng)新點
致謝
附錄一 胰腺癌生物學診斷治療進展
    參考文獻
附錄二


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Cancer incidence and mortality in China in 2013:an analysis based on urbanization level[J]. Wanqing Chen,Rongshou Zheng,Siwei Zhang,Hongmei Zeng,Tingting Zuo,Changfa Xia,Zhixun Yang,Jie He.  Chinese Journal of Cancer Research. 2017(01)
[2]Update on the management of pancreatic cancer:Surgery is not enough[J]. Daniel Ansari,Adam Gustafsson,Roland Andersson.  World Journal of Gastroenterology. 2015(11)
[3]Anti-proliferation effects of Twist gene silencing in gastric cancer SGC7901 cells[J]. Hui Zhang,Jian Gong,Di Kong,Hong-Yi Liu.  World Journal of Gastroenterology. 2015(10)
[4]胰腺癌中醫(yī)臨床治療研究概況[J]. 方靖,阮善明,沈敏鶴.  中醫(yī)學報. 2015(03)
[5]Epithelial-mesenchymal transition-activating transcription factors-multifunctional regulators in cancer[J]. Minal Garg.  World Journal of Stem Cells. 2013(04)
[6]聯(lián)合手術、術中后區(qū)域化療、中藥治療胰腺癌臨床研究[J]. 李榮,李稱才,何濤,李文強,王振龍,陳博藝.  中國醫(yī)藥科學. 2013(11)
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[8]大黃素對人胰腺癌Panc-1細胞增殖和凋亡的影響[J]. 劉岸,鄧姿峰,胡金喜,韓邵偉,黃莉莉,柯品妤,林勝璋.  中草藥. 2011(04)
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[10]中醫(yī)藥治療晚期胰腺癌13例[J]. 王慶才,張磊,李蘇.  四川中醫(yī). 1996(10)



本文編號：3394702