小鼠B淋巴細胞有兩種來源,出生前,B淋巴細胞由胎肝中的造血干細胞（Hematopoietic stem cell,HSC）發(fā)育而來,出生后,骨髓中的HSC則不斷發(fā)育為B細胞,為外周提供成熟的B細胞,參與體液免疫,維持機體穩(wěn)態(tài)。Prepro-B細胞被認為是最出現(xiàn)的B細胞前體,高表達B220和其他B細胞相關分子。Prepro-B細胞隨之發(fā)育為pro-B細胞,在pro-B細胞階段會發(fā)生免疫球蛋白重鏈的V-DJ重排,形成μ鏈。此時細胞還沒有成熟的輕鏈,有兩個替代型輕鏈λ鏈和Vpre B,μ鏈和這兩個替代型輕鏈組裝成pre-BCR。此時B細胞發(fā)育進入pre-B細胞階段,在pre-BCR信號刺激下,pre-B細胞進行增殖,同時進行輕鏈的重排,形成成熟的BCR,在經(jīng)歷陽性選擇后發(fā)育為immature B細胞、mature B細胞。DDB1,是DNA損傷結合蛋白1的簡稱,與DDB2形成損傷修復復合體,參與UV引起的DNA損傷修復,后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)DDB1作為一個接頭蛋白,參與CRL4E3泛素連接酶的形成,β螺旋B和CUL4的N端結合,β螺旋A和C則形成一個鉗子樣結構和各種DDB1和CUL4相關因子（DDB... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：133 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

1Ddb1fl/fl小鼠和Dcaf2fl/fl小鼠構建策略

浙江大學博士學位論文2材料和方法9圖2.1.3.1質粒圖譜。Figure2.2.2Thephysicalmapsofseveralplasmids.(a)Themapofp3xFLAG-CMV-7.1.(b)ThemapofpcDNA3.1/myc-HisC.(c)ThemapofpMLP.2.1.3.2菌株大腸桿菌感受態(tài)DH5α購買自北京全式金生物公司。2.1.3.3引物合成及序列測定本實驗所用引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成，DNA序列測定由上海鉑尚生物技術有限公司完成。2.1.3.4試劑盒HiScriptIIQRTSuperMixforqPCR，購買于南京諾唯贊生物科技有限公司。ClonExpressIIOneStepCloningKit，購買于南京諾唯贊生物科技有限公司。PCRCleanupKit，購買于Axygen公司。c

浙江大學博士學位論文3實驗結果333實驗結果3.1DDB1在pro-B階段高表達DDB1，是一種DNA損傷結合蛋白。最初發(fā)現(xiàn)它結合在UV引起的DNA損傷位點46，參與核苷酸切除修復途徑（nucleotideexcisionrepair，NER）。隨后研究人員發(fā)現(xiàn)DDB1可以與CUL4、DDB2相互作用形成E3泛素連接酶復合物，降解著色性干皮癥C（XerodermapigmentosumC，XPC）分子，促進損傷修復47。YongCang等人發(fā)現(xiàn)DDB1全敲小鼠具有胚胎期致死性，在大腦和晶狀體中條件性敲除DDB1后則導致神經(jīng)和晶狀體退化、腦內(nèi)出血和新生小鼠死亡，他們認為這可能是由于DDB1參與調控分裂細胞的活性和維持基因組穩(wěn)定性有關，DDB1是干細胞穩(wěn)態(tài)維持的一個重要調控因子48。DDB1在前體細胞LSK中高表達，并且在之后的幾種前體細胞如CMP、GMP、pro-B中都維持著較高的表達水平49。為了研究DDB1在B細胞中的可能作用，我們首先檢測了DDB1在B細胞各個發(fā)育階段的表達情況（圖3.1）。根據(jù)不同發(fā)育階段B細胞標志分子表達的不同，流式分選B細胞亞群，通過qPCR和Westernblot分別進行DDB1轉錄水平和蛋白水平檢測。結果顯示，與之前的報道一致的是，DDB1在pro-B和pre-B細胞中表達較高，尤其是pro-B階段，這提示我們DDB1可能參與B淋巴細胞的發(fā)育過程。圖3.1DDB1在不同發(fā)育階段的B細胞中的表達譜。


本文編號：3388748