目的肝細(xì)胞肝癌（HCC）是我國發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一,已成為亟待解決的公共健康問題。HCC轉(zhuǎn)移和術(shù)后復(fù)發(fā)嚴(yán)重影響患者的療效和生活質(zhì)量,是導(dǎo)致HCC患者死亡的主要原因。因此,深入研究HCC轉(zhuǎn)移的機制,篩選復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵診治靶點尤為重要。miRNA在肝癌發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用,參與調(diào)控肝癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。本研究通過miRNA芯片發(fā)現(xiàn)miR-181a在高轉(zhuǎn)移能力肝癌細(xì)胞Huh-7/M8中表達(dá)下調(diào)。miR-181a是一種多功能miRNA,既往的研究顯示其對HCC轉(zhuǎn)移的影響存在爭議。進(jìn)而通過數(shù)據(jù)庫預(yù)測,找出miR-181a可能的下游靶基因HMGB2。HMGB2是高遷移率族蛋白家族的成員,已被報道參與調(diào)控胃癌、卵巢癌等腫瘤的轉(zhuǎn)移,但暫無文獻(xiàn)報道HMBG2參與調(diào)控HCC轉(zhuǎn)移。目前也未有文獻(xiàn)報道m(xù)iR-181a與HMGB2的上下游調(diào)控關(guān)系。故此,本研究的目的在于探討miR-181a對HCC轉(zhuǎn)移的作用及介導(dǎo)HMGB2的具體分子機制,并分析miR-181a和HMGB2表達(dá)異常與HCC臨床病理特征、預(yù)后的關(guān)系。方法首先,以Huh-7細(xì)胞為親代,利用反復(fù)穿越Transwell小室的方法我們建立了... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞Ｈｕｈ－７／Ｍ８的建立

２．２?Ｈｕｈ－７／Ｍ８細(xì)胞在體外具有更強遷移侵襲能力??我們做了一系列實驗比較Ｈｕｈ－７與Ｈｕｈ－７／Ｍ８在體外的生物學(xué)特性。與親代??Ｈｕｈ－７細(xì)胞相比，Ｈｕｈ－７／Ｍ８細(xì)胞體外增殖速度沒有顯著區(qū)別（圖１－２Ａ）。劃痕實??驗發(fā)現(xiàn)Ｈｕｈ－７／Ｍ８具有更強的水平遷移能力（圖１－２Ｂ）。遷移和侵襲實驗進(jìn)一步證??實有更多的Ｈｕｈ－７／Ｍ８細(xì)胞穿過有或無基質(zhì)膠包被的Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室（圖１－２Ｃ和??１－２Ｄ），證明Ｈｕｈ－８／Ｍ８具有更強的遷移和侵襲能力。綜上所述，與Ｈｕｈ－７相比，??Ｈｕｈ－７／Ｍ８在體外增殖速度相近，但具有更強的遷移侵襲能力。??Ａ?ｉｆｖ?１?ｌｉｌｉ??０?４８?９６?１４４?１９６?織：Ｔ：、＇．＇??Ｔｉｍｅ?（ｈ）?Ｏｈ?４８?ｈ??Ｃ?Ｄ??／?ｒ＇ｆ?Ａ?．、?１｜．?、＊？■？?？?，??；?：?ｊ?：？?＾??Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ?Ｉｎｖａｓｉｏｎ??義?瞧湓：＇■隱ｍｒ）：??Ｈｕｈ－７?Ｈｕｈ－７／Ｍ８?Ｈｕｈ－７?Ｈｕｈ－７／Ｍ８??圖１－２高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞Ｈｕｈ－７／Ｍ８細(xì)胞體外生物學(xué)特性的鑒定。??（Ａ）?Ｈｕｈ－７和Ｈｕｈ－７／Ｍ８細(xì)胞接種６?ｃｍ培養(yǎng)皿，每２４小時細(xì)胞計數(shù)，繪制??體外生長曲線。（Ｂ）細(xì)胞融合度達(dá)到１００％時進(jìn)行劃痕操作，０和４８小時后拍照??比較。（Ｃ）相同細(xì)胞數(shù)接種Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ上室，３０小時后進(jìn)行Ｇｉｍｓａ染色，封片拍??照（１００倍放大倍數(shù)）。（Ｄ）接種細(xì)胞至基質(zhì)膠包被的Ｔｒａｎｓｗｅｌ丨小室，４８小時進(jìn)??行Ｇｉｍｓａ染色

進(jìn)一步用尾靜脈肺轉(zhuǎn)移模型比較Ｈｕｈ－７與Ｈｕｈ－７／Ｍ８在體內(nèi)的轉(zhuǎn)移能力。用帶??有ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ的Ｈｕｈ－７與Ｈｕｈ－７／Ｍ８構(gòu)建尾靜脈肺轉(zhuǎn)移模型，每姐各１０只裸鼠。２??個月后行生物活體成像（圖１－３Ａ），發(fā)現(xiàn)Ｈｕｈ－７／Ｍ８組６只肺部有高信號，轉(zhuǎn)移概??率為６／１０（６０％）；?Ｈｕｈ－７組無１只肺部有高信號，轉(zhuǎn)移概率為０／１０（０％），ｐ＜０．００５??（圖１－３Ｂ）。取肺部行ＨＥ染色，Ｈｕｈ－７／Ｍ８組６只肺部有腫瘤轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)形成，而??Ｈｕｈ－７組肺部均為正常肺泡組織，無腫瘤轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)形成（圖１－３Ｃ）。綜上所述，??Ｈｕｈ－７／Ｍ８在體內(nèi)也具有更強的轉(zhuǎn)移能力。??Ａ?Ｂ??ｒ??Ｕ３?ｔｉｒ?ｆ?Ｈｕｈ７?Ｈｕｈ７／Ｍ８??ｎＶＴ?Ｗ?（ｎ＊１〇）??Ｂｐ?４ＩＨ?Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ?０／１０（０％）?６／１０（６０％）??Ｈｕｈ７?Ｈｕｈ７／ｍ８??ｍｍ??Ｈｕｈ７?Ｈｕｈ７＇Ｍ８??圖１－３尾靜脈肺轉(zhuǎn)移模型比較Ｈｕｈ－７與Ｈｕｈ－７／Ｍ８在體內(nèi)的轉(zhuǎn)移能力。??（Ａ）無肺轉(zhuǎn)移的Ｈｕｈ－７組裸鼠與有肺轉(zhuǎn)移的Ｈｕｈ－７／Ｍ８組裸鼠熒光素酶活??性成像。（Ｂ）?Ｈｕｈ－７與Ｈｕｈ－７／Ｍ８組裸鼠肺轉(zhuǎn)移數(shù)目的統(tǒng)計情況。（Ｃ）無肺轉(zhuǎn)移??的Ｈｕｈ－７組裸鼠與有肺轉(zhuǎn)移的Ｈｕｈ－７／Ｍ８組裸鼠肺部ＨＥ染色，各取４０倍、２００??２３??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Clinical features and prognosis of patients with extrahepatic metastases from hepatocellular carcinoma[J]. Kiminori Uka,Hiroshi Aikata,Shintaro Takaki,Hiroo Shirakawa,Soo Cheol Jeong,Keitaro Yamashina,Akira Hiramatsu,Hideaki Kodama,Shoichi Takahashi,Kazuaki Chayama.  World Journal of Gastroenterology. 2007(03)



本文編號：3285597