【摘要】：引言：云南省宣威地區(qū)的肺癌發(fā)病率和死亡率均位列全國(guó)首位,流行病學(xué)研究認(rèn)為,這種高肺癌發(fā)病率可能與當(dāng)?shù)貜V泛使用的煙煤燃燒產(chǎn)物中含有的二氧化硅顆粒物有關(guān),這些顆粒物引起的慢性炎癥可能是肺癌的一個(gè)誘因,但其具體發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚。既往大量文獻(xiàn)報(bào)道m(xù)icroRNA-101 (miR-101)與其致癌靶基因EZH2 (Enhancer of zeste homolog 2)在肺癌中存在異常表達(dá),故我們對(duì)它們?cè)谛伟├锸欠褚灿懈淖円约芭c顆粒誘導(dǎo)肺癌是否相關(guān)產(chǎn)生興趣。miR-101是一類單鏈非編碼微小RNA,通過(guò)與其靶基因EZH2 mRNA 3UTR互補(bǔ)結(jié)合抑制轉(zhuǎn)錄后EZH2蛋白的表達(dá)。EZH2主要通過(guò)催化組蛋白甲基化、干擾DNA修復(fù)等來(lái)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖。盡管miRNA-101和EZH2在肺癌中的作用已有所研究,但它們?cè)陬w粒誘導(dǎo)的肺癌發(fā)生過(guò)程中是否密切相關(guān),是否相互調(diào)控以及與慢性炎癥因子的相關(guān)性是未知的。本研究針對(duì)宣威肺癌這一具有地域高發(fā)并且與粉塵污染相關(guān)的腫瘤,篩選典型臨床病例并收集其組織樣本,首先分析了臨床標(biāo)本中miR-101和EZH2基因的表達(dá)模式,然后分析了miR-101和EZH2在微塵誘導(dǎo)的肺癌發(fā)生過(guò)程中的相關(guān)性,利用XWLC-05細(xì)胞株研究了miR-101與白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)的相關(guān)性和miR-101對(duì)腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。目的：本論文旨在研究微粒誘導(dǎo)肺癌的相關(guān)機(jī)制,為非小細(xì)胞肺癌的診斷和治療提供依據(jù)。方法：通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR和western blot實(shí)驗(yàn),比較24例宣威非小細(xì)胞肺癌患者癌組織和癌旁正常組織中miR-101和EZH2的表達(dá)水平；通過(guò)熒光素酶活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-101和EZH2的關(guān)系；利用來(lái)自宣威肺癌的細(xì)胞株XWLC-05研究微粒誘導(dǎo)的炎癥因子IL-1β對(duì)miR-101表達(dá)的影響；用miR-101 mimics轉(zhuǎn)染XWLC-05,以期了解miR-101對(duì)肺癌細(xì)胞增殖和遷移的影響。結(jié)果：1.在配對(duì)的非小細(xì)胞肺癌標(biāo)本中,相較于正常組織,miR-101在腫瘤組織中下調(diào)表達(dá),相對(duì)表達(dá)量為0.50±0.35,表達(dá)降低比例為87.5%(21/24),具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.00010.01); EZH2基因mRNA在腫瘤組織中上調(diào)表達(dá),相對(duì)表達(dá)量為7.26±11.88,表達(dá)升高比例為62.5%(15/24),具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.01670.05); EZH2蛋白在腫瘤組織中的表達(dá)也是上調(diào)的,與EZH2mRNA表達(dá)結(jié)果一致；miR-101和EZH2 mRNA相對(duì)于U6和GAPDH的表達(dá)量進(jìn)行相關(guān)性分析顯示miR-101和EZH2具有顯著的負(fù)相關(guān)性。2.利用熒光素酶檢測(cè)實(shí)驗(yàn),研究miR-101與靶基因EZH2的互作,結(jié)果表明,含有EZH2-3'UTR序列的報(bào)告基因質(zhì)粒和miR-101mimics的共轉(zhuǎn)染組與陰性對(duì)照組相比較熒光素酶活性下降,有顯著差異(P0.05)。3.二氧化硅微�？梢砸詣┝恳蕾嚨姆绞较抡{(diào)miR-101的表達(dá),同時(shí)二氧化硅顆粒處理能誘導(dǎo)XWLC-05細(xì)胞分泌IL-1β; IL-1抗體和IL-1RA可以明顯抑制二氧化硅微粒誘導(dǎo)的miR-101下調(diào)。4. miR-101 mimics轉(zhuǎn)染XWLC-05細(xì)胞株,轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)速度及細(xì)胞集落形成率明顯低于陰性對(duì)照組(P0.05)；遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明miR-101 mimics轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞遷移能力降低,與陰性對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；此外miR-101 mimics轉(zhuǎn)染組EZH2表達(dá)降低,差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論：1.miR-101在宣威肺癌組織下調(diào)表達(dá),而EZH2在宣威肺癌組織中上調(diào)表達(dá)；miR-101表達(dá)水平變化與EZH2表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)。2.EZH2是miR-101的靶基因,miR-101通過(guò)與EZH2 mRNA 3'UTR不完全結(jié)合,調(diào)節(jié)EZH2的表達(dá)。3.通過(guò)對(duì)宣威肺癌患者的體外試驗(yàn)證實(shí)了二氧化硅微粒刺激miR-101減少是依賴于IL-1β的信號(hào)。4.miR-101作為一種腫瘤抑制miRNA,可以有效的抑制XWLC-05細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和遷移。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2727789