發(fā)布時(shí)間：2019-09-29 16:31

【摘要】：新生兒缺氧缺血性腦病(Hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)是引起新生兒死亡、急性或慢性神經(jīng)系統(tǒng)損傷及腦發(fā)育滯后的主要原因之一。腦缺血缺氧最常見(jiàn)也是最重要的病理?yè)p傷特點(diǎn)為神經(jīng)元的凋亡甚至死亡,因此在缺血缺氧發(fā)生后,保護(hù)神經(jīng)元的正常存活、減少細(xì)胞凋亡是研究和解決神經(jīng)系統(tǒng)缺血缺氧性疾病的最重要策略之一。三七皂苷R1,作為中藥三七的提取物,具有類雌激素的作用,它可以通過(guò)雌激素受體發(fā)揮抗炎、抗氧化、抗凋亡和抗神經(jīng)損傷等多種保護(hù)作用。但NGR1對(duì)新生兒缺血缺氧性腦病是否具有保護(hù)性作用仍未見(jiàn)報(bào)道。目前認(rèn)為,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ER stress)在缺血缺氧導(dǎo)致的細(xì)胞損傷過(guò)程中發(fā)揮重要的作用,且重要的是ER stress受內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)鈣離子平衡調(diào)節(jié)。當(dāng)機(jī)體遭受不良刺激時(shí),內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)鈣離子大量釋放,引起鈣離子失衡。在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi),鈣離子的流出主要通過(guò)IP3受體(IP3R)通道,而這一通道的激活關(guān)鍵在于IP3R與1P3結(jié)合。當(dāng)病理情況下,PLC的磷酸化增多可以導(dǎo)致IP3的表達(dá)增高,。因此,深入探討NGR1是否能夠通過(guò)節(jié)PLC/IP3R以及后續(xù)對(duì)Ca2+及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路的影響尤為重要。綜上,本研究以NGR1、雌激素受體、ER stress和NGR1、PLC、IP3R,Ca2+為軸心線索,初步探討NGR1在HIE中的作用及機(jī)制。目的采用原代培養(yǎng)神經(jīng)元OGD/R模型及出生7天SD大鼠缺氧缺血性腦損傷模型,探討NGR1在缺血缺氧性損傷中對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用及其機(jī)制。方法:1.對(duì)原代培養(yǎng)的SD大鼠胎鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞,采用氧糖剝奪(Oxygen-Glucose Deprivation,OGD)1.5 h復(fù)糖氧4 h或24 h的方法建立大鼠皮層神經(jīng)元OGD/R模型;同時(shí)取用出生7天SD乳鼠,使用頸動(dòng)脈結(jié)扎和缺氧環(huán)境處理的方法建立體內(nèi)HIE模型。2.分組1:對(duì)照組(Control)假模型組(sham組),模型組(OGD/R;HIE),模型+NGR1治療組(OGD/R+NGR1;HIE+NGR1),溶劑對(duì)照組(vehicle組)分組2:對(duì)照組(Control),模型組(OGD/R;HIE),模型+NGR1治療組(OGD/R+NGR1;HIE+NGR1),OGD/R+NGR1+ICI-182780組(ICI-182780:雌激素受體阻斷劑);溶劑對(duì)照組(vehicle組)分組3:對(duì)照組(Control),模型組(OGD/R;HIE),模型+NGR1治療組(OGD/R+NGR1;HIE+NGR1),OGD/R+NGR1+m-3MFBS組(m-3MFBS:PLC激動(dòng)劑)組3.檢測(cè)指標(biāo):(1)通過(guò)MTT法檢測(cè)神經(jīng)元細(xì)胞存活率;LDH檢測(cè)細(xì)胞膜完整性;Hochest33342染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡。(2)通過(guò)TTC染色檢測(cè)大鼠腦腦梗死面積;HE染色觀察腦組織病理?yè)p傷;TUNEL染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡。(3)使用Western Blot方法檢測(cè)不同蛋白的表達(dá)。(4)使用鈣離子熒光探針檢測(cè)缺血缺氧后內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)鈣離子濃度變化。結(jié)果:1.相比于OGD/R組,OGD/R+NGR1組神經(jīng)元存活率明顯提高,LDH漏出率降低,細(xì)胞凋亡減少且呈濃度依賴性。較HIE組,HIE+NGR1組腦梗死面積明顯縮小;病理?yè)p傷減輕;TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目減少等。2.ICI-182780可阻斷NGR1對(duì)皮層神經(jīng)元和新生大鼠腦的缺血缺氧性損傷保護(hù)作用。與OGD/R+NGR1組比較,OGD/R+NGR1+ICI-182780組神經(jīng)元存活率下降,凋亡增多,LDH漏出率增高;同時(shí)在體內(nèi)模型中,與HIE+NGR1組相比,HIE+NGR1+ICI-182780組腦梗死面積明顯增加、病理?yè)p傷加重,TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目增加等。3.在OGD/R或HIE后,ER stress過(guò)程中凋亡相關(guān)蛋白被激活,NGR1能夠降低凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá),但NGR1的這一作用被ICI-182780抑制。4.在缺血缺氧損傷中,NGR1能夠抑制PLC的活化和IP3R1的表達(dá)增高;且NGR1能夠抑制IP3R1介導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子釋放結(jié)論無(wú)論是體內(nèi)或體外條件下,NGR1均能夠明顯減少缺血缺氧導(dǎo)致的神經(jīng)元的損傷。且NGR1的保護(hù)作用可能通過(guò)兩條途徑發(fā)揮,一方面NGR1可能通過(guò)雌激素受體調(diào)節(jié)ER stress來(lái)發(fā)揮對(duì)新生大鼠缺氧缺血性腦損傷的保護(hù)作用;另一方面在缺血缺氧性腦損傷中,NGR1能夠調(diào)節(jié)PLC/IP3R,進(jìn)而調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子釋放,從而調(diào)節(jié)細(xì)胞損傷。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2544031