本文關(guān)鍵詞：酪氨酸激酶受體B在冠心病中的作用及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景冠心病(Coronary artery disease, CAD)是中老年人常見的一種心血管疾病,其發(fā)病率及死亡率高,而且呈逐年上升的趨勢,已成為威脅人類健康最嚴(yán)重的疾病之一。CAD的主要病理基礎(chǔ)是動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis, AS)。內(nèi)皮屏障功能異常是AS的始動(dòng)因素而且貫穿AS的整個(gè)發(fā)生發(fā)展過程。血管內(nèi)皮細(xì)胞覆蓋在血管腔表面形成一層生理屏障,通過內(nèi)皮間連接的結(jié)構(gòu)嚴(yán)格控制著血液中生物大分子及血細(xì)胞的通過,但在某些生理或病理情況下通透性可以大幅度增加。一旦內(nèi)皮通透性增加,隨后將發(fā)生一系列反應(yīng),如血漿內(nèi)的脂質(zhì)成分通過內(nèi)皮間隙進(jìn)入內(nèi)膜,單核細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞遷移至內(nèi)膜,進(jìn)一步損傷血管和促進(jìn)AS斑塊的形成甚至引起斑塊破裂。研究表明內(nèi)皮細(xì)胞粘附是關(guān)系內(nèi)皮通透性的關(guān)鍵因素。酪氨酸激酶受體B (Tyrosine kinase receptor B, TrkB)是腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Brain-derived neurotrophic factor, BDNF)的高親和力受體。研究表明TrkB通路除了在神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用,也表達(dá)于心血管系統(tǒng)。研究表明TrkB可能參與細(xì)胞粘附,將TrkB穩(wěn)定轉(zhuǎn)染工具細(xì)胞導(dǎo)致細(xì)胞聚集成團(tuán),而且聚集只發(fā)生在TrkB和鈣粘蛋白同時(shí)表達(dá)的條件下。內(nèi)皮細(xì)胞粘附除了在血管內(nèi)皮通透性的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用,在血管發(fā)育過程也發(fā)揮重要作用。敲基因鼠研究表明BDNF-TrkB通路確實(shí)影響心臟血管發(fā)育：研究發(fā)現(xiàn)TrkB基因敲除小鼠表現(xiàn)為心肌內(nèi)血管明顯減少和出生后死亡；BDNF敲基因小鼠表現(xiàn)為內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、心肌內(nèi)出血、降低的心臟收縮力和早期出生后死亡；而BDNF-TrkB過表達(dá)則導(dǎo)致小鼠胚胎期心肌內(nèi)毛細(xì)血管的密度顯著增加。TrkB是否影響成年血管內(nèi)皮通透性并參與冠心病的病理過程目前尚不清楚。本研究針對(duì)這一問題,研究TrkB與冠心病是否相關(guān),以及其對(duì)血管內(nèi)皮通透性的影響及分子機(jī)制。旨在尋找冠心病的新的分子機(jī)制,為冠心病的診斷和治療提供新思路和新靶點(diǎn)。研究目的：1.研究TrkB基因多態(tài)與冠心病的相關(guān)性,探討TrkB是否冠心病的新的易感基因。2.研究TrkB通路對(duì)血管內(nèi)皮通透性的影響,旨在發(fā)現(xiàn)TrkB在內(nèi)皮通透性調(diào)節(jié)中的作用及分子機(jī)制。3.闡明TrkB通路在炎性誘導(dǎo)的內(nèi)皮高通透性中的保護(hù)作用,旨在發(fā)現(xiàn)保護(hù)內(nèi)皮防止內(nèi)皮損傷的新靶點(diǎn)。研究方法1.病例和對(duì)照收集不同地理區(qū)域的冠心病病例-對(duì)照志愿者2組。2.基因型分析全血基因組DNA的提取采用標(biāo)準(zhǔn)程序�；蛐蜋z測采用實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)合Taqman探針技術(shù)。3.雙熒光素酶報(bào)告基因分析應(yīng)用基因克隆技術(shù)構(gòu)建含TrkB啟動(dòng)子的熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒,再經(jīng)定點(diǎn)誘變技術(shù)產(chǎn)生分別含-69C和-69G的PGL3-TrkB-69C和pGL3-TrkB-69G熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒。將報(bào)告質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到HeLa細(xì)胞和人血管內(nèi)皮細(xì)胞48小時(shí)后,多功能酶標(biāo)儀檢測熒光素酶的熒光強(qiáng)度。4.人和小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)TrkB表達(dá)收集動(dòng)脈粥樣硬化病人的主動(dòng)脈標(biāo)本。高脂喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠8周制備AS模型。制備人及小鼠含動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的主動(dòng)脈冷凍切片,使用TrkB抗體并采用常規(guī)免疫熒光技術(shù)檢測TrkB在主動(dòng)脈斑塊的表達(dá)定位。5.9型腺相關(guān)病毒載體構(gòu)建通過化學(xué)合成多對(duì)小干擾RNA,并將其導(dǎo)入內(nèi)皮細(xì)胞篩選出敲除效率最高的一對(duì)序列,并將其用于下調(diào)TrkB病毒的制備。采用常規(guī)基因克隆技術(shù)制備TrkB過表達(dá)質(zhì)粒,再采用定點(diǎn)誘變技術(shù)對(duì)TrkB過表達(dá)載體的上述干擾RNA識(shí)別區(qū)進(jìn)行修飾,防止外源過表達(dá)TrkB被上述干擾RNA降解。將構(gòu)建好的上調(diào)及下調(diào)質(zhì)粒交深圳百恩威公司包裝9型腺相關(guān)病毒。6.體內(nèi)內(nèi)皮通透性分析體內(nèi)內(nèi)皮屏障功能檢測采用伊文思藍(lán)分析。通過尾靜脈注射伊文思藍(lán)45分鐘再?zèng)_洗掉血管內(nèi)殘留的染料后,分離主動(dòng)脈并分析血管壁中滲漏的染料多少。7.細(xì)胞培養(yǎng)人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)于內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基；HeLa和293T細(xì)胞培養(yǎng)于DMEM加10%胎牛血清。所有細(xì)胞培養(yǎng)于37度含5%二氧化碳的培養(yǎng)箱中。8.體外旁細(xì)胞通透性分析采用transwell小室檢測FITC標(biāo)記的葡聚糖通過內(nèi)皮單層進(jìn)入下室的數(shù)量多少。待測標(biāo)本的熒光值檢測(激發(fā)波長485nm,吸收波長530nm)應(yīng)用多功能酶標(biāo)儀。9.跨內(nèi)皮遷徙檢測采用transwell小室計(jì)數(shù)T細(xì)胞跨過內(nèi)皮單層進(jìn)入下室的細(xì)胞數(shù)量多少,并計(jì)算遷徙細(xì)胞的百分比。10.慢病毒載體構(gòu)建采用常規(guī)基因克隆技術(shù)分別將大鼠TrkB基因和小鼠內(nèi)皮鈣粘蛋白基因的cDNA全長克隆到pCCL. PGK. TetLinker. WPRE'慢病毒載體中。采用脂質(zhì)體2000的方法將該質(zhì)粒與ENV質(zhì)粒(VSV-G),包裝質(zhì)粒(pMDLg/pRRE), and pRSV-REV質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染進(jìn)293T細(xì)胞中進(jìn)行病毒包裝。11.定量PCR定量PCR采用SYBR green染料方法用Light Cycler 2.0 (Roche Diagnostics, Mannheim, Germany)儀器檢測,相對(duì)定量的計(jì)算采用2-△△ACt方法。12.WB分析總蛋白提取采用常規(guī)方法�？偟鞍捉�(jīng)10%SDS-PAGE電泳分離后,電轉(zhuǎn)到PVDF膜上,經(jīng)奶粉封閉后,分別用Trk、內(nèi)皮鈣粘蛋白、tubulin等一抗孵育4度過夜,之后用HRP標(biāo)記的二抗孵育,化學(xué)發(fā)光儀進(jìn)行條帶的成像。13. ChIP分析按照試劑盒說明書,從內(nèi)皮細(xì)胞中提取染色質(zhì),然后用Etsl一抗進(jìn)行免疫沉淀。定量PCR檢測沉淀物中鈣粘蛋白啟動(dòng)子的含量。14.免疫熒光分析冷凍切片放入4%多聚甲醛中固定10分鐘。經(jīng)常規(guī)一抗、二抗和DAPI染色后用熒光顯微鏡觀察。15.統(tǒng)計(jì)分析所有統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用SPSS 15.0軟件(SPSS, Chicago, IL) 。研究結(jié)果1. TrkB-69C＞G基因多態(tài)和冠心病相關(guān)。我們?cè)趦蓚�(gè)獨(dú)立的不同地理區(qū)域人群中,比較了冠心病人與非冠心病人TrkB-69C＞G、IVS13+40G＞A兩個(gè)多態(tài)位點(diǎn)的基因型和基因頻率。結(jié)果表明：在兩組人群中TrkB-69C＞G基因多態(tài)的基因頻率和基因型頻率在冠心病及非冠心病人中均顯著不同(P0.05)。多因素logistic回歸分析結(jié)果表明,在消除性別、年齡和體重指數(shù)等混淆因素的影響后,TrkB-69C純合子患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加(山東組：OR值2.1,95%可信區(qū)間1.68-2.62；陜西組：OR值2.0,95%可信區(qū)間1.69-2.67)。本研究中TrkB IVS13+40G＞A多態(tài)位點(diǎn)未見于冠心病相關(guān)。2. TrkB -69C純合子對(duì)應(yīng)降低的TrkB表達(dá)和升高的冠心病風(fēng)險(xiǎn)。我們檢測了含-69C或-69G的TrkB啟動(dòng)子對(duì)下游熒光素酶基因表達(dá)的影響。結(jié)果表明,無論-69C或-69G多態(tài),TrkB啟動(dòng)子都能顯著啟動(dòng)下游熒光素酶的表達(dá)。重要的是,在HeLa細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞中-69C組的熒光素酶活性顯著低于-69G組,說明-69C與-69G相比TrkB啟動(dòng)子的活性顯著降低。我們的研究結(jié)果表明降低的TrkB表達(dá)可能和增加的冠心病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。3. TrkB表達(dá)于人及ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈斑塊的內(nèi)皮層免疫熒光檢測TrkB的表達(dá),結(jié)果表明TrkB突出表達(dá)于野生型C57小鼠的主動(dòng)脈內(nèi)皮層。在ApoE敲基因小鼠早期斑塊中,TrkB也突出表達(dá)于早期斑塊的內(nèi)皮層。在人主動(dòng)脈粥樣硬化早期斑塊中,TrkB突出表達(dá)在主動(dòng)脈內(nèi)皮。4. TrkB防止ApoE敲基因鼠主動(dòng)脈血管內(nèi)皮泄漏首先通過尾靜脈注射9型腺相關(guān)病毒(AAV9),我們觀察到AAV9-control攜帶的Zsgreen報(bào)告基因在小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮高效表達(dá),表明病毒高效感染主動(dòng)脈內(nèi)皮。隨后TrkB的敲除效率檢測表明AAV9-shTrkB導(dǎo)致小鼠主動(dòng)脈TrkB的表達(dá)降低93%,而AAV9-TrkB過表達(dá)病毒能外源恢復(fù)內(nèi)皮TrkB表達(dá)。伊文思藍(lán)分析表明內(nèi)皮TrkB敲除導(dǎo)致ApoE敲基因鼠主動(dòng)脈伊文思藍(lán)沉積增加30%,而AAV9-TrkB過表達(dá)病毒能防止這一變化。內(nèi)皮鈣粘蛋白表達(dá)的檢測結(jié)果表明AAV9-shTrkB感染導(dǎo)致血管內(nèi)皮鈣粘蛋白的表達(dá)降低,而AAV9-TrkB過表達(dá)病毒能恢復(fù)鈣粘蛋白的表達(dá)。5.內(nèi)皮鈣粘蛋白是介導(dǎo)TrkB的內(nèi)皮屏障保護(hù)作用的關(guān)鍵分子體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),TrkB敲除能顯著增加FITC標(biāo)記的葡聚糖的跨內(nèi)皮擴(kuò)散、內(nèi)皮鈣粘蛋白空隙形成和T細(xì)胞跨內(nèi)皮遷徙。內(nèi)皮TrkB敲除還導(dǎo)致鈣粘蛋白mRNA和蛋白表達(dá)顯著降低,而外源TrkB過表達(dá)能防止鈣粘蛋白降低。最重要的是TrkB敲除導(dǎo)致的增加的FITC-葡聚糖擴(kuò)散、鈣粘蛋白空隙增大和T細(xì)胞跨內(nèi)皮遷徙都能被過表達(dá)內(nèi)皮鈣粘蛋白阻止。6. Ets1轉(zhuǎn)錄因子介導(dǎo)TrkB活化誘導(dǎo)的鈣粘蛋白表達(dá)首先我們檢測了TrkB信號(hào)對(duì)Ets1轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)的影響。結(jié)果表明TrkB敲除導(dǎo)致顯著減少的Ets1表達(dá),相反外源BDNF刺激引起的TrkB活化能夠誘導(dǎo)Ets1的表達(dá)增加。接下來我們檢測了Etsl是否介導(dǎo)BDNF誘導(dǎo)的內(nèi)皮鈣粘蛋白的表達(dá),結(jié)果表明Etsl siRNA能有效阻斷BDNF誘導(dǎo)的內(nèi)皮鈣粘蛋白的表達(dá)。進(jìn)一步的免疫熒光結(jié)果表明BDNF不僅促進(jìn)Etsl的表達(dá),而且促進(jìn)其核轉(zhuǎn)位；而TrkB敲除導(dǎo)致降低的Etsl表達(dá)和核定位。CHIP分析表明BDNF促進(jìn)Etsl與鈣粘蛋白啟動(dòng)子的結(jié)合活性。7. TrkB活化能改善促動(dòng)脈粥樣硬化因子誘導(dǎo)的內(nèi)皮高通透性我們進(jìn)一步研究了TrkB信號(hào)是否能保護(hù)內(nèi)皮屏障完整抵抗促動(dòng)脈粥樣硬化因子誘導(dǎo)的內(nèi)皮高通透性,結(jié)果表明TrkB活化能防止TNF-α誘導(dǎo)的FITC-葡聚糖跨內(nèi)皮擴(kuò)散、內(nèi)皮鈣粘蛋白空隙的形成、T細(xì)胞的跨內(nèi)皮遷徙以及內(nèi)皮鈣粘蛋白表達(dá)減少。而且TrkB在TNF-α誘導(dǎo)的內(nèi)皮高通透性中的的保護(hù)作用能被Etsl小干擾RNA和內(nèi)皮鈣粘蛋白小干擾RNA阻斷。研究結(jié)論1. TrkB-69C＞G基因多態(tài)和冠心病相關(guān),TrkB-69C純合子對(duì)應(yīng)降低的TrkB表達(dá)和升高的冠心病風(fēng)險(xiǎn),提示TrkB可能是冠心病新的易感基因,并在冠心病的發(fā)病過程中起保護(hù)作用。2. TrkB突出表達(dá)在早期斑塊的內(nèi)皮細(xì)胞中。3. TrkB信號(hào)通過促進(jìn)Etsl介導(dǎo)的內(nèi)皮鈣粘蛋白合成保護(hù)內(nèi)皮完整。4. TrkB活化能防止促炎因子誘導(dǎo)的內(nèi)皮高通透性。研究背景動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是冠心病等心腦血管疾病的主要病理基礎(chǔ),表現(xiàn)為大動(dòng)脈及中動(dòng)脈的血管內(nèi)壁出現(xiàn)脂質(zhì)沉積,形成分散或成片的粥樣斑塊,造成動(dòng)脈管腔狹窄,隨后斑塊破裂出血,可在狹窄的動(dòng)脈內(nèi)形成血栓,可導(dǎo)致心梗、缺血性腦卒中發(fā)生。因此防止AS的發(fā)生發(fā)展,對(duì)防治心腦血管疾病有重要意義。內(nèi)皮功能異常是AS的始動(dòng)因素而且貫穿AS的整個(gè)發(fā)生發(fā)展過程。內(nèi)皮通透性增加,會(huì)導(dǎo)致后續(xù)發(fā)生一系列反應(yīng),如血漿內(nèi)的脂質(zhì)成分通過內(nèi)皮間隙進(jìn)入內(nèi)膜,單核細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞遷移至內(nèi)膜,進(jìn)一步損傷血管和促進(jìn)AS斑塊的形成。酪氨酸受體B是腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF的高親和力受體。BDNF-TrkB通路在中樞和外周神經(jīng)元的生存、生長和維持中發(fā)揮重要作用。但是除了在神經(jīng)系統(tǒng)中起作用以外,TrkB還在心血管系統(tǒng)中發(fā)揮作用。有研究表明BDNF-TrkB通路能保護(hù)心肌防止缺血損傷。還有研究發(fā)現(xiàn)TrkB基因敲除小鼠表現(xiàn)為心肌內(nèi)血管明顯減少和出生后死亡;BDNF敲基因小鼠表現(xiàn)為內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、心肌內(nèi)出血、降低的心臟收縮力和早期出生后死亡；而BDNF-TrkB過表達(dá)則導(dǎo)致小鼠胚胎期心肌內(nèi)毛細(xì)血管的密度顯著增加。我們的研究發(fā)現(xiàn)TrkB突出表達(dá)在血管內(nèi)皮并維持內(nèi)皮完整通過促進(jìn)內(nèi)皮鈣粘蛋白的表達(dá)。與我們的結(jié)果一致,Matsuda等也發(fā)現(xiàn)添加BDNF在人微血管內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)基中能促進(jìn)內(nèi)皮鈣粘蛋白的表達(dá)。內(nèi)皮鈣粘蛋白在保護(hù)血管內(nèi)皮完整防止動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。而內(nèi)皮TrkB信號(hào)對(duì)血管動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的影響尚無研究結(jié)果。本研究主要探討了AS形成過程中內(nèi)皮損傷是否影響TrkB的表達(dá),以及TrkB的表達(dá)改變是否影響AS斑塊的發(fā)展及其分子機(jī)制,旨在揭示內(nèi)皮TrkB在AS病理過程中的作用,為AS的防治提供新思路。研究目的：1.研究AS斑塊表面內(nèi)皮TrkB的表達(dá)是否發(fā)生變化。2.研究抑制小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮TrkB的表達(dá)對(duì)AS斑塊發(fā)展的影響。3.研究TrkB對(duì)血管內(nèi)皮鈣粘蛋白裂解的影響及分子機(jī)制。研究方法1.動(dòng)物研究程序ApoE-/-小鼠通過尾靜脈注射不同的9型腺相關(guān)病毒顆粒并接受高脂喂養(yǎng)8周以誘導(dǎo)早期動(dòng)脈粥樣硬化斑塊。之后取材并進(jìn)行后續(xù)分析。2.油紅0染色主動(dòng)脈及主動(dòng)脈根的橫斷切片先用4%多聚甲醛固定,PBS浸洗后,用油紅O染色,然后顯微鏡下觀察并分析結(jié)果。3.免疫熒光分析冷凍切片用4%多聚甲醛固定,PBS浸洗后,常規(guī)封閉、一抗、二抗孵育、及DAPI染色,熒光顯微鏡下觀察分析結(jié)果。4.WB分析總蛋白提取,蛋白濃度檢測,SDS-PAGE電泳,轉(zhuǎn)膜,然后封閉,一抗二抗孵育,化學(xué)發(fā)光檢測及條帶的定量按本室常規(guī)方法。5.定量PCR總RNA提取及逆轉(zhuǎn)錄采用常規(guī)方法。定量PCR采用SYBER GREEN染料方法。相對(duì)定量的計(jì)算方法采用2-△△ACt。6.細(xì)胞培養(yǎng)主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞用專門的內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)。培養(yǎng)條件37度和5%二氧化碳。7.統(tǒng)計(jì)分析所有統(tǒng)計(jì)分析均應(yīng)用SPSS 15.0軟件(SPSS, Chicago, IL)。研究結(jié)果1.動(dòng)脈粥樣硬化斑塊表面內(nèi)皮細(xì)胞的TrkB表達(dá)是降低的。TrkB在斑塊表面內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)顯著下降,與野生型無動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮相比,TrkB在斑塊表面內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)降低35%。TNF-a或氧化低密度脂蛋白刺激后,主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞TrkB的表達(dá)顯著降低。2.在ApoE-/-小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞中TrkB發(fā)揮保護(hù)血管抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用ApoE-/-小鼠通過尾靜脈注射攜帶Zsgreen報(bào)告基因的對(duì)照AAV9病毒和攜帶TrkB干擾RNA的AAV9病毒并同時(shí)高脂喂養(yǎng)8周。注射病毒后,我們觀察到熒光報(bào)告基因Zsgreen在ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈斑塊內(nèi)皮層高效表達(dá)。WB分析顯示TrkB敲除導(dǎo)致其在ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈的表達(dá)減少達(dá)到91%。大體油紅O染色顯示TrkB敲除導(dǎo)致主動(dòng)脈斑塊面積顯著增加,與對(duì)照組相比斑塊面積增加達(dá)到40%。主動(dòng)脈根橫斷切片的油紅O染色也顯示相似的結(jié)果。3. TrkB敲除導(dǎo)致ApoE-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)增加的脂質(zhì)沉積、巨噬細(xì)胞浸潤和炎性反應(yīng)。我們分析了主動(dòng)脈根切片中油紅O染色陽性面積占斑塊總面積的比例,結(jié)果發(fā)現(xiàn)TrkB敲除導(dǎo)致斑塊內(nèi)脂質(zhì)含量顯著增加,與對(duì)照組相比脂質(zhì)含量增加35%。免疫熒光染色顯示,TrkB敲除導(dǎo)致斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞的含量也顯著上升,與對(duì)照組相比巨噬細(xì)胞的含量增加40%。TrkB敲除導(dǎo)致斑塊內(nèi)促炎標(biāo)志物,包括NF-kB, ICAM-1, VCAM-1,E-選擇素,TNF-a,和IL6的表達(dá)顯著上升。4. BDNF能夠防止TNF-a誘導(dǎo)的內(nèi)皮鈣粘蛋白胞外域脫落通過增加內(nèi)皮鈣粘蛋白與VE-PTP的結(jié)合維持內(nèi)皮鈣粘蛋白的酪氨酸去磷酸化狀態(tài)。TrkB敲除導(dǎo)致斑塊內(nèi)皮鈣粘蛋白的蛋白水平降低了79%,但是其mRNA水平卻僅降低43%。這個(gè)結(jié)果提示我們,TrkB敲除可能不僅涉及鈣粘蛋白的合成,還影響鈣粘蛋白的裂解。我們研究了BDNF-TrkB通路是否抑制鈣粘蛋白的胞外域脫落。我們發(fā)現(xiàn)BDNF預(yù)先孵育能顯著減少TNF-a誘導(dǎo)的鈣粘蛋白脫落片段的水平,而BDNF的這一作用可被TrkB干擾RNA阻止。我們研究了BDNF對(duì)鈣粘蛋白酪氨酸磷酸化的影響。結(jié)果表明BDNF能顯著減少TNF-a誘導(dǎo)的鈣粘蛋白酪氨酸磷酸化,而且這一作用能被TrkB干擾RNA阻斷。于是我們進(jìn)一步檢測了BDNF是否促進(jìn)VE-PTP與鈣粘蛋白的結(jié)合。結(jié)果表明用BDNF預(yù)先孵育TNF-a刺激的人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞能顯著增加與內(nèi)皮鈣粘蛋白免疫共沉淀的VE-PTP的水平。在ApoE-/-小鼠中TrkB敲除導(dǎo)致主動(dòng)脈內(nèi)皮鈣粘蛋白酪氨酸磷酸化顯著增加,而與鈣粘蛋白免疫共沉淀的VE-PTP顯著減少。研究結(jié)論1. TrkB是內(nèi)皮損傷反應(yīng)因子,在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊表面內(nèi)皮TrkB的表達(dá)降低。2. TrkB能保護(hù)內(nèi)皮防止早期動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)生發(fā)展通過同時(shí)促進(jìn)內(nèi)皮鈣粘蛋白的合成和抑制鈣粘蛋白的裂解。3. TrkB調(diào)節(jié)鈣粘蛋白裂解的機(jī)制是調(diào)節(jié)鈣粘蛋白與VE-PTP的結(jié)合和鈣粘蛋白的酪氨酸磷酸化。
【關(guān)鍵詞】：冠心病 內(nèi)皮屏障功能異常 酪氨酸激酶受體B 內(nèi)皮鈣粘蛋白 動(dòng)脈粥樣硬化 內(nèi)皮屏障功能異常 酪氨酸激酶受體B
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R541.4
【目錄】：

• 論文I 酪氨酸激酶受體B對(duì)內(nèi)皮通透性的影響及其與冠私病的關(guān)系6-61
• 中文摘要Ⅰ6-12
• 英文摘要Ⅰ12-20
• 符號(hào)說明Ⅰ20-21
• 前言21-23
• 材料和方法23-31
• 結(jié)果31-34
• 討論34-36
• 創(chuàng)新點(diǎn)36
• 限制性36-37
• 結(jié)論37-38
• 附錄38-58
• 附表38-40
• 附圖40-58
• 參考文獻(xiàn)58-61
• 論文Ⅱ 酪氨酸激酶受體B活化能防止ApoE-/-敲基因小鼠早期動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)育和內(nèi)皮巧粘蛋白的裂解61-97
• 中文摘要Ⅱ61-65
• 英文摘要Ⅱ65-71
• 符號(hào)說明Ⅱ71-72
• 前言72-74
• 材料和方法74-77
• 結(jié)果77-80
• 討論80-82
• 創(chuàng)新點(diǎn)82
• 限制性82
• 結(jié)論82-83
• 附錄83-95
• 附表83-84
• 附圖84-95
• 參考文獻(xiàn)95-97
• 致謝97-98
• 攻讀博士期間發(fā)表的論文98-99
• SCI論文Ⅰ99-124
• SCI論文Ⅱ124-145
• 附件145

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張富興,黎振航,李金蓮,岑國欣 ,陳應(yīng)城;Effects of different fixatives on the TrkB-immunoreactivity in rat brain[J];Journal of Medical Colleges of PLA;2003年05期

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中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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3 賴紅;趙�；�;曾亮;呂永利;;老齡海馬的BDNF及TrkB mRNA表達(dá)與學(xué)習(xí)記憶的關(guān)系[A];中國解剖學(xué)會(huì)第八屆組織學(xué)與胚胎學(xué)專業(yè)青年研討會(huì)論文集[C];2004年

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6 陳暢;;tTG在SH-SY5Y細(xì)胞分化中對(duì)TrkB的調(diào)控作用[A];第一屆全國腦與認(rèn)知科學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2005年

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9 鄧穎;張春虎;胡隨瑜;張海男;黃熙;范榮;王楊;;柴胡疏肝散對(duì)抑郁模型大鼠海馬、杏仁核、額葉BDNF及其受體TrkB的影響[A];第六屆全國中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)理論研究學(xué)術(shù)研討會(huì)暨第二屆湖南省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)肝病專業(yè)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2010年

10 張春虎;鄧穎;胡隨瑜;張海男;程田力;;柴胡疏肝散對(duì)抑郁模型大鼠海馬、杏仁核、額葉BDNF及其受體TrkB的影響[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)精神疾病專業(yè)委員會(huì)第十屆學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2010年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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3 趙玲;神經(jīng)元活性調(diào)控TrkB受體細(xì)胞膜表面插入機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2009年

4 范萌;受體型酪氨酸激酶TrkB通過抗脫落凋亡作用參與結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

5 段珊;JIP 3介導(dǎo)TrkB受體順軸突轉(zhuǎn)運(yùn)及增強(qiáng)BDNF引發(fā)的信號(hào)通路激活的功能研究[D];山東大學(xué);2011年

6 李學(xué)智;RET和TrkB在神經(jīng)元膜表面分布水平不同以及神經(jīng)元活性依賴的RET膜表面插入的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2012年

7 周柳青;大鼠單側(cè)迷路切除術(shù)后BDNF-TrkB信號(hào)在小腦前庭通路中變化的研究[D];華中科技大學(xué);2013年

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9 于曉輝;TrkB介導(dǎo)的失巢凋亡抑制與卵巢癌的轉(zhuǎn)移和耐藥[D];上海交通大學(xué);2007年

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉挺;A549細(xì)胞中TrkB激活的調(diào)控機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

2 陳斯韻;BDNF-TrkB通路對(duì)心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響[D];暨南大學(xué);2010年

3 王玨;神經(jīng)元活性對(duì)TrkB受體再循環(huán)的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2012年

4 盛愛麗;神經(jīng)元細(xì)胞膜表面TrkB受體免疫熒光定量分析方法的建立[D];山東大學(xué);2009年

5 隋文海;神經(jīng)元中Myo5a介導(dǎo)TrkB受體再循環(huán)運(yùn)輸?shù)难芯縖D];山東大學(xué);2014年

6 李娜;CPE參與調(diào)控海馬神經(jīng)元活性依賴性TrkB受體胞內(nèi)運(yùn)輸[D];山東大學(xué);2012年

7 劉祥華;Dynamin1磷酸化介導(dǎo)的TrkB內(nèi)吞在阿爾茲海默癥中的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2014年

8 李滿紅;SIRT1通過BDNF-TrkB通路介導(dǎo)硫化氫抗同型半胱氨酸誘導(dǎo)的認(rèn)知功能損傷[D];南華大學(xué);2014年

9 汪志凌;BDNF對(duì)缺氧胚腦神經(jīng)元保護(hù)中TrkB、Ras-MARK的改變及其關(guān)系探討[D];四川大學(xué);2002年

10 鄧穎;柴胡疏肝散對(duì)抑郁模型大鼠行為及海馬、杏仁核、額葉BDNF及其受體TrkB的影響[D];中南大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：酪氨酸激酶受體B在冠心病中的作用及機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：289581