目的:自噬是一種進化上保守的分解代謝過程,對維持細胞穩(wěn)態(tài)起著十分重要的作用。多年來自噬被認為是一種隨機過程,隨著科學研究的不斷深入,越來越多的研究表明自噬是一種受到嚴格控制的選擇性的過程。代謝重編程是惡性腫瘤細胞的顯著特征之一,細胞代謝的改變使腫瘤細胞能夠維持其日益增長的能量需求。由于惡性增殖的腫瘤細胞,通常以糖酵解的方式獲得能量,所以大多數(shù)的腫瘤代謝研究都集中在糖代謝方面。在快速增殖的腫瘤細胞中,谷氨酰胺被大量消耗,谷氨酰胺代謝替代“Warburg效應”產生ATP,為腫瘤細胞提供能量,谷氨酰胺代謝逐漸被人們所重視。谷氨酰胺代謝由谷氨酰胺酶（Glutaminase,GLS）催化脫氨開始,在線粒體中產生谷氨酸和氨。谷氨酰胺代謝發(fā)生在所有的增殖細胞中,在維持生物能量和為生物大分子合成提供氮、硫和碳骨架等方面發(fā)揮著關鍵作用。谷氨酰胺代謝在調節(jié)氧化還原平衡、mTOR信號傳導等方面也起著重要的作用。此外,谷氨酰胺代謝是細胞氨的重要來源,它可誘導腫瘤細胞自噬。Bcl-2相關永生基因3（Bcl-2 associated athanogene,BAG3）是一種非常重要的分子,通過多種機制維持腫瘤細胞的... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
1 前言
    1.1 自噬
    1.2 BAG3
    1.3 谷氨酰胺代謝與谷氨酰胺酶
    1.4 立題背景
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞系
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 慢病毒感染目的細胞
        2.2.2 總RNA提取與純化
        2.2.3 反轉錄合成c DNA
        2.2.4 實時定量PCR(RT-qPCR)
        2.2.5 蛋白免疫印跡分析
        2.2.6 質粒提取
        2.2.7 轉染
        2.2.8 免疫共沉淀
        2.2.9 In vivo泛素化檢測
        2.2.10 谷氨酸生成測定
        2.2.11 氨測定
        2.2.12 谷氨酰胺消耗測定
        2.2.13 α-酮戊二酸分析測定
        2.2.14 透射電鏡
        2.2.15 放線菌酮(CHX)法測定蛋白質穩(wěn)定性
        2.2.16 熒光顯微鏡觀察EGFP-LC3B自噬斑點的數(shù)量及分布
    2.3 數(shù)據(jù)分析
3 結果
    3.1 過表達BAG3誘導自噬
    3.2 過表達BAG3誘導自噬不依賴于Beclin1和PtdIns3K
    3.3 BAG3通過上調谷氨酰胺酶(GLS)促進自噬
    3.4 BAG3通過抑制GLS的蛋白酶體降解來穩(wěn)定GLS
    3.5 過表達BAG3增加了GLS Lys158和Lys164 位點的琥珀酰化水平
    3.6 Lys158和Lys164 位點的琥珀�；ㄟ^抑制Lys48 位的泛素化來穩(wěn)定GLS
4 討論
5 結論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Selective role of autophagy in neuronal function and neurodegenerative diseases[J]. Yan-Ning Rui,Weidong Le.  Neuroscience Bulletin. 2015(04)



本文編號：3206614