【摘要】：目的：研究內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在高血壓模型大鼠缺血再灌注損傷中的作用,并探討其作用與血壓水平的關(guān)系。方法：根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆譃橐韵聝蓚�部分：第一,整體實(shí)驗(yàn),對自發(fā)性高血壓大鼠施行心肌缺血再灌注損傷,觀察高血壓和(或)心肌缺血再灌注損傷下心功能的變化；第二,采用病理學(xué)和分子生物學(xué)等方法探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在高血壓和(或)心肌缺血再灌注損傷中的作用。使用自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rat, SHR)作為疾病模型動物,隨機(jī)分為4組,即(1)假手術(shù)組(Shame組)、(2)缺血再灌注對照組(R組)、(3)心肌缺血再灌注+高血壓治療藥物(卡托普利)組(IR+Captopril組)、(4)假手術(shù)+高血壓治療藥物(卡托普利)組(Shame+Captopril組),每組8只。其中第一組和第四組分別為高血壓和非高血壓情況下假手術(shù)對照組；第二組為高血壓情況下心肌缺血再灌注損傷實(shí)驗(yàn)組,第三組為非高血壓情況下心肌缺血再灌注損傷實(shí)驗(yàn)組。使用10%水合氯醛,按照400mg/kg體重進(jìn)行麻醉,結(jié)扎大鼠左冠狀動脈前降支30分鐘,再灌注90-120分鐘建立心肌缺血再灌注損傷模型,實(shí)驗(yàn)期間使用無創(chuàng)血壓儀(BP-98A)監(jiān)測動物血壓及心率,120分鐘后處死動物,開胸取材。4%甲醛灌注后取心肌缺血區(qū)組織,石蠟包埋,切片、HE染色、鏡檢；選取缺血區(qū)組織提取蛋白質(zhì)和mRNA,備用。采用免疫組化的研究方法,觀察各組大鼠心肌缺血區(qū)組織中CHOP通路相關(guān)蛋白的表達(dá),考察合并高血壓影響后,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是否加劇,所選取的檢測蛋白為CHOP通路中的GRP78和CHOP。最后,根據(jù)病理結(jié)果中CHOP通路相關(guān)蛋的表達(dá)的變化,通過Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測PERK、P-PERK、eIF2α、P-eIF2α、ATF2這五個指標(biāo),繼而探討心肌缺血再灌是否通過PERK-eIF2 α-ATF2通路激活CHOP的表達(dá),同時考察合并高血壓的作用下,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的誘發(fā)通路是否發(fā)生變化。結(jié)果：1.各組大鼠術(shù)前體重、血壓和心率無明顯差異(P0.05),給藥后的(3)、(4)組與未給藥的(1)、(2)組大鼠相比,血壓都有顯著下降(P0.05)。2.HE染色后,觀察發(fā)現(xiàn)(2)、(3)組中心肌組織都有明顯壞死損傷。3.免疫組化實(shí)驗(yàn)中,對于CHOP指標(biāo), (1)組和(3)組間有差異(P0.05), (3)組和(4)組間有差異(P0.05),其他各組之間無差異性(P0.05)；對于GRP78指標(biāo),(1)組和(2)組間有差異(P0.05), (3)組和(4)組間有差異(P0.05),其他各組之間無差異性(P0.05)。4. Western Blot實(shí)驗(yàn)中,四個組的5項(xiàng)指標(biāo)均有表達(dá),雖然由于取樣和老鼠個體差異,同一組之間的平行性不是十分良好,但是可以明確觀測到指標(biāo)蛋白的表達(dá),實(shí)驗(yàn)組中5個指標(biāo)蛋白總體水平上表達(dá)要高于對照組,表明心肌缺血再灌注通過PERK-eIF2 α-ATF2通路激活CHOP的表達(dá),而高血壓對于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的誘發(fā)通路并沒有產(chǎn)生明顯變化。結(jié)論： 1.高血壓治療藥物卡托普利可以有效地降低自發(fā)性高血壓大鼠的血壓,使得高血壓大鼠的血壓恢復(fù)到正常范圍內(nèi)。2.通過病理切片和HE染色可以觀察到心肌缺血再灌注可以引起心肌組織的壞死損傷。3.通過免疫組化實(shí)驗(yàn),對于CHOP通路中的兩個指標(biāo),假手術(shù)對照組和心肌缺血再灌注損傷實(shí)驗(yàn)組存在差異(P0.05),而(2)組和(3)組之間沒有體現(xiàn)出差異(P0.05),表明心肌缺血再灌注損傷后內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激加劇,并激發(fā)了CHOP通路；而高血壓與否并沒有加劇內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。4.通過Western Blot實(shí)驗(yàn),每個組內(nèi)的樣本平行性不好,這可能與取樣操作和老鼠的個體差異有關(guān)。(2)、(3)組中5個指標(biāo)蛋白總體水平上表達(dá)要高于(1)、 (4)組,表明心肌缺血再灌注通過PERK-eIF2 α-ATF2通路激活CHOP的表達(dá),而(2)、(3)組之間差異不明顯,表明心肌缺血再灌注過程中,相關(guān)信號通路是有變化的,而高血壓與否對于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的誘發(fā)通路并沒有產(chǎn)生明顯變化。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R544.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 張健穎;張穎冬;;缺血性腦損害病理生理過程的炎癥反應(yīng)[J];中華腦血管病雜志(電子版);2011年02期

本文編號：2734721