【摘要】：非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指除外酒精和其他明確的損肝因素所致的肝細(xì)胞內(nèi)脂肪過度沉積為主要特征的臨床病理綜合征,其包括單純性脂肪肝(SFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)及其相關(guān)肝硬化。對(duì)該疾病機(jī)制研究顯示其與胰島素抵抗和遺傳易感性密切相關(guān)。前期的研究結(jié)果顯示,護(hù)肝清脂片作為一種中藥復(fù)方,展現(xiàn)出了良好的降脂抗炎作用。然而,其對(duì)NAFLD的防治作用的相關(guān)機(jī)制還不是很明確。在本次研究中,我們首先驗(yàn)證檢測(cè)了護(hù)肝清脂片對(duì)游離脂肪酸誘導(dǎo)的L02細(xì)胞脂肪變性的保護(hù)作用。然后運(yùn)用血清藥理學(xué)與iTRAQ蛋白標(biāo)記定量技術(shù)相結(jié)合的方法來(lái)闡明護(hù)肝清脂片對(duì)游離脂肪酸誘導(dǎo)的L02細(xì)胞脂肪變性的保護(hù)作用機(jī)制。結(jié)果顯示護(hù)肝清脂片能顯著地改善游離脂肪酸導(dǎo)致的L02細(xì)胞中相關(guān)炎癥因子、氧化應(yīng)激以及脂質(zhì)積累的影響。后續(xù)的的iTRAQ蛋白定量結(jié)果顯示:游離脂肪酸單獨(dú)刺激組與空白組比較,有355個(gè)蛋白表達(dá)發(fā)生改變,即鑒定到355個(gè)差異蛋白。同樣地,護(hù)肝清脂藥物血清高劑量組干預(yù)后與單獨(dú)游離脂肪酸誘導(dǎo)組比較,有359個(gè)差異蛋白;護(hù)肝清脂藥物血清高劑量組干預(yù)后與空白組比較,有365個(gè)差異蛋白。對(duì)所有差異蛋白的pathway分析結(jié)果顯示有多條信號(hào)通路被注釋到,比如:微生物在不同環(huán)境中的代謝(microbial metabolism in diverse environments),脂肪酸代謝(fatty acid metabolism),過氧化物酶體增殖物激活受體信號(hào)通路(peroxisome proliferator activated receptor signaling pathway),絲裂原活化蛋白激酶信號(hào)通路(mitogen-activated protein kinase signaling pathway)等與護(hù)肝清脂片對(duì)游離脂肪酸誘導(dǎo)的L02細(xì)胞脂肪變性的保護(hù)作用有關(guān)。此外,本次試驗(yàn)還對(duì)其中的一些差異蛋白包括 heat shock protein 27(HSP27),acetyl-CoA acetyltransferase 1,calnexin,and integrin-linked kinase進(jìn)行了后續(xù)的Western blotting驗(yàn)證。最后運(yùn)用特異性siRNA將HSP27沉默,檢測(cè)了 ROS、IL-6以及TNF-α水平,進(jìn)一步揭示了 HSP27蛋白在護(hù)肝清脂片藥物血清對(duì)游離脂肪酸誘導(dǎo)的L02細(xì)胞脂肪變性的保護(hù)作用中所扮演的角色。以上所有結(jié)果證明護(hù)肝清脂片對(duì)游離脂肪酸誘導(dǎo)的L02細(xì)胞具有很好的保護(hù)作用,且該與上述蛋白的功能有關(guān)。
【圖文】：

ＣＶ邋（Ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ邋ｏｆ邋Ｖａｒｉａｔｉｏｎ）變異系數(shù)可以反映數(shù)據(jù)的離散程度，是數(shù)據(jù)標(biāo)逡逑準(zhǔn)方差和平均值的比值，用百分?jǐn)?shù)表示，具體表達(dá)式為ＣＶ邋＝邋（標(biāo)準(zhǔn)偏差ＳＤ／平均逡逑值ｍｅａｎ）ｘ邋１邋00％。圖２－２表示不同樣品的ＣＶ值分布及盒形圖，從左圖中可以看出，逡逑當(dāng)ＣＶ的閾值設(shè)置在２０％時(shí)，三組樣品（Ｃ、ＦＦＡ、ＨＨ）的ＣＶ累計(jì)百分比分別逡逑為９０．４５％、９１．２５％以及８８．５４％，相對(duì)來(lái)說，ＦＦＡ樣品的ＣＶ值更加集中在低值逡逑區(qū)域，說明ＦＦＡ樣品的重復(fù)性更好。而通過右側(cè)ＣＶ盒形圖更加直觀的顯示出不逡逑同實(shí)驗(yàn)組ＣＶ值的對(duì)比，不同顏色的盒形圖代表了不同實(shí)驗(yàn)組的ＣＶ分布，盒子逡逑的上下兩邊為上下四分位數(shù)線，，盒子中間的黑色橫線是數(shù)據(jù)中位數(shù)（數(shù)據(jù)中占據(jù)逡逑中間位置的數(shù)）。通過盒子的上下四分位數(shù)可以判斷出，相對(duì)來(lái)說，Ｃ樣品的ＣＶ逡逑３８逡逑

ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ＊邋ＣＶ邋ｖａｌｕｅ，邋Ｂｌａｃｋ邋ｌｉｎｅ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｔｏｐ邋ｏｆ邋Ｂｏｘ邋ｓｈｏｗｅｄ邋ｔｈｅ邋ｐｏｓｉｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｍｅｄｉａｎ．逡逑４．３邋ｉＴＲＡＱ各實(shí)驗(yàn)組樣品相關(guān)性分析逡逑相關(guān)性分析可以衡量出不同樣品之間的相關(guān)密切程度。圖２－３綜合的反映了逡逑不同實(shí)驗(yàn)樣品（１１３：Ｃ１，邋１１４：Ｃ２，邋１１５：ＦＦＡ１，１１６：ＦＦＡ２，邋１１７：ＦＦＡ３，邋１１８：ＨＨ１，逡逑１１９：邋ＨＨ２，邋１２１：邋ＨＨ３）中重復(fù)樣品的Ｐｅａｒｓｏｎ相關(guān)性，數(shù)據(jù)來(lái)源于：以１１３標(biāo)記逡逑樣品（Ｃ１）作為分母，所有差異蛋白質(zhì)（經(jīng)比值和Ｐ值判斷）的比值經(jīng)過以２為逡逑底數(shù)的對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)化后的值，從結(jié)果中可以看出，重復(fù)樣品的比值相關(guān)系數(shù)達(dá)到了邋０．７逡逑以上，說明本項(xiàng)目的重復(fù)性較好。逡逑３９逡逑
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2569502