研究背景腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移與腫瘤微環(huán)境密切相關(guān)。腫瘤微環(huán)境是由間充質(zhì)干細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)等共同構(gòu)成的局部微環(huán)境。腫瘤細(xì)胞與腫瘤微環(huán)境的各種成分之間相互作用,相互影響,從而促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT）、血管生成等。間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem/stromal cells,MSCs）是一類成體干細(xì)胞,來(lái)源于骨髓、脂肪等體內(nèi)多種組織,具有自我更新和成脂、成骨、成軟骨等多系分化能力。MSCs還具有重要的免疫調(diào)節(jié)功能,能夠抑制T細(xì)胞和B細(xì)胞的增殖,影響DC細(xì)胞的分化成熟。MSCs還可以被腫瘤細(xì)胞募集到腫瘤組織中,形成腫瘤微環(huán)境中的重要組成成分。腫瘤細(xì)胞可以通過細(xì)胞-細(xì)胞間的直接接觸或者旁分泌的方式影響周圍的細(xì)胞,從而促進(jìn)腫瘤自身的生長(zhǎng)和發(fā)展。外泌體（exosomes）是細(xì)胞分泌的一種囊泡結(jié)構(gòu),大小在30到100nm之間,由磷脂雙分子層包裹形成。外泌體中含有大量功能性蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA、DNA片段等多種生物活性物質(zhì),可以介導(dǎo)細(xì)胞之間的物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)和信息傳遞。越來(lái)越多的研究表明... 

【文章來(lái)源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１．?ｈＡＭＳＣｓ細(xì)胞形態(tài)與表型??Ａ．顯微鏡下ｈＡＭＳＣｓ細(xì)胞形態(tài)；Ｂ．?ｈＡＭＳＣｓ流式表型鑒定

二、ｈＡＭＳＣｓ向成骨分化及鑒定??在成骨分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)生長(zhǎng)，在成骨誘導(dǎo)第３天進(jìn)行堿性磷酸酶ＡＬＰ??染色，可以觀察到ＡＬＰ染色陽(yáng)性的成骨細(xì)胞（圖２Ａ）。成骨誘導(dǎo)分化第１２天，出??現(xiàn)明顯的細(xì)胞外基質(zhì)的分泌和鈣化沉積，使用茜素紅染色呈現(xiàn)陽(yáng)性（圖２Ｂ）。分別??在成骨誘導(dǎo)的第０、３、６、９、１２天Ｔｒｉｚｏｌ收�。遥危翗悠罚褂茫颍澹幔�?ｔｉｍｅ?ＰＣＲ法對(duì)??成骨分化標(biāo)志性基因ｆｌ／ｐ、的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，隨著成骨??誘導(dǎo)時(shí)間的推移，成骨分化關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子及標(biāo)志性基因的表達(dá)不斷增加（圖２Ｃ）。??表明ｈＡＭＳＣｓ可以被誘導(dǎo)分化形成成骨細(xì)胞。??Ａ?Ｃ?ａｌｐ?ｏｃｎ??１?］?Ｉ??＾?�。�?ｙ??Ｂ?ｒｕｎｘ２??１０－１??－８－??＾?６＇??．?二紀(jì)＇、丨〇＂＊—ｉ?１?１?１?１—??４＞?＾?＾??圖２?ｈＡＭＳＣｓ成骨分化染色及成骨相關(guān)基因表達(dá)檢測(cè)??Ａ．成骨分化第３天ＡＬＰ染色；Ｂ．成骨分化第１２天茜素紅染色；Ｃ．?ｒｅａ丨ｔｉｍｅ?ＰＣＲ??檢測(cè)成骨分化過程中（第０、３、６、９、１２天）成骨分化標(biāo)志性基因的表達(dá)。??標(biāo)尺：２００｜ｉｍ。??２７??

更換為無(wú)血清ＤＦ１２培養(yǎng)基，培養(yǎng)２４？４８?ｈ后，收集培養(yǎng)上清，超速離心分離提取出??ｅｘｏｓｏｍｅｓ。透射電鏡觀察可見，適當(dāng)濃度稀釋后，我們可以觀察到大量外膜深染的??圓形或類圓形微小囊泡小體，直徑約為３０－１００?ｎｍ?（圖４Ａ）。通過Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ實(shí)驗(yàn)??也證實(shí)，這些微囊泡陽(yáng)性表達(dá)ｅｘｏｓｏｍｅｓ的標(biāo)志蛋白ＣＤ６３和ＨＳＰ７０?（圖４Ｂ）。??Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃａｌ?ｔｒａｃｋｉｎｇ?ａｎａｌｙｓｉｓ?（ＮＴＡ），納米顆粒追蹤分析（圖４Ｃ）顯不出ｅｘｏｓｏｍｅｓ??的直徑分布范圍，有三個(gè)峰值，分別在４４?ｎｍ、６９?ｎｍ和９５?ｎｍ，最大峰值為９５?ｎｍ，??平均直徑在７３．１５?ｎｍ±４１．８１?ｎｍ，表明Ａ５４９細(xì)胞分泌的外泌體大小并不均一。??醒ｍ??－＊?．?？?．．．？?／，?ｎ．?．？ｃ?ｉ?ｆｉＢ??圖４?Ａ５４９細(xì)胞來(lái)源的ｅｘｏｓｏｍｅｓｓ的鑒定結(jié)果??Ａ、Ａ５４９細(xì)胞來(lái)源的ｅｘｏｓｏｍｅｓ?透射電鏡照片（Ｓｃａｌｅｂａｒ＝２００ｎｍ）；?Ｂ．?Ｅｘｏｓｏｍｅｓ??表面標(biāo)志物ＣＤ６３、ＨＳＰ７０?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ鑒定結(jié)果。Ａ５４９細(xì)胞裂解液用作陽(yáng)性對(duì)照，??樣品１上樣量為１?ｕｇ，樣品２上樣量為ｌＯｕｇｃ＾ＣＮＴＡ分析顯示ｅｘｏｓｏｍｅｓ的大小及分布。??２９??


本文編號(hào)：3112713