發(fā)布時(shí)間：2020-07-14 18:31

【摘要】：牙源性干細(xì)胞是一類來源于牙齒組織的具有多向分化潛能和自我增殖能力的成體干細(xì)胞。牙髓干細(xì)胞(dental pulp stem cells,DPSC)、牙周膜干細(xì)胞(periodontal ligament stem cells,PDLSC)以及根尖牙乳頭干細(xì)胞(stem cells from the apical papilla,SCAP)都是非常重要的牙源性干細(xì)胞,是組織工程研究領(lǐng)域充滿潛力的種子細(xì)胞。許多因素都對(duì)牙源性干細(xì)胞的增殖分化有重要的調(diào)節(jié)作用。隨著對(duì)micro RNA調(diào)控作用的深入研究,學(xué)者們發(fā)現(xiàn)很多非編碼RNA都在牙源性干細(xì)胞的增殖分化調(diào)控中起著重要的作用。在人類基因組中,有93%的DNA都會(huì)轉(zhuǎn)錄為RNA,但僅有2%的RNA具有編碼蛋白質(zhì)的功能,眾多的DNA最終轉(zhuǎn)錄為非編碼RNA。長鏈非編碼RNA(long noncoding RNA,lnc RNA)過去被認(rèn)為是轉(zhuǎn)錄過程中的雜音,沒有實(shí)際作用。但近些年來,隨著研究的深入,科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)其在表觀遺傳、轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)中起著重要的調(diào)控作用。ANCR(anti-differetiation noncoding RNA,抗分化非編碼RNA)就是具有分化調(diào)控作用的lnc RNA。但還沒有關(guān)于ANCR在牙源性干細(xì)胞分化領(lǐng)域的相關(guān)調(diào)控研究。本實(shí)驗(yàn)通過RNAi下調(diào)ANCR在牙源性干細(xì)胞中的表達(dá),來觀察其對(duì)牙源性干細(xì)胞增殖分化的調(diào)控作用。課題所取得的主要結(jié)果如下:1.ANCR對(duì)DPSC的成骨、成脂、成神經(jīng)分化有重要的調(diào)控作用我們通過病毒轉(zhuǎn)染下調(diào)ANCR在DPSC中的表達(dá),發(fā)現(xiàn)下調(diào)ANCR對(duì)DPSC的增殖能力無明顯影響,但可以促進(jìn)DPSC的成骨、成脂、成神經(jīng)分化,上調(diào)相關(guān)基因的表達(dá)。下調(diào)ANCR可以明顯提高DPSC的軸突形成能力。2.ANCR對(duì)PDLSC的增殖、成骨、成脂、成神經(jīng)分化有重要的調(diào)控作用我們通過病毒轉(zhuǎn)染下調(diào)ANCR在DPSC中的表達(dá)。對(duì)比ANCR下調(diào)后的PDLSC及正常PDLSC后,發(fā)現(xiàn)下調(diào)ANCR可以促進(jìn)PDLSC的增殖能力,并且可以促進(jìn)PDLSC的成骨,成脂,成神經(jīng)分化,上調(diào)相關(guān)基因的表達(dá)。下調(diào)ANCR促進(jìn)PDLSC的成骨分化與Wnt通路相關(guān),是通過下調(diào)GSK3-β降解復(fù)合物來實(shí)現(xiàn)對(duì)PDLSC的成骨分化調(diào)控。與DPSC不同的是下調(diào)ANCR后,PDLSC經(jīng)過神經(jīng)誘導(dǎo)后形態(tài)更加類似于神經(jīng)元體部。3.ANCR對(duì)SCAP的成骨、成脂分化有重要的調(diào)控作用我們通過病毒轉(zhuǎn)染下調(diào)ANCR在DPSC中的表達(dá)。對(duì)比ANCR下調(diào)后的SCAP及正常SCAP后,發(fā)現(xiàn)下調(diào)ANCR對(duì)SCAP的增殖能力無明顯影響,但可以促進(jìn)DPSC的成骨,成脂分化,上調(diào)相關(guān)基因的表達(dá)。下調(diào)ANCR對(duì)SCAP的成神經(jīng)分化無明顯影響。綜上所述,ANCR在三種牙源性干細(xì)胞(DPSC,PDLSC,SCAP)的增殖和分化過程中起著重要的調(diào)控作用,但對(duì)三種細(xì)胞的調(diào)控作用不盡相同。下調(diào)ANCR的表達(dá)會(huì)促進(jìn)DPSC的成骨、成脂、成神經(jīng)分化,PDLSC的增殖及成骨、成脂、成神經(jīng)分化,SCAP的成骨、成脂分化。下調(diào)ANCR對(duì)PDLSC成骨分化的促進(jìn)作用是通過激活經(jīng)典Wnt通路實(shí)現(xiàn)的。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R78
【圖文】：

DPSC的原代培養(yǎng)圖

.2.2 DPSC 的表面標(biāo)記物鑒定流式細(xì)胞檢測結(jié)果顯示（圖 2），我們培養(yǎng)的 DPSC 可以表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞表記物 CD29（98.2%）、CD90（86%）、CD146（42.1%） and Stro-1（12.2%），不造血細(xì)胞表面標(biāo)記物 CD34（0.9%）和白細(xì)胞表面標(biāo)記物 CD45（0.9%）。

A.CD29（98.2%）； B. CD34（0.9%）； C. CD45（0.9%）；D. CD90（86%）； E. CD146（42.1%）； F. Stor-1（12.2%）1.2.3 DPSC 的多向分化能力鑒定我們所培養(yǎng)的 DPSC 經(jīng)過礦化誘導(dǎo) 3 周后茜素紅染色，顯微鏡下可見紅染的礦結(jié)節(jié)。經(jīng)過 3 周的成脂誘導(dǎo)后油紅 O 染色，顯微鏡下可見細(xì)胞間紅染的脂滴（圖 3

【共引文獻(xiàn)】

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1 Tianzhi Huang;Angel Alvarez;Bo Hu;Shi-Yuan Cheng;;Noncoding RNAs in cancer and cancer stem cells[J];Chinese Journal of Cancer;2013年11期

2 曹鈺;杜娟;范志朋;;表皮生長因子Epiregulin促進(jìn)牙周膜干細(xì)胞成骨分化[J];北京口腔醫(yī)學(xué);2013年03期

3 吉秋霞;袁昌青;宋文斌;武宏;;殼聚糖季銨鹽對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];國際口腔醫(yī)學(xué)雜志;2013年05期

4 陳焱;汪軍;;微小RNA-124及其相關(guān)疾病研究進(jìn)展[J];國際藥學(xué)研究雜志;2013年05期

5 鄭桂婷;徐燕;;WNT/β-連環(huán)蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在牙周組織再生中的作用[J];國際口腔醫(yī)學(xué)雜志;2013年06期

6 熊華翠;陳柯;黃義彬;劉彩奇;;人根尖乳頭干細(xì)胞生成牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體的實(shí)驗(yàn)研究[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年10期

7 馬平;杜娟;范志朋;;組蛋白甲基化促進(jìn)AP2a基因表達(dá)及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化[J];北京口腔醫(yī)學(xué);2013年06期

8 張超;程祥榮;;牙源性干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];北京口腔醫(yī)學(xué);2013年06期

9 趙弼洲;田佳靈;余占海;胡永壽;馬海冰;;淫羊藿苷對(duì)人牙周膜細(xì)胞OCN表達(dá)水平的影響[J];西部中醫(yī)藥;2014年01期

10 歐偉;孫衛(wèi)斌;;牙骨質(zhì)蛋白1的生物學(xué)作用及應(yīng)用前景[J];國際口腔醫(yī)學(xué)雜志;2014年02期

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1 申晶;骨髓源間充質(zhì)干細(xì)胞輸注促進(jìn)STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠胰腺內(nèi)α細(xì)胞向β細(xì)胞的轉(zhuǎn)變：糖尿病治療的新模式[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2013年

2 齊玉萍;原位保留病變牙骨質(zhì)聯(lián)合應(yīng)用EMD對(duì)牙骨質(zhì)再生的影響[D];山東大學(xué);2013年

3 李遠(yuǎn);雜合型重編程Oct4聯(lián)合多能干細(xì)胞因子表現(xiàn)重編程人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的研究[D];鄭州大學(xué);2013年

4 肖銳;抑制SMN2外顯子7剪接的調(diào)控蛋白的鑒定和作用機(jī)制研究[D];武漢大學(xué);2012年

5 張明慧;人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)肺癌細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)移及自噬凋亡的調(diào)控作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

6 李廷軍;自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植促進(jìn)肝硬化肝臟門靜脈栓塞剩余肝臟再生的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

7 趙三軍;咪達(dá)唑侖對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響及其機(jī)制的初步研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2011年

8 徐偉偉;miR-124調(diào)節(jié)骨髓源神經(jīng)干細(xì)胞在大鼠脊髓損傷中的治療作用[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

9 趙寅華;富血小板衍生物及與牙周膜干細(xì)胞復(fù)合促脫位再植牙牙周膜愈合的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

10 李三中;Notch信號(hào)途徑在膠質(zhì)瘤發(fā)病機(jī)制中的作用研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2755331