【摘要】：放療作為腫瘤常規(guī)治療雖可在一段時間內(nèi)控制或消退腫瘤,但常常伴隨腫瘤復(fù)發(fā)。近年來研究表明,腫瘤組織中淋巴細(xì)胞浸潤的程度同預(yù)后呈正相關(guān)。放療,尤其是SBRT可以增加免疫細(xì)胞的浸潤,但是同時可能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞表達(dá)一些抑制性的分子,如PD-L1,介導(dǎo)腫瘤組織淋巴細(xì)胞免疫耐受,不能將腫瘤細(xì)胞完全清除。提示放療聯(lián)合PD-L1抗體阻斷PD1/PD-L1抑制信號通路很有可能取得更好的治療效果。本課題擬利用酵母展示技術(shù)篩選全新的人源化PD-L1抗體,并建立小鼠乳腺癌單次大劑量放療模型,研究其聯(lián)合PD-L1抗體阻斷PD1/PD-L1抑制信號通路是否可取得更好的治療效果及其作用機(jī)制。利用酵母展示技術(shù)平臺篩選針對PD-L1抗原的人源化抗體,獲得8個比較理想的酵母抗體序列,通過分子克隆的方式克隆到真核表達(dá)載體,并通過瞬時轉(zhuǎn)染293細(xì)胞分泌表達(dá),經(jīng)純化后獲得抗體蛋白。蛋白通過流式細(xì)胞術(shù)和Elisa的方式鑒定其是否特異性結(jié)合PD-L1抗原,及其是否具有阻斷PD-1/PD-L1結(jié)合的功能.最終確定2株抗體具有阻斷PD-L1、PD-1結(jié)合的功能,是阻斷性抗體,特異性識別PD-L1抗原,且有一株抗體可以識別小鼠的PD-L1,可用于后續(xù)放療治療腫瘤聯(lián)合免疫治療的研究。體外活性實(shí)驗(yàn)證實(shí)其具有激活T細(xì)胞的能力,并具有良好的量效關(guān)系。在小鼠腫瘤模型中證實(shí)其抗腫瘤活性,同目前在三期臨床的PD-L1阻斷抗體體內(nèi)抗腫瘤活性相當(dāng)。本研究過程中篩選得到的全新的PD-L1抗體不僅可用于同放療聯(lián)合治療腫瘤的藥效和機(jī)制研究。同時還將用于全新PD-L1抗體藥物的研發(fā),申報專利并臨床轉(zhuǎn)化,填補(bǔ)國內(nèi)該靶點(diǎn)阻斷抗體零申報的突破,帶來巨大的經(jīng)濟(jì)和社會價值。另一方面,建立了Balb/C小鼠Tubo乳腺癌細(xì)胞皮下移植瘤模型,給予不同劑量照射,獲得Balb/C小鼠Tubo乳腺癌放療后穩(wěn)態(tài)模型。進(jìn)一步機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)單次大劑量照射引起腫瘤內(nèi)部免疫反應(yīng)的激活腫瘤,穩(wěn)態(tài)平衡依賴于CD8 T細(xì)胞,同時誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞表面PD-L1上調(diào)。在此基礎(chǔ)上,單次大劑量照射聯(lián)合抗PD-L1阻斷性抗體使皮下腫瘤完全消退,效果顯著優(yōu)于單純照射。機(jī)制研究過程中發(fā)現(xiàn)聯(lián)合治療引起的腫瘤消退產(chǎn)生有效地免疫記憶,可以保護(hù)小鼠抵抗10倍劑量的腫瘤復(fù)發(fā)模擬挑戰(zhàn)。該作用依賴于CD8T細(xì)胞的激活和對腫瘤細(xì)胞的有效殺傷,聯(lián)合治療后腫瘤浸潤C(jī)D8T細(xì)胞分泌IFNγ和TNFα的能力顯著增強(qiáng)。本研究將為腫瘤放療聯(lián)合免疫治療提供新思路和必要的參考依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R730.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 胡逸民，谷銑之;適形放射治療─腫瘤放射治療技術(shù)的進(jìn)展[J];中華放射腫瘤學(xué)雜志;1997年01期

2 Yan-yan Chen;Liu-bo Wang;Hui-li Zhu;Xiang-yang Li;Yan-ping Zhu;Yu-lei Yin;Fan-zhen Lü;Zi-li Wang;Jie-ming Qu;;Relationship Between Programmed Death-ligand 1 and Clinicopathological Characteristics in Non-small Cell Lung Cancer Patients[J];Chinese Medical Sciences Journal;2013年03期

本文編號：2733331