發(fā)布時間：2021-09-06 08:26

　　背景:胃癌（Gastric cancer,GC）是全球范圍內(nèi)較為常見的惡性腫瘤之一,也是引起中國乃至世界范圍內(nèi)癌癥死亡的主要疾病。盡管胃癌的診斷和綜合治療策略顯著提高,但多數(shù)進(jìn)展期胃癌病人經(jīng)治療后5年總生存率僅約30%。胃癌病人預(yù)后不良的因素與快速增殖能力,淋巴/血源性轉(zhuǎn)移和直接侵襲等惡性生物學(xué)行為相關(guān),但引起胃癌發(fā)生、發(fā)展以及復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為的分子機(jī)制尚不完全清楚。環(huán)狀RNA作為一類具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)的非編碼RNA,近期在多種腫瘤中報道其可以作為腫瘤的診斷標(biāo)志物和治療干預(yù)靶點(diǎn)�；诖�,我們聯(lián)合課題組胃癌circRNA芯片結(jié)果和GEO數(shù)據(jù)庫中胃癌circRNA芯片結(jié)果,篩選并發(fā)現(xiàn)了顯著差異表達(dá)的hsa_circ₀000390（注:來源于chr12:32760890|32764217,由親本基因FGD4的8,9,10號外顯子反向剪切成環(huán)構(gòu)成,大小為345 bp,命名為circFGD4）作為研究對象。本課題擬探究circFGD4在胃癌中的表達(dá)、具有的生物學(xué)特性、以及參與調(diào)控胃癌的潛在機(jī)制,期待通過本研究可以為胃癌診療提供新思路和新依據(jù)。目的:闡... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：105 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

C圖1.1CircFGD4特征和表達(dá)

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文70圖3.2F圖3.2CircFGD4競爭性結(jié)合miR-532-3p調(diào)控APC表達(dá)。Figure3.2CircFGD4competitivelyboundmiR-532-3ptoregulateAPCexpression.A.生信顯示miR-532-3p和APC結(jié)合關(guān)系;B.qRT-PCR顯示miR-532-3p調(diào)控APC表達(dá);C.WB顯示circFGD4競爭性結(jié)合miR-532-3p調(diào)控APC表達(dá);D.APC野生型和突變型熒光素酶載體的示意圖;E.熒光素酶實驗顯示miR-532-3p和APC結(jié)合關(guān)系;F.IF顯示circFGD4競爭性結(jié)合miR-532-3p調(diào)控APC表達(dá);*P<0.05,**P<0.01.A.BioinformaticsanalysisshowedthebindingrelationshipbetweenmiR-532-3pandAPC;B.qRT-PCRshowedthatmiR-532-3pregulatedAPCexpression;C.WBanalysisshowedthatcircFGD4competitivelyboundmiR-532-3ptoregulateAPCexpression;D.SchematicdiagramofluciferaseconstructionofAPCwild-typeandmutantvectors;E.LuciferaseexperimentsshowedthebindingrelationshipbetweenmiR-532-3pandAPC;F.IFshowedthatcircFGD4competitivelyboundmiR-532-3ptoregulateAPCexpression;*P<0.05,**P<0.01.2.3在胃癌中circFGD4競爭性結(jié)合miR-532-3p調(diào)控β-catenin通路為了驗證circFGD4在胃癌中能否調(diào)控β-catenin通路，我們構(gòu)建并TOP/Flash和FOP/Flash報告基因，檢測胃癌細(xì)胞中是否激活了Wnt/β-catenin通路。在HEK-293T，MGC803和AGS細(xì)胞中沉默或過表達(dá)轉(zhuǎn)染circFGD4后，TOP/FOP轉(zhuǎn)錄活性增強(qiáng)或降低（圖3.3A）。進(jìn)一步實驗表明MGC803和AGS細(xì)胞轉(zhuǎn)染過表達(dá)circFGD4載體逆轉(zhuǎn)了miR-532-3pmimic誘導(dǎo)的TOP/FOP轉(zhuǎn)錄活性的增加（圖3.3B,3.3C）。敲除circFGD4還可以逆轉(zhuǎn)MGC803和AGS細(xì)胞中miR-532-3p

qRT-PCR檢測在多種胃癌細(xì)胞(MKN28,SGC7901,AGS,MKN45,MGC803和BGC823)及GES-1細(xì)胞中circFGD4表達(dá),發(fā)現(xiàn)在胃癌細(xì)胞中circFGD4表達(dá)低于GES-1細(xì)胞(圖1.2A)。FISH檢測發(fā)現(xiàn)circFGD4主要定位于胃癌細(xì)胞的胞漿(圖1.2B)。2.3 CircFGD4與親本基因FGD4在胃癌中的關(guān)系

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Role of circular RNAs in gastric cancer: Recent advances and prospects[J]. Ke-Wei Wang,Ming Dong.  World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2019(06)
[2]Circulating micro RNAs and long non-coding RNAs in gastric cancer diagnosis:An update and review[J]. Ya-Kai Huang,Jian-Chun Yu.  World Journal of Gastroenterology. 2015(34)



本文編號：3387117