發(fā)布時(shí)間：2020-02-26 09:32

【摘要】：目的:探討青少期慢性應(yīng)激對(duì)不同性別大鼠行為學(xué)、海馬神經(jīng)元、外周免疫及中樞免疫的影響,及四逆散的干預(yù)機(jī)制。方法:4周齡Wistar大鼠雌雄各半,按體重隨機(jī)分為空白組不接受應(yīng)激,應(yīng)激組接受為期 21d 的慢性不可預(yù)見性應(yīng)激(chronic unpredictable mild stress,CUMS),然后應(yīng)激組再次按體重隨機(jī)分為模型組、四逆散低劑量組、四逆散高劑量組、氟西汀組,繼續(xù)予以CUMS法應(yīng)激,同時(shí)各給藥組給予相應(yīng)藥物水溶液灌胃,空白組和模型組予生理鹽水灌胃,持續(xù)21d。末次給藥后對(duì)各組大鼠檢測(cè)體重、糖水偏好率、曠場實(shí)驗(yàn);采用蘇木精一伊紅染色法(hematoxylin-eosin staining,HE染色法)觀察各組大鼠海馬齒狀回(dentate gyrus,DG)區(qū)神經(jīng)元形態(tài);采用默克密理博多因子檢測(cè)技術(shù)(milliplex map)測(cè)定血漿和海馬促炎性細(xì)胞因子腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、白介素 1 β(interleukin 1 β,IL-1 β)、白介素 6(interleukin 6,IL-6)、干擾素γ(interferon γ,IFNγ)和抗炎性細(xì)胞因子白介素4(interleukin 4,IL-4)、白介素 10(interleukin 10,IL-10)的濃度;使用 Western-blotting技術(shù)檢測(cè)海馬小膠質(zhì)細(xì)胞活化標(biāo)志物CD1 lb及星形膠質(zhì)細(xì)胞活化特征性標(biāo)記物膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP),以及海馬核轉(zhuǎn)錄因子κB p65(nuclear factor κ B p65,NF-κ B p65)和磷酸化核轉(zhuǎn)錄因子κBp65(Phospho-NF-κ B p65);用免疫組織化學(xué)方法觀察各組大鼠海馬DG區(qū)GFAP表達(dá)分布和NF-κ B p65表達(dá)分布。當(dāng)不同性別同組數(shù)據(jù)資料相近并且組間變化趨勢(shì)相同時(shí),合并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,否則分別按不同性別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果:一、四逆散對(duì)青少期慢性應(yīng)激大鼠行為學(xué)的影響(一)一般狀態(tài)接受應(yīng)激前,空白組和應(yīng)激組大鼠都精神狀態(tài)良好,毛發(fā)整潔光亮,活潑好動(dòng),飲食正常。初次應(yīng)激21d后,應(yīng)激組大鼠表現(xiàn)出精神緊張,飲食量減少,毛發(fā)凌亂、枯黃失澤,灌胃和應(yīng)激時(shí)反應(yīng)劇烈,易驚并出現(xiàn)弓背防御狀態(tài),易激惹。再次應(yīng)激21d后,模型組大鼠精神萎靡,體型瘦削,毛發(fā)凌亂色暗,易于脫落,時(shí)常蜷伏角落貼籠壁;四逆散低劑量組、四逆散高劑量組和氟西汀組大鼠均表現(xiàn)活躍,鼠毛整潔有光澤�？瞻捉M大鼠各方面狀態(tài)保持良好。(二)體重雄鼠模型組較空白組體重顯著降低(P0.05),模型組與四逆散低劑量組、四逆散高劑量組、氟西汀組體重比較,均無顯著差異(P0.05)。雌鼠模型組較空白組體重顯著降低(P0.05),模型組與四逆散低劑量組、四逆散高劑量組、氟西汀組體重比較,均無顯著差異(P0.05)。(三)糖水偏好實(shí)驗(yàn)各組糖水偏好率比較無顯著差異(P0.05)。(四)曠場實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M較空白組曠場總路程顯著下降(P0.05),四逆散低劑量組和氟西汀組均較模型組曠場總路程顯著升高(P0.05),四逆散高劑量組較模型組曠場總路程升高,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。二、四逆散對(duì)青少期慢性應(yīng)激大鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)學(xué)的影響海馬DG區(qū)HE染色結(jié)果雌雄空白組大鼠海馬DG區(qū)神經(jīng)元形態(tài)清晰,結(jié)構(gòu)正常,排列整齊,層次緊密,細(xì)胞核清晰,核仁明顯。雄鼠模型組、四逆散低劑量組、四逆散高劑量組、氟西汀組分別與空白組比較,無明顯差異。雌鼠模型組神經(jīng)元數(shù)量減少,排列疏松,細(xì)胞層變薄;雌鼠四逆散低劑量組、四逆散高劑量組和氟西汀組均較MC組改善,排列緊密,細(xì)胞層數(shù)增加。三、四逆散對(duì)青少期慢性應(yīng)激大鼠外周免疫炎癥的影響(一)血漿TNF-α 雄鼠各組血漿TNF-α濃度比較無顯著差異(P0.05)。雌鼠模型組較空白組血漿TNF-α濃度顯著降低(P0.05),四逆散低劑量組、四逆散高劑量組、氟西汀組分別較模型組血漿TNF-α濃度顯著升高(P0.05)。(二)血漿IL-Iβ 各組大鼠血漿IL-Iβ濃度比較均無顯著差異(P0.05)。(三)血漿IL-6、IFN γ、IL-4和IL-10因表達(dá)水平較低,應(yīng)用此方法基本檢測(cè)不到。四、四逆散對(duì)青少期慢性應(yīng)激大鼠海馬免疫炎癥的影響(一)海馬TNF-α 雄鼠模型組較空白組海馬TNF-α濃度顯著降低(p0.05),模型組與四逆散低劑量組、四逆散高劑量組、氟西汀組海馬TNF-α濃度比較無顯著差異(P0.05)。雌鼠各組海馬TNF-α濃度比較無顯著差異(P0.05)。(二)海馬IL-1β 雄鼠模型組較空白組海馬IL-1β濃度顯著升高(P0.05),四逆散低劑量組、四逆散高劑量組均較模型組海馬IL-1β濃度顯著降低(P0.05),氟西汀組較模型組海馬IL-1β降低,但差異無顯著性(P0.05)。雌鼠各組海馬IL-1β濃度比較無顯著差異(P0.05)。(三)海馬IL-6模型組較空白組海馬IL-6濃度顯著升高(P0.05),四逆散低劑量組、四逆散高劑量組均較模型組海馬IL-6濃度顯著降低(P0.05),氟西汀組較模型組海馬IL-6濃度降低,但差異無顯著性(P0.05)。(四)海馬IFNγ 模型組較空白組海馬IFN γ濃度顯著升高(P0.05),四逆散低劑量組、四逆散高劑量組、氟西汀組均較模型組海馬IFNγ濃度顯著降低(P0.05)。(五)海馬IL-4模型組較空白組海馬IL-4濃度顯著降低(P0.05),四逆散低劑量組較模型組海馬IL-4濃度顯著升高(P0.05),四逆散高劑量組、氟西汀組均較模型組海馬IL-4濃度升高,但差異無顯著性(P0.05)。(六)海馬IL-10雄鼠模型組較空白組海馬IL-10濃度顯著升高(P0.05),四逆散低劑量組、四逆散高劑量組、氟西汀組均較模型組海馬IL-10濃度顯著降低(P0.05)。雌鼠各組海馬IL-10濃度比較無顯著差異(P0.05)。(七)海馬CD11b相對(duì)蛋白量雄鼠各組海馬CD11b相對(duì)蛋白量比較無顯著差異(P0.05)。雌鼠模型組較空白組海馬CD11b相對(duì)蛋白量顯著降低(P0.05),四逆散低劑量組、四逆散高劑量組均較模型組海馬CD11b相對(duì)蛋白量顯著升高(P0.05),氟西汀組與模型組海馬CD11b相對(duì)蛋白量無顯著差異(P0.05)。(八)1.海馬GFAP相對(duì)蛋白量雄鼠模型組較空白組海馬GFAP相對(duì)蛋白量顯著降低(P0.05),模型組與四逆散低劑量組、四逆散高劑量、氟西汀組海馬GFAP相對(duì)蛋白量比較均無顯著差異(P0.05)。雌鼠模型組較空白組海馬GFAP相對(duì)蛋白量顯著升高(P0.05),四逆散低劑量組、四逆散高劑量組、氟西汀組均較模型組海馬GFAP相對(duì)蛋白量顯著降低(P0.05)。2.海馬DG區(qū)GFAP免疫組化結(jié)果鏡下可見GFAP在各組大鼠海馬DG區(qū)均有表達(dá),主要分布在膠質(zhì)細(xì)胞胞漿及突起,呈棕黃色,星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)呈星形或放射狀。雄鼠空白組大鼠海馬DG區(qū)呈均勻彌漫性染色,有長短不等而粗壯的突起。模型組大鼠海馬DG區(qū)內(nèi)GFAP表達(dá)下降,陽性細(xì)胞數(shù)量減少,分布稀疏,突起變短細(xì)、染色變淺。四逆散低劑量組、四逆散高劑量組、氟西汀組分別與模型組相比較,無明顯差異。雌鼠空白組大鼠海馬DG區(qū)內(nèi)GFAP免疫陽性細(xì)胞胞體較小,突起纖細(xì)。模型組大鼠海馬DG區(qū)內(nèi)GFAP表達(dá)明顯增多,著色密集,陽性的星形膠質(zhì)細(xì)胞突起增粗且分支增多、變長、深染。四逆散低劑量組、四逆散高劑量組、氟西汀組海馬DG區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞增生程度均較模型組明顯改善。(九)1.海馬NF-κ B p65相對(duì)蛋白量各組海馬NF-κ B p65相對(duì)蛋白量比較無顯著差異(P0.05)。2.海馬DG區(qū)NF-κ B p65免疫組化結(jié)果鏡下可見NF-κ B p65在各組大鼠海馬DG區(qū)均有表達(dá),呈棕黃色著色。雌雄空白組細(xì)胞漿都可見NF-κBp65陽性表達(dá),但未見核內(nèi)NF-κ Bp65陽性表達(dá)。雌雄模型組同樣有胞漿NF-κ Bp65陽性表達(dá),而且NF-κ Bp65在一部分細(xì)胞核內(nèi)也有陽性表達(dá),可見NF-κ Bp65發(fā)生核移位。與模型組比較,四逆散低劑量組、四逆散高劑量組和氟西汀組NF-κBp65同樣主要是在漿表達(dá),NF-κ Bp65核表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)較模型組減少,提示能抑制NF-κ Bp65蛋白核移位。(十)海馬Phospho-NF-κ B p65相對(duì)蛋白量雄鼠各組海馬Phospho-NF-κ B p65相對(duì)蛋白量比較無顯著差異(P0.05)。雌鼠模型組較空白組海馬Phospho-NF-κBp65相對(duì)蛋白量顯著升高(P0.05),四逆散低劑量組、四逆散高劑量組、氟西汀組均較模型組海馬Phospho-NF-κ B p65相對(duì)蛋白量顯著降低(P0.05)。結(jié)論:(一)單純青少期慢性應(yīng)激未引起動(dòng)物抑郁障礙的特征性表現(xiàn),但可出現(xiàn)一定的自主行為異常,并使雌鼠產(chǎn)生神經(jīng)損傷,形成"生物瘢痕",留下潛在的長期的影響。(二)單純青少期慢性應(yīng)激對(duì)中樞免疫的影響比外周免疫顯著。(三)單純青少期慢性應(yīng)激可引起中樞免疫功能紊亂,包括免疫激活和免疫抑制同時(shí)發(fā)生,如小膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞狀態(tài)改變,細(xì)胞因子升高或下降,NF-κB通路激活等,具體表現(xiàn)具有性別差異。應(yīng)激引起的神經(jīng)"生物瘢痕"形成機(jī)制與中樞免疫功能紊亂相關(guān)。(四)四逆散可同時(shí)調(diào)節(jié)單純青少期慢性應(yīng)激引起的免疫激活和免疫抑制,改善免疫紊亂,恢復(fù)免疫平衡,改善神經(jīng)元損傷,提示中藥合劑對(duì)機(jī)體免疫的雙向調(diào)節(jié)作用。本研究結(jié)果可為四逆散抗應(yīng)激損傷早期臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。創(chuàng)新點(diǎn):(一)既往研究慢性心理應(yīng)激影響的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)大多針對(duì)成年階段和雄性動(dòng)物。本研究選取青少期階段為研究對(duì)象,對(duì)雌雄動(dòng)物進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)青少期慢性應(yīng)激引起的潛在生物學(xué)改變及其性別差異,為精神障礙發(fā)病的預(yù)防和及早干預(yù)提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。(二)既往為數(shù)不多的青少期應(yīng)激研究主要從神經(jīng)發(fā)生或神經(jīng)內(nèi)分泌的角度探討其中樞病理改變。本研究結(jié)合當(dāng)下研究熱點(diǎn)之一的抑郁炎癥假說,從免疫機(jī)制的角度,探討青少期應(yīng)激導(dǎo)致的免疫紊亂,尤其是中樞的免疫失衡,豐富了青少期應(yīng)激的研究維度。(三)本研究結(jié)果反映出四逆散對(duì)青少期慢性應(yīng)激引起的免疫紊亂能同時(shí)發(fā)揮相應(yīng)的雙向調(diào)節(jié)作用,為四逆散抗應(yīng)激損傷早期臨床應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【圖文】：

炎癥假說認(rèn)為：＂應(yīng)激能夠激活機(jī)體免疫系統(tǒng)，增加細(xì)胞因子釋放，進(jìn)一步影響神經(jīng)逡逑遞質(zhì)合成、釋放與代謝，改變神經(jīng)可塑性Ｌ義及神經(jīng)內(nèi)分泌功能，最終引發(fā)抑郁癥。＂（見逡逑圖１）逡逑Ｒｄｕｃｅｄ逡逑ＴＴＴ￣ｎ邐ｒ邋ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ逡逑Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ邋ｏｆ邐邐邋：：：：：：：：．．．：：：：：：．＂：．：：：＇：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：逡逑ｔｈｅ邋ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ邐ＪＮｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔａｆｓｌ－＾，腳產(chǎn)扣逡逑ｉｍ邋巧肌邋６邐＾＾邐ｍｅｔａｂｄ邋反邋ｍ逡逑ｓｙｓｔＯＴ邐Ｉ賊微}0逡逑ｎｅｉ＾ｔａｋｅ逡逑ｉ＼邐Ｏｖｅｒ－逡逑邐邐ｉ邋Ｃｙｔｏｋｉｎｅ邋邐邋ｘｌｉｖａｌｉｏｎ邋邐逡逑Ｓｔｒｅｓｓ邋－？邐Ｉ邋邐？－邋ＨＰＡａｘｉｓ邋—邋＇邋0＾＾ｅｄ邋１邋Ｄｅｐｒ＾ｓｉｏｎ逡逑＼邋ｉ邐Ｌ邋ｎ邋卿邋ｖ０逡逑＾＾邐ｆｅ＾ａｃＮ邐Ｉ逡逑ＡｃＢｖｓｔｉＱｎ邋ｃｆ逡逑ｔｈｅ邋ｃｅｎｔｒａｌ逡逑耐巧狐ｓ邐Ｉ邐１邋ｒ邋Ｒｅｄｕｃｅｄ邋Ｉ逡逑Ｉ邋ｓ品邐ｙ}瑁餡ｙｈＵ巧斯泌ｉｓＰ逡逑圖１抑郁炎癥假說。逡逑一、抑郁癥與免疫炎癥途徑逡逑臨床證據(jù)顯示，不管抑郁癥患者是否有基礎(chǔ)疾病，其外周血液及腦脊液的炎癥細(xì)逡逑胞因子水平與非抑郁癥患者比較均升高Ｗ。Ｓｃｈｍｉｄｔ等研巧發(fā)現(xiàn)抑郁癥患者較正常對(duì)逡逑照炎癥細(xì)胞因子表達(dá)水平更高ＵＷ。Ｊｏｈａｎ等人對(duì)抑郁癥患者進(jìn)行１２周的隨訪發(fā)現(xiàn)，抑逡逑郁癥患者在發(fā)抑郁階段，其血漿中檢測(cè)到有多種細(xì)胞因子水平升高，，而經(jīng)過治療抑郁逡逑癥狀完全緩解時(shí)的細(xì)胞因子水平降到正常水平Ｗ。黃茹燕等發(fā)現(xiàn)

有受虐待經(jīng)歷的抑郁癥患者較那些無受虐待經(jīng)歷的患者炎癥變化更嚴(yán)重＂＂。實(shí)驗(yàn)研究逡逑中長期處于應(yīng)激狀態(tài)的大鼠，ＩＬ－１水平增高。應(yīng)激－免疫相互作用和抑郁癥之間的關(guān)逡逑系見圖２。逡逑６逡逑
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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1 胡麗麗;韓波;趙小鴿;米麗華;宋強(qiáng);黃辰;;早期慘叫聲音應(yīng)激對(duì)雌鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2015年12期

2 汪崇澤;盛國紅;;免疫炎癥途徑與抑郁癥的研究進(jìn)展[J];精神醫(yī)學(xué)雜志;2015年05期

3 王慧慧;張百霞;葉小彤;何帥兵;張燕玲;王耘;;基于“中藥作用機(jī)理輔助解析系統(tǒng)”的四逆散抗抑郁作用機(jī)制研究[J];中國中藥雜志;2015年19期

4 王宇紅;譚小雯;趙洪慶;楊蕙;孟盼;韓遠(yuǎn)山;譚元生;;左歸降糖解郁方對(duì)糖尿病并發(fā)抑郁癥大鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP、S100B的影響[J];時(shí)珍國醫(yī)國藥;2015年08期

5 頊紅雨;葉玉勤;郝野陸;石菲;元國豪;江龍飛;賀曉生;;早期應(yīng)激對(duì)雄性大鼠海馬神經(jīng)發(fā)生的影響[J];中華神經(jīng)外科疾病研究雜志;2015年03期

6 姜碩;黃彬;樊凌;李富銘;肖瑤;符文彬;;電針?biāo)年P(guān)穴對(duì)抑郁大鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)的影響[J];中華中醫(yī)藥雜志;2015年01期

7 范開華;孫琳;張育勤;米婷婷;李彰;金偉華;王詩華;;我國人群細(xì)胞因子水平與抑郁癥的相關(guān)性研究的系統(tǒng)評(píng)價(jià)[J];中國藥房;2014年24期

8 黃茹燕;徐曙;方群;武欣;關(guān)承斌;喬慧芬;李箕君;;首發(fā)抑郁癥患者西酞普蘭治療前后血清神經(jīng)肽與細(xì)胞因子水平研究[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2014年05期

9 邱鳴琦;陳燕惠;;早期應(yīng)激事件與下丘腦-垂體-腎上腺軸的發(fā)育[J];中國兒童保健雜志;2014年05期

10 李艷麗;;逍遙散對(duì)抑郁癥模型大鼠海馬TNF-α和c-fos表達(dá)的影響[J];黑龍江醫(yī)藥科學(xué);2013年04期

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1 彭云麗;慢性應(yīng)激誘發(fā)抑郁行為的炎性機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

2 舒暢;早年母愛剝奪對(duì)成年大鼠海馬神經(jīng)再生、BDNF和CREB表達(dá)的影響[D];武漢大學(xué);2013年

3 頊紅雨;早期應(yīng)激對(duì)海馬學(xué)習(xí)、記憶功能的作用和機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2012年

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3 趙穎;慢性應(yīng)激對(duì)大鼠海馬膠質(zhì)細(xì)胞的不對(duì)稱性影響[D];浙江理工大學(xué);2015年

本文編號(hào)：2582970