發(fā)布時(shí)間：2021-07-23 00:07

　　研究目的:本研究擬通過斑馬魚模型及細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)研究JAG1對(duì)腸神經(jīng)系統(tǒng)（Enteric nervous system,ENS）發(fā)育形成的影響及具體機(jī)制。明確JAG1是否可以通過Notch通路影響腸神經(jīng)前體細(xì)胞的增殖和遷移,進(jìn)而影響ENS的形成和先天性巨結(jié)腸的發(fā)生,以期為進(jìn)一步了解先天性巨結(jié)腸的發(fā)病機(jī)制提供新方向。研究方法:首先在正常小鼠結(jié)腸及非先天性巨結(jié)腸患兒結(jié)腸標(biāo)本中驗(yàn)證JAG1蛋白的表達(dá)情況,并與胚鼠（E15天）腸管的JAG1蛋白表達(dá)情況比較;然后分別獲取不同發(fā)育階段的胚鼠腸管（E11.5d,E13.5d,E15.5d）,通過q RT-PCR法檢測(cè)Jag1及Notch通路信號(hào)分子表達(dá)量。再構(gòu)建JAG1-Splicing-Morpholino探針降低斑馬魚jag1 m RNA的表達(dá)量,用免疫熒光染色法標(biāo)記成熟神經(jīng)元特異蛋白Hu,觀察斑馬魚腸神經(jīng)發(fā)育情況,明確JAG1對(duì)腸神經(jīng)發(fā)育的影響。另外再獲取胚鼠（E16.5天）的腸管進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)獲得腸神經(jīng)前體細(xì)胞,分別利用JAG1 Si RNA,JAG1重組蛋白,DAPT（Notch通路抑制劑）對(duì)其進(jìn)行干擾,比較不同處理組間腸神經(jīng)前體細(xì)胞在細(xì)胞... 

【文章來(lái)源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：152 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

人結(jié)腸組織PGP9.5免疫組化染色Figure5.ImmunohistochemicalstainingofPGP9.5inhumancolon；綠色為PGP9.6著色區(qū)域，可見正常結(jié)腸組織（非先天性巨結(jié)腸結(jié)腸組織）肌

上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文圖6人結(jié)腸組織PGP9.5/JAG1雙標(biāo)免疫組化染色Figure6.ImmunohistochemicalstainingofPGP9.5andJag1inhumancolon紅色著色區(qū)域?yàn)镻GP9.5陽(yáng)性的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞；綠色為JAG1蛋白陽(yáng)性細(xì)胞；二者未見重疊著色區(qū)域，提示此時(shí)JAG1蛋白未在PGP9.5陽(yáng)性細(xì)胞上表達(dá)。圖7正常小鼠結(jié)腸組織PGP9.5/JAG1雙標(biāo)免疫組化染色Figure7.ImmunohistochemicalstainingofPGP9.5andJag1inmousecolon；對(duì)新生小鼠的PGP9.5染色（紅色）提示此時(shí)小鼠的腸神經(jīng)節(jié)細(xì)胞已經(jīng)發(fā)育成熟；JAG1蛋白染色（綠色）見小鼠肌間散在的JAG1陽(yáng)性細(xì)胞，與PGP9.5陽(yáng)性細(xì)胞部分重疊，提示此時(shí)部分PGP9.5陽(yáng)性的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞表達(dá)JAG1蛋白。圖8E15天胚鼠腸組織PGP9.5/JAG1雙標(biāo)免疫組化染色Figure8.ImmunohistochemicalstainingofPGP9.5andJag1inE15embronicmousecolonE15天的胚鼠腸管可見腸管肌間PGP9.5散在的陽(yáng)性成熟神經(jīng)嵴細(xì)胞（紅色）；JAG1染色（綠色）見此時(shí)JAG1在腸管間質(zhì)表達(dá)廣泛，同時(shí)肌間見大量散在的JAG1陽(yáng)性著色區(qū)域，該區(qū)域和PGP9.5著色區(qū)域大部分重合，提示此時(shí)腸神經(jīng)節(jié)細(xì)胞大部分表達(dá)JAG1蛋白。1.2.1.2JAG1及Notch通路相關(guān)信號(hào)分子在胚鼠腸管發(fā)育過程中表達(dá)量改變情況對(duì)腸神經(jīng)發(fā)育過程中各基因的表達(dá)量分析的結(jié)果提示，Jag1、Notch1、Sox10在E11.5天時(shí)的表達(dá)量明顯低于E13.5天和E15.5天的表達(dá)量，在E13.5天和E15.5天時(shí)的表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；Dll1、Hes1、Mash1的表達(dá)水平在三個(gè)時(shí)間段隨著31

上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文圖6人結(jié)腸組織PGP9.5/JAG1雙標(biāo)免疫組化染色Figure6.ImmunohistochemicalstainingofPGP9.5andJag1inhumancolon紅色著色區(qū)域?yàn)镻GP9.5陽(yáng)性的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞；綠色為JAG1蛋白陽(yáng)性細(xì)胞；二者未見重疊著色區(qū)域，提示此時(shí)JAG1蛋白未在PGP9.5陽(yáng)性細(xì)胞上表達(dá)。圖7正常小鼠結(jié)腸組織PGP9.5/JAG1雙標(biāo)免疫組化染色Figure7.ImmunohistochemicalstainingofPGP9.5andJag1inmousecolon；對(duì)新生小鼠的PGP9.5染色（紅色）提示此時(shí)小鼠的腸神經(jīng)節(jié)細(xì)胞已經(jīng)發(fā)育成熟；JAG1蛋白染色（綠色）見小鼠肌間散在的JAG1陽(yáng)性細(xì)胞，與PGP9.5陽(yáng)性細(xì)胞部分重疊，提示此時(shí)部分PGP9.5陽(yáng)性的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞表達(dá)JAG1蛋白。圖8E15天胚鼠腸組織PGP9.5/JAG1雙標(biāo)免疫組化染色Figure8.ImmunohistochemicalstainingofPGP9.5andJag1inE15embronicmousecolonE15天的胚鼠腸管可見腸管肌間PGP9.5散在的陽(yáng)性成熟神經(jīng)嵴細(xì)胞（紅色）；JAG1染色（綠色）見此時(shí)JAG1在腸管間質(zhì)表達(dá)廣泛，同時(shí)肌間見大量散在的JAG1陽(yáng)性著色區(qū)域，該區(qū)域和PGP9.5著色區(qū)域大部分重合，提示此時(shí)腸神經(jīng)節(jié)細(xì)胞大部分表達(dá)JAG1蛋白。1.2.1.2JAG1及Notch通路相關(guān)信號(hào)分子在胚鼠腸管發(fā)育過程中表達(dá)量改變情況對(duì)腸神經(jīng)發(fā)育過程中各基因的表達(dá)量分析的結(jié)果提示，Jag1、Notch1、Sox10在E11.5天時(shí)的表達(dá)量明顯低于E13.5天和E15.5天的表達(dá)量，在E13.5天和E15.5天時(shí)的表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；Dll1、Hes1、Mash1的表達(dá)水平在三個(gè)時(shí)間段隨著31

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的研究進(jìn)展[J]. 肖俊,李智.  中華小兒外科雜志. 2018 (12)
[2]先天性巨結(jié)腸小腸結(jié)腸炎發(fā)病機(jī)制及防治研究進(jìn)展[J]. 虞賢賢,施誠(chéng)仁,蔡威.  臨床小兒外科雜志. 2018(04)
[3]先天性巨結(jié)腸多中心研究的進(jìn)展與意義[J]. 衛(wèi)園園,詹江華.  中華小兒外科雜志. 2016 (04)



本文編號(hào)：3298177