腫瘤是目前人類致死率最高的疾病之一。傳統(tǒng)抗腫瘤藥物往往存在靶向能力差、生物相容性差、代謝過(guò)快和毒副作用較強(qiáng)等缺點(diǎn),因此在實(shí)際應(yīng)用中受到了嚴(yán)重限制。此外,針對(duì)與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)的腫瘤生物標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)是目前較為流行的腫瘤早期診斷手段,但這種方式對(duì)檢測(cè)的靈敏度、特異性等都提出了極高的要求�；谝陨蠁�(wèn)題,本文研究了多種無(wú)機(jī)納米顆粒與核酸納米材料在腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)及腫瘤靶向治療中的應(yīng)用,設(shè)計(jì)和構(gòu)建了用于檢測(cè)腫瘤生物標(biāo)志物端粒酶與miR-21的納米生物傳感器件,并通過(guò)研究細(xì)胞器靶向性和腫瘤靶向受體的精準(zhǔn)排布探究了精確調(diào)控納米顆粒腫瘤細(xì)胞靶向性的方法。本文的主要工作如下:（1）利用具有特定序列的端粒酶寡核苷酸引物,構(gòu)建一系列納米生物傳感器,并將之應(yīng)用于端粒酶提取物和活細(xì)胞內(nèi)端粒酶的高靈敏度檢測(cè),實(shí)現(xiàn)了腫瘤細(xì)胞提取物內(nèi)低至5個(gè)細(xì)胞的端粒酶檢測(cè),膀胱癌病人清尿與血尿樣本的檢出率分別達(dá)到100%和89.5%。此外,在腫瘤細(xì)胞內(nèi)成功實(shí)現(xiàn)了端粒酶的實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)。（2）基于具有特殊熒光弛豫時(shí)間信號(hào)的熒光納米金剛石（FND）與四氧化三鐵磁性納米顆粒（MNP）,制備了生物傳感器FND-DNA-MNP,證實(shí)了其對(duì)腫瘤... 

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【文章頁(yè)數(shù)】：168 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 引言
    1.2 無(wú)機(jī)納米材料與腫瘤診斷
        1.2.1 生物傳感器概述
        1.2.2 金納米材料與腫瘤診斷
        1.2.3 量子點(diǎn)與腫瘤診斷
        1.2.4 納米金剛石與腫瘤診斷
        1.2.5 磁性納米材料與腫瘤診斷
    1.3 核酸納米材料與腫瘤診斷
        1.3.1 核酸納米材料概述
        1.3.2 核酸適配體與腫瘤診斷
        1.3.3 核酸引物與腫瘤診斷
    1.4 無(wú)機(jī)納米材料與腫瘤治療
        1.4.1 金納米材料與腫瘤治療
        1.4.2 硒納米材料與腫瘤治療
        1.4.3 硅納米材料與腫瘤治療
    1.5 核酸納米材料與腫瘤治療
        1.5.1 DNA折紙結(jié)構(gòu)與腫瘤治療
        1.5.2 核酸枝狀大分子(Dendrimer)與腫瘤治療
        1.5.3 基于滾環(huán)擴(kuò)增(RCA)的DNA納米結(jié)構(gòu)與腫瘤治療
    1.6 選題思路
第二章 檢測(cè)端粒酶活性的DNA納米傳感器研究
    2.1 引言
        2.1.1 端粒酶與腫瘤診斷
        2.1.2 聚集誘導(dǎo)發(fā)光(AIE)分子
        2.1.3 本章研究目標(biāo)
    2.2 實(shí)驗(yàn)儀器與材料
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
        2.3.1 端粒酶提取
        2.3.2 引物延伸反應(yīng)
        2.3.3 體系熒光測(cè)試
        2.3.4 酶聯(lián)免疫吸附(Elisa)測(cè)試
        2.3.5 聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)測(cè)試
        2.3.6 端粒酶延伸反應(yīng)特異性測(cè)試
        2.3.7端粒酶活性抑制實(shí)驗(yàn)
        2.3.8 S1 核酸酶降解實(shí)驗(yàn)
        2.3.9 細(xì)胞內(nèi)端粒酶水平檢測(cè)
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 實(shí)驗(yàn)原理
        2.4.2 AIE效應(yīng)驗(yàn)證
        2.4.3 端粒酶延伸反應(yīng)條件優(yōu)化
        2.4.4 檢測(cè)體系背景熒光優(yōu)化
        2.4.5 檢測(cè)特異性對(duì)比
        2.4.6 端粒酶提取物熒光響應(yīng)測(cè)試
        2.4.7 細(xì)胞內(nèi)端粒酶活性檢測(cè)
    2.5 本章小結(jié)
第三章 基于熒光納米金剛石的生物傳感器設(shè)計(jì)及其應(yīng)用
    3.1 引言
        3.1.1 MicroRNA與腫瘤診斷
        3.1.2 熒光納米金剛石概述
        3.1.3 本章研究目標(biāo)
    3.2 實(shí)驗(yàn)儀器與材料
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
        3.3.1 雙鏈制備
        3.3.2 吸收、熒光光譜測(cè)定
        3.3.3 FND-C1 的制備
        3.3.4 MNP-C2 的制備
        3.3.5 生物傳感器FND-DNA-MNP的自組裝
        3.3.6 傳感器對(duì)靶標(biāo)miR-21 的響應(yīng)
        3.3.7 聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)測(cè)試
        3.3.8 動(dòng)態(tài)光散射(DLS)表征顆粒粒徑變化
        3.3.9 納米顆粒的透射電子顯微鏡(TEM)表征
        3.3.10 熒光弛豫時(shí)間測(cè)試
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 實(shí)驗(yàn)原理
        3.4.2 鏈置換反應(yīng)的熒光與凝膠電泳表征
        3.4.3 自組裝反應(yīng)優(yōu)化
        3.4.4 FND與 MNP的投料比優(yōu)化
        3.4.5 傳感器FND-DNA-MNP的表征
        3.4.6 熒光弛豫時(shí)間表征
        3.4.7 傳感器對(duì)靶標(biāo)miR-21 的原位響應(yīng)表征
    3.5 本章小結(jié)
第四章 基于DNA折紙技術(shù)探究腫瘤細(xì)胞靶向因子的最佳分布
    4.1 引言
        4.1.1 藥物載體
        4.1.2 轉(zhuǎn)鐵蛋白受體
        4.1.3 DNA折紙納米技術(shù)
        4.1.4 本章研究目標(biāo)
    4.2 實(shí)驗(yàn)儀器與材料
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
        4.3.1 DNA折紙結(jié)構(gòu)制備
        4.3.2 DNA折紙結(jié)構(gòu)純化
        4.3.3 生物素的NHS化修飾
        4.3.4 轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)的生物素化修飾
        4.3.5 DNA折紙結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)鐵蛋白定點(diǎn)修飾
        4.3.6 DNA折紙結(jié)構(gòu)的Cy5 熒光基團(tuán)雜交
        4.3.7 瓊脂糖凝膠電泳測(cè)試
        4.3.8 DNA折紙結(jié)構(gòu)的透射電子顯微鏡(TEM)表征
        4.3.9 DNA折紙結(jié)構(gòu)的原子力顯微鏡(AFM)表征
        4.3.10細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 實(shí)驗(yàn)原理
        4.4.2 DNA折紙結(jié)構(gòu)ONR的設(shè)計(jì)與表征
        4.4.3 ONR-Tf結(jié)構(gòu)的表征
        4.4.4 ONR結(jié)構(gòu)的Cy5 標(biāo)記表征
        4.4.5 不同ONR結(jié)構(gòu)的細(xì)胞攝取效率對(duì)比
        4.4.6 Tf-TfR識(shí)別過(guò)程抑制實(shí)驗(yàn)
    4.5 本章小結(jié)
第五章 線粒體靶向無(wú)機(jī)硒納米顆粒的抗腫瘤研究
    5.1 引言
        5.1.1 硒納米顆粒
        5.1.2 ROS與細(xì)胞凋亡
        5.1.3 本章研究目標(biāo)
    5.2 實(shí)驗(yàn)儀器與材料
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
        5.3.1 HSA蛋白的TPP功能化修飾
        5.3.2 HSA與 HSA-TPP的熒光標(biāo)記
        5.3.3 cHSA的制備與標(biāo)記
        5.3.4 硒納米顆粒(SeNPs)的制備
        5.3.5 蛋白質(zhì)的Maldi-Tof-MS表征
        5.3.6 變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)測(cè)試
        5.3.7 SeNPs的透射電子顯微鏡(TEM)成像表征
        5.3.8 功能化修飾蛋白與SeNPs的細(xì)胞毒性測(cè)試
        5.3.9活細(xì)胞內(nèi)線粒體共定位實(shí)驗(yàn)
        5.3.10 活細(xì)胞內(nèi)ROS水平測(cè)試
        5.3.11 活細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位變化測(cè)試
        5.3.12活細(xì)胞內(nèi)ROS抑制實(shí)驗(yàn)
    5.4 結(jié)果與討論
        5.4.1 實(shí)驗(yàn)原理
        5.4.2 蛋白質(zhì)HSA的正電荷化修飾與表征
        5.4.3 cHSA@SeNPs的表征與胞內(nèi)測(cè)試
        5.4.4 蛋白質(zhì)HSA的功能化修飾與表征
        5.4.5 HSA-TPP靶向修飾蛋白的生物相容性探究
        5.4.6 SeNPs的制備與表征
        5.4.7 靶向基團(tuán)修飾對(duì)SeNPs抗腫瘤效果提升的機(jī)理研究
    5.5 本章小結(jié)
第六章 總結(jié)與展望
    6.1 全文總結(jié)
    6.2 工作展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄 攻讀博士學(xué)位期間已發(fā)表與待發(fā)表論文目錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]MicroRNA的超靈敏檢測(cè)研究進(jìn)展[J]. 王子月,劉萌,張春陽(yáng).  高等學(xué)�；瘜W(xué)學(xué)報(bào). 2017(01)
[2]嵌段共聚物調(diào)控納米粒子自組裝的研究進(jìn)展[J]. 馬世營(yíng),汪蓉.  高分子學(xué)報(bào). 2016(08)
[3]DNA折紙術(shù)納米反應(yīng)器[J]. 賈思思,晁潔,樊春海,柳華杰.  化學(xué)進(jìn)展. 2014(05)
[4]無(wú)標(biāo)記microRNA芯片分析方法的建立與優(yōu)化[J]. 段德民,惠利省,李麗詩(shī),閻錫蘊(yùn),李炯.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2013(05)
[5]痰標(biāo)本檢測(cè)p53基因突變及其在肺癌早期臨床診斷中的意義（英文）[J]. 汪斌超,李龍蕓,姚連昌,劉麗華,朱元玨.  Chinese Medical Journal. 2001(07)



本文編號(hào)：3207011