基于SERS技術(shù)的納米顆粒合成、表征及miRNA檢測(cè)應(yīng)用
發(fā)布時(shí)間：2021-09-04 10:21
miRNA是廣泛存在于人類和動(dòng)物體內(nèi)的一類非蛋白質(zhì)編碼小分子單鏈RNA。已有研究表明,miRNA的異常表達(dá)與多種疾病存在著密切的關(guān)系,是理想的腫瘤標(biāo)記物。目前已有的miRNA檢測(cè)方法存在著諸如操作復(fù)雜、費(fèi)用昂貴、易于發(fā)生熒光漂白和光譜重疊等局限,因此,本研究擬在表面增強(qiáng)拉曼散射（SERS）光譜技術(shù)檢測(cè)的基礎(chǔ)上,利用SERS納米金標(biāo)記粒子建立高靈敏、高通量、簡(jiǎn)便快速檢測(cè)靶標(biāo)miRNA的方法,以用于疾病的早期診斷。在SERS光譜技術(shù)檢測(cè)過(guò)程中,靈敏性和重現(xiàn)性是兩個(gè)很關(guān)鍵的技術(shù)指標(biāo),因此,我們就圍繞這兩個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)開展了一些研究工作,具體的研究結(jié)果如下:1、開發(fā)了一種基于磁性捕獲的SERS檢測(cè)miRNA新方法。首先,我們合成了磁性納米粒Au@MNPs,并通過(guò)TEM、DLS及XRD等手段對(duì)其核殼納米結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征,結(jié)果顯示,Au@MNPs的平均粒徑為27..5±7.3nm且尺寸分布窄,其中Au殼的厚度約為7nm,MNPs平均尺寸約為13nm、光學(xué)特性接近于純GNPs,MNPs表面幾乎被Au涂層全包覆。另外,在磁場(chǎng)作用下,我們通過(guò)靶序列miRNA-141,捕獲探針修飾的Au@MNPs及報(bào)告探針修飾的...
【文章來(lái)源】：浙江工業(yè)大學(xué)浙江省
【文章頁(yè)數(shù)】：102 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
miRNA的生物合成過(guò)程
基于 SERS 技術(shù)的納米顆粒合成、表征及 miRNA 檢測(cè)應(yīng)用NA 的 3’-UTR 結(jié)合，通過(guò)降解 mRNA 分子、促進(jìn) mRNA 分子 3’抑制翻譯來(lái)降低 mRNA 的表達(dá)水平，其互補(bǔ)鏈則被降解或參與 mi以及下游調(diào)節(jié)效應(yīng)[13]（圖 1-2）。在早期，人們研究 miRNA 基因都集中在 mRNA 的 3'-UTR 端，這主要是因?yàn)榻^大多數(shù) miRNA 的中在這里，但隨著人們對(duì) miRNA 研究的深入，發(fā)現(xiàn) miRNA 的作RNA 的非編碼區(qū)以外，還作用于 5'-UTR、啟動(dòng)子區(qū)甚至是 mRN]，這說(shuō)明蛋白質(zhì)的翻譯過(guò)程也可能受到 miRNA 的調(diào)控，顛覆了 miRNA 的 3'-UTR 位點(diǎn)的經(jīng)典基因沉默機(jī)制。另外，miRNA 除了通A 分子或抑制翻譯來(lái)降低 mRNA 的表達(dá)水平之外，也有研究學(xué)者iRNA 可以起到上調(diào)靶基因表達(dá)的作用，如 miRNA 通過(guò)上調(diào)方式轉(zhuǎn)錄因子，促進(jìn)肝細(xì)胞的分化[14, 15]。
圖 1-3 生成 cDNA 的替代逆轉(zhuǎn)錄方法示意圖[49]Fig 1-3. Schematic diagram of alternative reverse transcription of cDNA generation.(A)莖環(huán)引物；(B)線性引物；(C)將加入 poly(A)尾酶，然后使用 oligo(dT)引物逆轉(zhuǎn)錄。（3） miRNA 微陣列微陣列法是一種非常適合 miRNA 高通量分析的方法，可同時(shí)定量檢測(cè)多個(gè)樣本，其原理是首先從生物樣品中提取總 RNA，然后采用熒光標(biāo)記所有靶miRNA，接著將用于雜交的 DNA 探針（該探針與靶 miRNA 序列互補(bǔ)）固定于微芯片上，將芯片與標(biāo)記的靶 miRNA 雜交，經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)南礈旌�，通過(guò)檢測(cè)熒光的強(qiáng)度信號(hào)和數(shù)據(jù)處理，就可以獲得不同樣本中特異的 miRNA 表達(dá)譜[56]（圖1-4）。目前，通過(guò)微陣列方法已檢測(cè)出大量 miRNA 在生理狀態(tài)下的表達(dá)譜，如Degliangeli 等就利用該方法檢測(cè)了慢性 B 淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞中的 miRNA-15 和miRNA-16 表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其表達(dá)量會(huì)明顯減低，而 miRNA-155 在 B 淋巴
本文編號(hào)：3383090
【文章來(lái)源】：浙江工業(yè)大學(xué)浙江省
【文章頁(yè)數(shù)】：102 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
miRNA的生物合成過(guò)程
基于 SERS 技術(shù)的納米顆粒合成、表征及 miRNA 檢測(cè)應(yīng)用NA 的 3’-UTR 結(jié)合，通過(guò)降解 mRNA 分子、促進(jìn) mRNA 分子 3’抑制翻譯來(lái)降低 mRNA 的表達(dá)水平，其互補(bǔ)鏈則被降解或參與 mi以及下游調(diào)節(jié)效應(yīng)[13]（圖 1-2）。在早期，人們研究 miRNA 基因都集中在 mRNA 的 3'-UTR 端，這主要是因?yàn)榻^大多數(shù) miRNA 的中在這里，但隨著人們對(duì) miRNA 研究的深入，發(fā)現(xiàn) miRNA 的作RNA 的非編碼區(qū)以外，還作用于 5'-UTR、啟動(dòng)子區(qū)甚至是 mRN]，這說(shuō)明蛋白質(zhì)的翻譯過(guò)程也可能受到 miRNA 的調(diào)控，顛覆了 miRNA 的 3'-UTR 位點(diǎn)的經(jīng)典基因沉默機(jī)制。另外，miRNA 除了通A 分子或抑制翻譯來(lái)降低 mRNA 的表達(dá)水平之外，也有研究學(xué)者iRNA 可以起到上調(diào)靶基因表達(dá)的作用，如 miRNA 通過(guò)上調(diào)方式轉(zhuǎn)錄因子，促進(jìn)肝細(xì)胞的分化[14, 15]。
圖 1-3 生成 cDNA 的替代逆轉(zhuǎn)錄方法示意圖[49]Fig 1-3. Schematic diagram of alternative reverse transcription of cDNA generation.(A)莖環(huán)引物；(B)線性引物；(C)將加入 poly(A)尾酶，然后使用 oligo(dT)引物逆轉(zhuǎn)錄。（3） miRNA 微陣列微陣列法是一種非常適合 miRNA 高通量分析的方法，可同時(shí)定量檢測(cè)多個(gè)樣本，其原理是首先從生物樣品中提取總 RNA，然后采用熒光標(biāo)記所有靶miRNA，接著將用于雜交的 DNA 探針（該探針與靶 miRNA 序列互補(bǔ)）固定于微芯片上，將芯片與標(biāo)記的靶 miRNA 雜交，經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)南礈旌�，通過(guò)檢測(cè)熒光的強(qiáng)度信號(hào)和數(shù)據(jù)處理，就可以獲得不同樣本中特異的 miRNA 表達(dá)譜[56]（圖1-4）。目前，通過(guò)微陣列方法已檢測(cè)出大量 miRNA 在生理狀態(tài)下的表達(dá)譜，如Degliangeli 等就利用該方法檢測(cè)了慢性 B 淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞中的 miRNA-15 和miRNA-16 表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其表達(dá)量會(huì)明顯減低，而 miRNA-155 在 B 淋巴
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