【摘要】：牙源性干細胞是一類來源于牙齒組織的具有多向分化潛能和自我增殖能力的成體干細胞。牙髓干細胞(dental pulp stem cells,DPSC)、牙周膜干細胞(periodontal ligament stem cells,PDLSC)以及根尖牙乳頭干細胞(stem cells from the apical papilla,SCAP)都是非常重要的牙源性干細胞,是組織工程研究領域充滿潛力的種子細胞。許多因素都對牙源性干細胞的增殖分化有重要的調節(jié)作用。隨著對micro RNA調控作用的深入研究,學者們發(fā)現很多非編碼RNA都在牙源性干細胞的增殖分化調控中起著重要的作用。在人類基因組中,有93%的DNA都會轉錄為RNA,但僅有2%的RNA具有編碼蛋白質的功能,眾多的DNA最終轉錄為非編碼RNA。長鏈非編碼RNA(long noncoding RNA,lnc RNA)過去被認為是轉錄過程中的雜音,沒有實際作用。但近些年來,隨著研究的深入,科學家們發(fā)現其在表觀遺傳、轉錄及轉錄后基因表達中起著重要的調控作用。ANCR(anti-differetiation noncoding RNA,抗分化非編碼RNA)就是具有分化調控作用的lnc RNA。但還沒有關于ANCR在牙源性干細胞分化領域的相關調控研究。本實驗通過RNAi下調ANCR在牙源性干細胞中的表達,來觀察其對牙源性干細胞增殖分化的調控作用。課題所取得的主要結果如下:1.ANCR對DPSC的成骨、成脂、成神經分化有重要的調控作用我們通過病毒轉染下調ANCR在DPSC中的表達,發(fā)現下調ANCR對DPSC的增殖能力無明顯影響,但可以促進DPSC的成骨、成脂、成神經分化,上調相關基因的表達。下調ANCR可以明顯提高DPSC的軸突形成能力。2.ANCR對PDLSC的增殖、成骨、成脂、成神經分化有重要的調控作用我們通過病毒轉染下調ANCR在DPSC中的表達。對比ANCR下調后的PDLSC及正常PDLSC后,發(fā)現下調ANCR可以促進PDLSC的增殖能力,并且可以促進PDLSC的成骨,成脂,成神經分化,上調相關基因的表達。下調ANCR促進PDLSC的成骨分化與Wnt通路相關,是通過下調GSK3-β降解復合物來實現對PDLSC的成骨分化調控。與DPSC不同的是下調ANCR后,PDLSC經過神經誘導后形態(tài)更加類似于神經元體部。3.ANCR對SCAP的成骨、成脂分化有重要的調控作用我們通過病毒轉染下調ANCR在DPSC中的表達。對比ANCR下調后的SCAP及正常SCAP后,發(fā)現下調ANCR對SCAP的增殖能力無明顯影響,但可以促進DPSC的成骨,成脂分化,上調相關基因的表達。下調ANCR對SCAP的成神經分化無明顯影響。綜上所述,ANCR在三種牙源性干細胞(DPSC,PDLSC,SCAP)的增殖和分化過程中起著重要的調控作用,但對三種細胞的調控作用不盡相同。下調ANCR的表達會促進DPSC的成骨、成脂、成神經分化,PDLSC的增殖及成骨、成脂、成神經分化,SCAP的成骨、成脂分化。下調ANCR對PDLSC成骨分化的促進作用是通過激活經典Wnt通路實現的。
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R78
【圖文】：

DPSC的原代培養(yǎng)圖

.2.2 DPSC 的表面標記物鑒定流式細胞檢測結果顯示（圖 2），我們培養(yǎng)的 DPSC 可以表達間充質干細胞表記物 CD29（98.2%）、CD90（86%）、CD146（42.1%） and Stro-1（12.2%），不造血細胞表面標記物 CD34（0.9%）和白細胞表面標記物 CD45（0.9%）。

A.CD29（98.2%）； B. CD34（0.9%）； C. CD45（0.9%）；D. CD90（86%）； E. CD146（42.1%）； F. Stor-1（12.2%）1.2.3 DPSC 的多向分化能力鑒定我們所培養(yǎng)的 DPSC 經過礦化誘導 3 周后茜素紅染色，顯微鏡下可見紅染的礦結節(jié)。經過 3 周的成脂誘導后油紅 O 染色，顯微鏡下可見細胞間紅染的脂滴（圖 3

【共引文獻】

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本文編號：2755331