發(fā)布時(shí)間：2017-04-11 14:26

  本文關(guān)鍵詞：高糖微環(huán)境通過(guò)GSK3β調(diào)控Cyclin D1、CXCR-4影響大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖遷移，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：糖尿病患者接受口腔種植術(shù)后比正常缺失牙患者的高失敗率越來(lái)越被受到口腔種植方面研究的重視。糖尿病是一種常見(jiàn)的內(nèi)分泌疾病,血糖高是糖尿病的主要癥狀。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)糖尿病可以造成骨代謝異常,成骨質(zhì)量不佳。而成骨質(zhì)量與口腔種植的成功與否有著密切的聯(lián)系。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)在骨代謝方面發(fā)揮著巨大的作用。已有研究證實(shí)在高糖環(huán)境下BMSCs的生理功能受到影響從而影響到成骨的質(zhì)量[2]。糖原合成激酶3β (GSK3β)是生物學(xué)功能多樣的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,GSK3β是糖代謝的重要調(diào)控蛋白,在葡萄糖水平的調(diào)節(jié)以及糖尿病相關(guān)指標(biāo)的改變上發(fā)揮著重要的作用。GSK3β可以調(diào)控β-Catenin的磷酸化及穩(wěn)定,而Cyclin D1是β-catenin/LEF-1通路下游的靶基因,同時(shí)也是一個(gè)與細(xì)胞增殖密切相關(guān)的因子。而也有研究證實(shí)抑制GSK3β可以通過(guò)上調(diào)CXCR-4的表達(dá)來(lái)促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移能力。因此GSK3β是一個(gè)與Cyclin D1以及CXCR-4關(guān)系密切的因子。干細(xì)胞微環(huán)境是指影響干細(xì)胞增殖分化等生理功能的一切因素。本實(shí)驗(yàn)采用高糖微環(huán)境誘導(dǎo)大鼠來(lái)源的BMSCs,觀察高糖微環(huán)境條件下的BMSCs細(xì)胞增殖及定向遷移能力,同時(shí)結(jié)合GSK3β、Cyclin D1以及CXCR-4進(jìn)一步探討高糖微環(huán)境調(diào)控BMSCs增殖以及定向遷移能力的機(jī)理。為糖尿病影響口腔種植成功率提供基礎(chǔ)依據(jù)。第一部分大鼠BMSCs的提取、鑒定及生物學(xué)功能檢測(cè)目的：從SD大鼠提取BMSCs并對(duì)其表面分子標(biāo)志物進(jìn)行鑒定,檢測(cè)其增殖、克隆形成能力以及成脂成骨分化能力。方法：從3周齡SD大鼠提取BMSCs,體外傳代培養(yǎng)。利用流式細(xì)胞儀對(duì)干細(xì)胞表面分子標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè),采用噻唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)其增殖能力,采用克隆形成買驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的克隆形成能力,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行成脂成骨誘導(dǎo)及染色,檢測(cè)細(xì)胞的多項(xiàng)分化能力。結(jié)果：提取的BMSCs呈紡錘形,流式細(xì)胞儀檢測(cè)表面標(biāo)志物：CD90、CD105陽(yáng)性,CD34、CD45呈陰性,生長(zhǎng)第3天進(jìn)入對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期,第6天進(jìn)入平臺(tái)期,具有克隆形成能力和成骨及成脂的多項(xiàng)分化潛能。結(jié)論：成功提取出SD大鼠的BMSCs,細(xì)胞符合干細(xì)胞的表面CD表型,具有增殖的潛能以及克隆形成的能力,具有多項(xiàng)分化潛能。第二部分高糖微環(huán)境通過(guò)抑制Cyclin D1影響B(tài)MSCs的增殖目的：結(jié)合Cyclin D1探討高糖微環(huán)境對(duì)于BMSCs增殖的影響方法：采用噻唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)不同糖濃度下(5.5mM,16.5mM) BMSCs的增殖能力,利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)高糖微環(huán)境對(duì)BMSCs細(xì)胞周期的影響。采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)高糖微環(huán)境對(duì)Cyclin D1表達(dá)的影響。Western Blots檢測(cè)高糖微環(huán)境對(duì)Cyclin D1及CDK4表達(dá)的影響。結(jié)果：噻唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)結(jié)果顯示高糖微環(huán)境可以抑制BMSCs的增殖,同時(shí)細(xì)胞周期結(jié)果顯示高糖微環(huán)境可以抑制細(xì)胞從G1期向S期過(guò)度。RT-PCR及Western blots結(jié)果顯示高糖微環(huán)境可以抑制細(xì)胞Cyclin D1及CDK4的表達(dá)。結(jié)論：高糖微環(huán)境可以通過(guò)抑制BMSCs中Cyclin D1的表達(dá)影響細(xì)胞的增殖能力。第三部分高糖微環(huán)境通過(guò)抑制CXCR-4影響B(tài)MSCs的定向遷移目的：結(jié)合CXCR-4探討高糖微環(huán)境對(duì)于BMSCs定向遷移能力的影響。方法：采用Transwell技術(shù)檢測(cè)不同糖濃度下(5.5mM,16.5mM) SDF-1以及CXCR-4抑制劑AMD3100對(duì)BMSCs定向遷移能力的影響。利用RT-PCR以及Western Blots檢測(cè)高糖微環(huán)境對(duì)細(xì)胞CXCR-4表達(dá)的影響。結(jié)果：在不同糖濃度下SDF-1均可以促進(jìn)BMSCs的定向遷移,AMD3100可以抑制SDF-1的促進(jìn)作用。高糖微環(huán)境可以抑制BMSCs在SDF-1條件下的定向遷移能力。RT-PCR及Western blots結(jié)果顯示高糖微環(huán)境可以抑制CXCR-4的表達(dá)。結(jié)論：高糖微環(huán)境可以通過(guò)抑制CXCR-4的表達(dá)影響SDF-1/CXCR-4生物軸調(diào)控BMSCs的定向遷移能力。第四部分高糖微環(huán)境通過(guò)GSK3β調(diào)控BMSCs的增殖及定向遷移目的：結(jié)合GSK3β、CyclinD1、CXCR-4探討高糖微環(huán)境對(duì)于BMSCs增殖以及定向遷移能力的影響。方法：利用Western Blots檢測(cè)高糖微環(huán)境以及LiCl對(duì)不同糖濃度下GSK3β、 β-Catenin表達(dá)的影響。利用RT-PCR檢測(cè)高糖微環(huán)境以及LiCl對(duì)不同糖濃度下LEF-1、CyclinD1、CXCR-4表達(dá)的影響。利用MTT檢測(cè)LiCl對(duì)不同糖濃度下BMSCs增殖能力的影響,利用細(xì)胞周期檢測(cè)LiCl對(duì)不同糖濃度下BMSCs細(xì)胞周期的影響,利用Transwell檢測(cè)LiCl對(duì)不同糖濃度下BMSCs在SDF-1誘導(dǎo)狀態(tài)下的定向遷移能力的影響。結(jié)果：高糖微環(huán)境可以促進(jìn)GSK3β的表達(dá)抑制β-Catenin、LEF-1及下游因子Cyclin D1的表達(dá),抑制GSK3β可以促進(jìn)β-Catenin、LEF-1及Cyclin D1的表達(dá)。高糖微環(huán)境可以抑制CXCR-4的表達(dá),抑制GSK3β后可以促進(jìn)CXCR-4的表達(dá)。高糖微環(huán)境可以抑制BMSCs的增殖及定向遷移的能力,抑制GSK3β可以促進(jìn)BMSCs的增殖及定向遷移能力。對(duì)于細(xì)胞周期高糖微環(huán)境可以抑制細(xì)胞從G1期向S期過(guò)渡,而抑制GSK3β可以促進(jìn)細(xì)胞從G1期向S期過(guò)渡。結(jié)論：高糖微環(huán)境可以通過(guò)激活GSK3β抑制Cyclin D1、CXCR-4的表達(dá)影響B(tài)MSCs的增殖定向遷移能力。
【關(guān)鍵詞】：高糖微環(huán)境 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 GSK3β Cyclin D1 CXCR-4
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R587.2;R783
【目錄】：

• 略縮詞表6-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-16
• 第一部分 大鼠BMSCs的提取、鑒定及生物學(xué)功能檢測(cè)16-25
• 引言16
• 1. 材料方法16-19
• 2. 結(jié)果19-22
• 3. 討論22-25
• 第二部分 高糖微環(huán)境通過(guò)抑制Cyclin D1影響B(tài)MSCs的增殖25-35
• 引言25
• 1. 材料方法25-30
• 2. 結(jié)果30-33
• 3. 討論33-35
• 第三部分 高糖微環(huán)境通過(guò)抑制CXCR-4影響B(tài)MSCs的定向遷移35-41
• 引言35
• 1. 材料方法35-37
• 2. 結(jié)果37-39
• 3. 討論39-41
• 第四部分 高糖微環(huán)境通過(guò)GSK3β調(diào)控BMSCs的增殖及定向遷移41-52
• 引言41-42
• 1. 材料方法42-43
• 2. 結(jié)果43-49
• 3. 討論49-52
• 全文小結(jié)52-54
• 參考文獻(xiàn)54-63
• 文獻(xiàn)綜述63-71
• 參考文獻(xiàn)67-71
• 在讀期間發(fā)表論文情況71-72
• 致謝72

  本文關(guān)鍵詞：高糖微環(huán)境通過(guò)GSK3β調(diào)控Cyclin D1、CXCR-4影響大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖遷移，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：299304