背景:阻塞性睡眠呼吸暫停（OSA）是最常見(jiàn)的睡眠呼吸紊亂類(lèi)型,慢性間斷性缺氧（CIH）是OSA的主要病理生理特征。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),單純的OSA是慢性腎臟�。–KD）的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。腎小管周毛細(xì)血管（PTC）喪失和腎臟纖維化是CKD的主要特征。大量的研究表明,血管緊張素II受體阻滯劑（ARBs）除了降低血壓外,還具有減少PTC喪失,減輕腎臟細(xì)胞凋亡、抑制腎纖維化,延緩CKD進(jìn)展的作用。但CIH誘導(dǎo)PTC喪失和腎臟纖維化的分子機(jī)制及氯沙坦（losartan）的腎臟保護(hù)作用尚不完全清楚。目的:本課題通過(guò)OSA動(dòng)物模型研究CIH誘導(dǎo)PTC喪失和腎臟纖維化的病理機(jī)制,并了解氯沙坦干預(yù)對(duì)CIH腎臟損害的保護(hù)作用。進(jìn)一步通過(guò)間斷性缺氧（IH）細(xì)胞實(shí)驗(yàn),初步探討IH對(duì)腎小管上皮細(xì)胞（TEC）的損害及氯沙坦的干預(yù)作用。本研究?jī)?nèi)容分為三部分,第一部分探討CIH誘導(dǎo)大鼠PTC喪失的機(jī)制及氯沙坦的保護(hù)作用。第二部分研究氯沙坦對(duì)CIH誘導(dǎo)的大鼠TEC凋亡、腎小管上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化（EMT）、腎臟纖維化的干預(yù)作用;第三部分為IH對(duì)人近端腎小管上皮細(xì)胞（HK-2）凋亡和損傷的影響及氯沙坦干預(yù)的體外研究。方法:第... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
常用縮略詞中引文對(duì)照表
第一部分 前言
    1.阻塞性睡眠呼吸暫停和慢性腎臟疾病概述
    2.OSA和 CKD的發(fā)病情況
    3.OSA與 CKD的臨床特點(diǎn)
    4.OSA導(dǎo)致CKD的病理機(jī)制
        4.1 直接途徑-缺氧
        4.2 間接途徑
            4.2.1 RAAS激活
            4.2.2 交感神經(jīng)興奮性增強(qiáng)
            4.2.3 氧化應(yīng)激
            4.2.4 高血壓
            4.2.5 內(nèi)皮功能紊亂和動(dòng)脈粥樣硬化
    5.CKD導(dǎo)致OSA的病理機(jī)制
        5.1 上氣道狹窄
        5.2 化學(xué)感受性反射改變
第二部分 氯沙坦通過(guò)調(diào)節(jié)腎臟腎素-血管緊張素系統(tǒng)和血管生成因子減輕慢性間斷性缺氧誘導(dǎo)的大鼠腎小管周毛細(xì)血管喪失
    1.前言
    2.材料與方法
        2.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2 主要試劑與耗材
        2.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑配制
        2.4 動(dòng)物分組及間斷性缺氧設(shè)備
            2.4.1 動(dòng)物來(lái)源
            2.4.2 動(dòng)物分組
            2.4.3 間斷性缺氧設(shè)備
        2.5 慢性間斷性缺氧實(shí)驗(yàn)
        2.6 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本采集
        2.7 腎臟功能檢測(cè)
        2.8 腎臟病理學(xué)檢查
            2.8.1 蘇木精-伊紅(HE)染色
            2.8.2 免疫組化檢測(cè)大鼠腎臟CD34、HIF-1α、AT1R、VEGF和 TSP-表達(dá)
            2.8.3 透射電鏡檢查
        2.9 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)大鼠腎臟AngII的水平
        2.10 RT-qPCR檢測(cè)大鼠腎臟HIF-1α、AT1R、VEGF和 TSP-1mRNA表達(dá)
            2.10.1 TRIzol法提取RNA
            2.10.2 檢測(cè)RNA濃度
            2.10.3 RNA反轉(zhuǎn)錄成c DNA
            2.10.4 RT-qPCR反應(yīng)
            2.10.5 結(jié)果分析
        2.11 免疫印跡試驗(yàn)檢測(cè)大鼠腎臟HIF-1α、AT1R、VEGF和 TSP-1 蛋白表達(dá)
            2.11.1 腎臟蛋白提取
            2.11.2 BCA法檢測(cè)蛋白質(zhì)濃度
            2.11.3 SDD-PAGE電泳
            2.11.4 轉(zhuǎn)模
            2.11.5 封閉
            2.11.6 一抗孵育
            2.11.7 二抗孵育
            2.11.8 曝光
            2.11.9 蛋白表達(dá)檢測(cè)
    3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.結(jié)果
        4.1 CIH和氯沙坦對(duì)大鼠體重和腎臟功能的影響
        4.2 氯沙坦減輕CIH誘導(dǎo)的大鼠TEC損傷
        4.3 氯沙坦減輕CIH誘導(dǎo)的大鼠TEC超微結(jié)構(gòu)損傷
        4.4 氯沙坦減輕CIH誘導(dǎo)的大鼠PTC超微結(jié)構(gòu)損害
        4.5 氯沙坦減輕CIH誘導(dǎo)的大鼠PTC喪失
        4.6 氯沙坦減輕CIH誘導(dǎo)的大鼠腎臟HIF-1α表達(dá)
        4.7 氯沙坦減輕CIH誘導(dǎo)的大鼠腎臟RAS激活
            4.7.1 氯沙坦降低CIH誘導(dǎo)的大鼠腎臟Ang II水平
            4.7.2 氯沙坦減輕CIH誘導(dǎo)的大鼠腎臟AT1R表達(dá)
        4.8 氯沙坦調(diào)節(jié)CIH誘導(dǎo)的大鼠腎臟血管生成因子失衡
        4.9 氯沙坦下調(diào)CIH誘導(dǎo)的大鼠腎臟HIF-1α、AT1R、VEGF和 TSP-1mRNA表達(dá)
        4.10 免疫印跡試驗(yàn)證實(shí)氯沙坦下調(diào)CIH誘導(dǎo)的大鼠腎臟HIF-1α、AT1R、VEGF和 TSP-1 蛋白表達(dá)
    5.討論
第三部分 氯沙坦通過(guò)抑制腎小管上皮細(xì)胞凋亡和上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化減輕CIH誘導(dǎo)的大鼠腎臟纖維化
    1.前言
    2.材料與方法
        2.1 大鼠腎臟Masson染色
        2.2 大鼠腎臟天狼猩紅染色
        2.3 TUNEL法檢測(cè)大鼠腎小管上皮細(xì)胞凋亡
        2.4 免疫組化檢測(cè)大鼠腎臟Bcl-2、Bax、Caspase-3、TGF-β1、CTGF、E-cad和α-SMA表達(dá)
        2.5 RT-qPCR檢測(cè)大鼠腎臟Bcl-2、Bax、Caspase-3、TGF-β1、CTGF、E-cad和α-SMA mRNA表達(dá)
        2.6 免疫印跡試驗(yàn)檢測(cè)大鼠腎臟Bcl-2、Bax、Caspase-3、TGF-β1、CTGF、E-cad和α-SMA蛋白表達(dá)
    3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.結(jié)果
        4.1 氯沙坦減輕CIH誘導(dǎo)的大鼠腎臟纖維化
        4.2 氯沙坦減輕CIH誘導(dǎo)的大鼠腎臟腎小管上皮細(xì)胞凋亡
        4.3 氯沙坦調(diào)節(jié)大鼠腎臟Bcl-2、Bax、Caspase-3 表達(dá)
        4.4 氯沙坦降低CIH誘導(dǎo)的大鼠腎臟TGF-β1、CTGF表達(dá)
        4.5 氯沙坦減輕CIH誘導(dǎo)的大鼠腎小管上皮細(xì)胞EMT
        4.6 氯沙坦調(diào)節(jié)CIH誘導(dǎo)的大鼠腎臟Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表達(dá)
        4.7 氯沙坦調(diào)節(jié)CIH誘導(dǎo)的大鼠腎臟TGF-β1、CTGF、E-cad和α-SMAmRNA表達(dá)
        4.8 免疫印跡試驗(yàn)檢測(cè)氯沙坦對(duì)CIH誘導(dǎo)的大鼠腎臟Bcl-2、Bax、Caspase-3 蛋白表達(dá)的影響
        4.9 免疫印跡試驗(yàn)檢測(cè)氯沙坦對(duì)CIH誘導(dǎo)的大鼠腎臟TGF-β1、CTGF、E-cad和α-SMA蛋白表達(dá)的影響
    5.討論
第四部分 :氯沙坦減輕間斷性缺氧誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡的體外實(shí)驗(yàn)研究
    1.前言
    2.材料和方法
        2.1 細(xì)胞
        2.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        2.3 主要試劑與耗材
        2.4 主要試劑的配制
        2.5 細(xì)胞復(fù)蘇
        2.6 細(xì)胞傳代
        2.7 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        2.8 細(xì)胞凍存
        2.9 實(shí)驗(yàn)分組及IH模型暴露細(xì)胞
        2.10 倒置顯微鏡觀察HK-2細(xì)胞形態(tài)
        2.11 MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活
        2.12 流式細(xì)胞術(shù)定量檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        2.13 RT-qPCR檢測(cè)HK-2 細(xì)胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表達(dá)
        2.14 免疫印跡試驗(yàn)檢測(cè)HK-2 細(xì)胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 蛋白表達(dá)
    3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.結(jié)果
        4.1 各組HK-2細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變
        4.2 氯沙坦減輕IH誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞活性降低
        4.3 氯沙坦抑制IH誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞凋亡
        4.4 氯沙坦調(diào)節(jié)IH誘導(dǎo)的HK-2 細(xì)胞Bcl-2、Bax和 Caspase-3 mRNA表達(dá)
        4.5 氯沙坦調(diào)節(jié)IH誘導(dǎo)的HK-2 細(xì)胞Bcl-2、Bax和 Caspase-3 蛋白表達(dá)
    5.討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間的研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]我國(guó)慢性腎臟病防治政策及策略研究——基于衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)學(xué)視角[J]. 杜曄,孟群.  中國(guó)衛(wèi)生政策研究. 2018(07)
[2]細(xì)胞凋亡與腎臟纖維化[J]. 劉其鋒,葉建明,李莎莎.  中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志. 2018(04)
[3]上海市慢性腎臟病三級(jí)防治體系優(yōu)勢(shì)及推廣意義[J]. 王九生,石錦浩,徐波,鄔碧波,顧春英,梅長(zhǎng)林.  第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2018(01)
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[7]How tubular epithelial cells dictate the rate of renal fibrogenesis?[J]. Kevin Louis,Alexandre Hertig.  World Journal of Nephrology. 2015(03)
[8]慢性間歇性低氧對(duì)大鼠腎臟氧化應(yīng)激損傷及HIF-1α表達(dá)的影響[J]. 李婷,李秀翠,梁冬施,溫正旺,梅紅芳,曹紅超,蘇苗賞,蔡曉紅.  中國(guó)病理生理雜志. 2015(02)
[9]金屬硫蛋白對(duì)慢性間斷缺氧所致腎臟損傷的保護(hù)作用[J]. 孫偉霞,尹霞,傅耀文,許鐘鎬.  中華腎臟病雜志. 2014 (05)
[10]馬兜鈴酸致腎小管周?chē)?xì)血管丟失的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究[J]. 劉圓圓,李藝,王帥,官濤,鄭科,黃云劍.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2014(06)

博士論文
[1]OSAHS動(dòng)物模型的建立及對(duì)老年冠心病預(yù)后的研究[D]. 楊宇.中南大學(xué) 2006
[2]缺氧對(duì)瘢痕成纖維細(xì)胞的生物學(xué)作用和瘢痕缺氧環(huán)境的變化及其機(jī)制[D]. 李高峰.中南大學(xué) 2004
[3]CTGF在介導(dǎo)腎臟肥大中的作用——體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究[D]. 劉必成.南京醫(yī)科大學(xué) 2004



本文編號(hào)：3204616