發(fā)布時(shí)間：2020-07-15 08:01

【摘要】：工作目的：腦卒中是全球第三位、中國(guó)首位致死性疾病,有約30%的腦卒中幸存者會(huì)罹患癱瘓,是家庭及社會(huì)的重大負(fù)擔(dān)。然而,目前臨床上除了早期靜脈溶栓治療以外,尚缺乏有效的治療缺血性卒中的藥物方法。尋求新的有效的臨床治療方法,是改善缺血性卒中患者預(yù)后的重要手段。小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)是在缺血性腦損傷的的進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。因此,調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)是減輕缺血性腦損傷、改善卒中患者預(yù)后的一個(gè)重要靶點(diǎn),也是近年來(lái)研究的熱點(diǎn)。其次,白質(zhì)損傷是缺血性腦損傷的重要組成部分,其在缺血性腦損傷中的重要性愈發(fā)受到重視。少突膠質(zhì)細(xì)胞是腦白質(zhì)的主要構(gòu)成部分,對(duì)缺血性損傷極為敏感,保護(hù)少突膠質(zhì)細(xì)胞免受缺血損傷及促進(jìn)少突膠質(zhì)細(xì)胞再生是維護(hù)缺血性卒中后白質(zhì)完整性的重要手段。因此,在本論文中,我們分別探討了特境微生物Dalesconols B (TL2)對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制,以及PPARγ激動(dòng)劑羅格列酮對(duì)缺血性卒中后白質(zhì)損傷的修復(fù)作用及在此過(guò)程中其對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞功能的影響。研究方法：在論文第一章中,我們采用了LPS刺激的小膠質(zhì)細(xì)胞體外炎癥模型研究了TL2對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制。分別采用實(shí)時(shí)定量PCR、WB及ELISA檢測(cè)了促炎介質(zhì)的表達(dá)。使用WB及免疫熒光方法檢測(cè)了轉(zhuǎn)錄因子NF-κB、Akt及MAPK蛋白水平表達(dá)情況。使用報(bào)告基因檢測(cè)了小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)ARE啟動(dòng)子活性。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染抑制或過(guò)表達(dá)小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)Nrf2活性。在第二章中,我們?cè)谛∈驧CAO缺血性卒中模型中,于再灌兩小時(shí)后給予羅格列酮治療。采用免疫熒光染色的方法檢測(cè)了缺血再灌21天后白質(zhì)損傷情況、少突膠質(zhì)細(xì)胞再生情況及小膠質(zhì)細(xì)胞表型轉(zhuǎn)變。并在缺血后對(duì)小鼠神經(jīng)性為功能進(jìn)行了評(píng)分。結(jié)果：1)TL2預(yù)處理顯著減少了小膠質(zhì)細(xì)胞上清液中NO及PGE2含量,降低了iNOS及COX2蛋白水平表達(dá),減少了多種炎癥因子及趨化因子如TNF-α、IL-1β、 IL-6、MCP-1及MIP-1α在基因水平的表達(dá)。TL2預(yù)處理抑制了磷酸化Akt及NF-κB活性,抑制了p38 MAPK及JNK活性。此外,TL2預(yù)處理激活了小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)Nrf2/HO-1活性。抑制Nrf2/HO-1活性會(huì)阻斷TL2對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的抑制作用。2)羅格列酮顯著改善了缺血性卒中小鼠的神經(jīng)功能缺陷,減輕了缺血后白質(zhì)損傷。此外,羅格列酮治療顯著增加了梗死側(cè)側(cè)腦室室下區(qū)、齒狀回顆粒區(qū)及梗死周圍OPC數(shù)目,并顯著增加了梗死周圍成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞APC數(shù)目。羅格列酮治療還減少了梗死周圍Ibal/CD16+的M1小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目,卻增加了Iba1/CD206+的M2型小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目。結(jié)論：1)TL2顯著抑制了LPS誘發(fā)的小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng),可能與其抑制小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)Akt/NF-Kb、p38及JNK活性從而降低炎癥介質(zhì)基因水平表達(dá)有關(guān)。也可能與其增強(qiáng)Nrf2/HO-1抗氧化應(yīng)激作用有關(guān)。2)缺血后給予羅格列酮治療顯著改善了缺血性卒中小鼠遠(yuǎn)期神經(jīng)功能恢復(fù)及白質(zhì)損傷修復(fù),可能與其增強(qiáng)缺血性損傷后少突膠質(zhì)細(xì)胞再生相關(guān)。其促進(jìn)少突膠質(zhì)細(xì)胞再生的機(jī)制可能有兩方面,一是直接促進(jìn)OPC分化成熟為APC,二是間接地通過(guò)調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞亞型來(lái)影響OPC分化成熟的過(guò)程。
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R743.3


本文編號(hào)：2756213