目的:自噬是一種進(jìn)化上保守的分解代謝過(guò)程,對(duì)維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)起著十分重要的作用。多年來(lái)自噬被認(rèn)為是一種隨機(jī)過(guò)程,隨著科學(xué)研究的不斷深入,越來(lái)越多的研究表明自噬是一種受到嚴(yán)格控制的選擇性的過(guò)程。代謝重編程是惡性腫瘤細(xì)胞的顯著特征之一,細(xì)胞代謝的改變使腫瘤細(xì)胞能夠維持其日益增長(zhǎng)的能量需求。由于惡性增殖的腫瘤細(xì)胞,通常以糖酵解的方式獲得能量,所以大多數(shù)的腫瘤代謝研究都集中在糖代謝方面。在快速增殖的腫瘤細(xì)胞中,谷氨酰胺被大量消耗,谷氨酰胺代謝替代“Warburg效應(yīng)”產(chǎn)生ATP,為腫瘤細(xì)胞提供能量,谷氨酰胺代謝逐漸被人們所重視。谷氨酰胺代謝由谷氨酰胺酶（Glutaminase,GLS）催化脫氨開(kāi)始,在線粒體中產(chǎn)生谷氨酸和氨。谷氨酰胺代謝發(fā)生在所有的增殖細(xì)胞中,在維持生物能量和為生物大分子合成提供氮、硫和碳骨架等方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。谷氨酰胺代謝在調(diào)節(jié)氧化還原平衡、mTOR信號(hào)傳導(dǎo)等方面也起著重要的作用。此外,谷氨酰胺代謝是細(xì)胞氨的重要來(lái)源,它可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞自噬。Bcl-2相關(guān)永生基因3（Bcl-2 associated athanogene,BAG3）是一種非常重要的分子,通過(guò)多種機(jī)制維持腫瘤細(xì)胞的... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
1 前言
    1.1 自噬
    1.2 BAG3
    1.3 谷氨酰胺代謝與谷氨酰胺酶
    1.4 立題背景
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞系
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 慢病毒感染目的細(xì)胞
        2.2.2 總RNA提取與純化
        2.2.3 反轉(zhuǎn)錄合成c DNA
        2.2.4 實(shí)時(shí)定量PCR(RT-qPCR)
        2.2.5 蛋白免疫印跡分析
        2.2.6 質(zhì)粒提取
        2.2.7 轉(zhuǎn)染
        2.2.8 免疫共沉淀
        2.2.9 In vivo泛素化檢測(cè)
        2.2.10 谷氨酸生成測(cè)定
        2.2.11 氨測(cè)定
        2.2.12 谷氨酰胺消耗測(cè)定
        2.2.13 α-酮戊二酸分析測(cè)定
        2.2.14 透射電鏡
        2.2.15 放線菌酮(CHX)法測(cè)定蛋白質(zhì)穩(wěn)定性
        2.2.16 熒光顯微鏡觀察EGFP-LC3B自噬斑點(diǎn)的數(shù)量及分布
    2.3 數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)果
    3.1 過(guò)表達(dá)BAG3誘導(dǎo)自噬
    3.2 過(guò)表達(dá)BAG3誘導(dǎo)自噬不依賴于Beclin1和PtdIns3K
    3.3 BAG3通過(guò)上調(diào)谷氨酰胺酶(GLS)促進(jìn)自噬
    3.4 BAG3通過(guò)抑制GLS的蛋白酶體降解來(lái)穩(wěn)定GLS
    3.5 過(guò)表達(dá)BAG3增加了GLS Lys158和Lys164 位點(diǎn)的琥珀�；�
    3.6 Lys158和Lys164 位點(diǎn)的琥珀酰化通過(guò)抑制Lys48 位的泛素化來(lái)穩(wěn)定GLS
4 討論
5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Selective role of autophagy in neuronal function and neurodegenerative diseases[J]. Yan-Ning Rui,Weidong Le.  Neuroscience Bulletin. 2015(04)



本文編號(hào)：3206614