【摘要】：目的:通過實(shí)驗(yàn)研究確定朱砂安神丸(Zhusha-anshen-wan,ZS ASW)拮抗創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(Posttraumatic Stress Disorder,PTSD)及其所致睡眠障礙的作用及作用機(jī)制。方法:第一部分:朱砂安神丸對(duì)PTSD大鼠場(chǎng)景恐懼消退的影響一、朱砂安神丸對(duì)PTSD大鼠場(chǎng)景恐懼習(xí)得、消退和消退保持的影響(恐懼消退范式一)SD雄性大鼠50只,隨機(jī)將其分為假操作組、模型組、陽(yáng)性藥(哌唑嗪)組、朱砂安神丸(ZS AS W)高、低劑量組,每組10只動(dòng)物。單程長(zhǎng)時(shí)應(yīng)激(Single prolonged stress,SPS)法復(fù)制PTSD模型。實(shí)驗(yàn)第8日起開始藥物干預(yù),朱砂安神丸高、低劑量按1.08 g/kg和0.54g/kg,哌唑嗪劑量按O.5mg/kg每日一次灌胃給藥,共給藥6天,假操作組和模型組給予相應(yīng)體積蒸餾水。條件性恐懼實(shí)驗(yàn)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)記錄大鼠僵直時(shí)間,以此作為觀察指標(biāo)研究朱砂安神丸對(duì)PTSD大鼠場(chǎng)景恐懼習(xí)得、消退和消退保持的影響。二、朱砂安神丸聯(lián)合多次消退訓(xùn)練對(duì)大鼠場(chǎng)景恐懼消退的影響(恐懼消退范式二)SD雄性大鼠50只,隨機(jī)將其分為假操作組、模型組、陽(yáng)性藥(哌唑嗪)組、朱砂安神丸高、低劑量組,每組10只動(dòng)物。SPS法復(fù)制PTSD模型。實(shí)驗(yàn)第9日起開始消退訓(xùn)練,同時(shí)開始藥物干預(yù),朱砂安神丸高、低劑量按1.08 g/kg和0.54 g/kg,哌唑嗪劑量按0.5 mg/kg每日一次灌胃給藥,共給藥5天,假操作組和模型組給予相應(yīng)體積蒸餾水。條件性恐懼實(shí)驗(yàn)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)記錄大鼠5次消退訓(xùn)練的僵直時(shí)間,以此作為觀察指標(biāo)研究朱砂安神丸對(duì)PTSD大鼠場(chǎng)景恐懼消退的影響。三、朱砂安神丸對(duì)PTSD大鼠自主活動(dòng)的影響SD雄性大鼠60只,隨機(jī)將其分為空白對(duì)照組,朱砂安神丸高、低劑量組、SPS模型組,SPS+ZSASW高劑量組、SPS+ZSASW低劑量組,每組10只動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)第8日起開始藥物干預(yù),朱砂安神丸高、低劑量按1.08 g/kg和0.54 g/kg,每日一次灌胃給藥,共給藥6天,空白對(duì)照組和SPS模型組給予相應(yīng)體積蒸餾水。以大鼠在開野實(shí)驗(yàn)箱中的運(yùn)動(dòng)時(shí)間和運(yùn)動(dòng)距離為評(píng)價(jià)指標(biāo)來(lái)研究朱砂安神丸處置和SPS應(yīng)激兩個(gè)因素間的交互作用和主效應(yīng)。第二部分:朱砂安神丸對(duì)PTSD大鼠睡眠的影響一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物監(jiān)測(cè)系統(tǒng)睡眠探測(cè)分析模塊用于分析大鼠睡眠模式的方法評(píng)價(jià)SD雄性大鼠20只,隨機(jī)將其分為腦電圖(EEG)睡眠分析組和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物監(jiān)測(cè)系統(tǒng)(CLAMS)睡眠分析組,每組10只動(dòng)物。分別用CLAMS動(dòng)物監(jiān)測(cè)系統(tǒng)和皮層腦電圖對(duì)正常大鼠睡眠進(jìn)行記錄和分析,以大鼠睡眠時(shí)間(Sleep time,ST)、覺醒次數(shù)(Awakening number,AN)和短時(shí)覺醒次數(shù)(Brief awakening number,bAN)為評(píng)價(jià)指標(biāo),比較兩種方法在分析睡眠相關(guān)指標(biāo)上的差異。二、建立篩選共病睡眠障礙PTSD大鼠的方法SD雄性大鼠60只,隨機(jī)將其分為空白對(duì)照組和應(yīng)激暴露組,空白對(duì)照組20只大鼠,應(yīng)激暴露組40只大鼠。應(yīng)激暴露組大鼠接受SPS應(yīng)激,以大鼠在新異環(huán)境中的僵直時(shí)間作為評(píng)價(jià)指標(biāo)將暴露組大鼠分為高反應(yīng)(High response,HR)和低反應(yīng)(Low response,LR)兩個(gè)亞組。利用CLAMS系統(tǒng)記錄大鼠睡眠,以大鼠睡眠時(shí)間、覺醒次數(shù)和短時(shí)覺醒次數(shù)為評(píng)價(jià)指標(biāo),研究HR和LR大鼠睡眠模式的差異性,并對(duì)大鼠僵直時(shí)間(在新異環(huán)境中的僵直時(shí)間)與睡眠指標(biāo)的相關(guān)性進(jìn)行分析。三、朱砂安神丸對(duì)PTSD大鼠睡眠的影響SPS法復(fù)制PTSD模型動(dòng)物,以動(dòng)物在新異環(huán)境中的僵直時(shí)間為依據(jù)篩選出高反應(yīng)(HR,Freezing60%)大鼠(雄性SD大鼠)40只,體重均衡下隨機(jī)分為四組,即模型組、陽(yáng)性藥(哌唑嗪)組、朱砂安神丸高、低劑量組,每組10只動(dòng)物,另設(shè)一組空白對(duì)照組(不接受SPS應(yīng)激)。實(shí)驗(yàn)第8日起開始藥物干預(yù),朱砂安神丸高、低劑量按1.08 g/kg和0.54 g/kg,哌唑嗪劑量按0.5 mg/kg每日一次灌胃給藥,共給藥6天,空白對(duì)照組和模型組給予相應(yīng)體積蒸餾水。利用CLAMS系統(tǒng)記錄分析大鼠睡眠,以大鼠睡眠時(shí)間、覺醒次數(shù)和短時(shí)覺醒次數(shù)為評(píng)價(jià)指標(biāo),研究朱砂安神丸對(duì)PTSD大鼠活動(dòng)相(暗相)及睡眠相(明相)睡眠模式的影響。第三部分:基于LC-NA神經(jīng)系統(tǒng)的朱砂安神丸改善PTSD大鼠恐懼消退障礙和睡眠障礙的神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制研究一、基于LC-NA神經(jīng)系統(tǒng)的朱砂安神丸改善PTSD大鼠恐懼消退障礙的神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制研究SD雄性大鼠65只,隨機(jī)將其分為假操作組、模型組、陽(yáng)性藥(哌唑嗪)組、朱砂安神丸高、低劑量組,每組1 3只動(dòng)物。SPS法復(fù)制PTSD模型。實(shí)驗(yàn)第8日起開始藥物干預(yù),朱砂安神丸高、低劑量按1.08 g/kg和0.54 g/kg,哌唑嗪劑量按0.5 mg/kg每日一次灌胃給藥,共給藥6天,假操作組和模型組給予相應(yīng)體積蒸餾水。條件性恐懼實(shí)驗(yàn)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)記錄并分析大鼠僵直時(shí)間,以此作為觀察指標(biāo)研究朱砂安神丸對(duì)PTSD大鼠場(chǎng)景恐懼習(xí)得、消退和消退保持的影響。利用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase chain reaction,PCR)和熒光免疫組化技術(shù),以大鼠腦組織內(nèi)酪氨酸羥化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素受體1(Corticotropin releasing factor receptor-1,CRFR1)、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(Corticotropin releasing factor,CRF)為指標(biāo),研究朱砂安神丸對(duì)以上指標(biāo)的干預(yù)作用。二、基于LC-NA神經(jīng)系統(tǒng)的朱砂安神丸改善PTSD大鼠睡眠障礙的神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制研究SPS法復(fù)制PTSD模型動(dòng)物,以動(dòng)物在新異環(huán)境中的僵直時(shí)間為依據(jù)篩選出高反應(yīng)(HR,Freezing60%)大鼠52只(SD雄性大鼠),HR大鼠隨機(jī)分為四組,即模型組、陽(yáng)性藥(哌唑嗪)組、朱砂安神丸高、低劑量組,每組13只,另設(shè)一組空白對(duì)照組(不接受SPS應(yīng)激)。實(shí)驗(yàn)第8日起開始藥物干預(yù),朱砂安神丸高、低劑量按1.08 g/kg和0.54 g/kg,哌唑嗪劑量按0.5 mg/kg每日一次灌胃給藥,共給藥6天,空白對(duì)照組和模型組給予相應(yīng)體積蒸餾水。利用CLAMS系統(tǒng)記錄大鼠睡眠,以大鼠睡眠時(shí)間、覺醒次數(shù)和短時(shí)覺醒次數(shù)為評(píng)價(jià)指標(biāo),研究朱砂安神丸對(duì)PTSD大鼠活動(dòng)相(暗相)及睡眠相睡(明相)睡眠模式的影響。利用熒光定量PCR和熒光免疫組化技術(shù),以大鼠腦組織內(nèi)TH、CRFR1、CRF及尿液中皮質(zhì)酮(Corticosterone,CORT)為觀察指標(biāo),研究朱砂安神丸對(duì)以上指標(biāo)的干預(yù)作用。結(jié)果:第一部分:朱砂安神丸對(duì)PTSD大鼠場(chǎng)景恐懼消退的影響一、朱砂安神丸對(duì)PTSD大鼠場(chǎng)景恐懼習(xí)得、消退和消退保持的影響(恐懼消退范式一)在場(chǎng)景恐懼習(xí)得和消退實(shí)驗(yàn)中,各組大鼠的僵直時(shí)間均無(wú)顯著性變化。在消退保持測(cè)試中,在消退的第1 min內(nèi),與假操作組比,模型組動(dòng)物僵直時(shí)間明顯高于假操作組(P0.01),兩者比較有顯著性差異。與模型組相比,陽(yáng)性藥組和ZSASW高劑量組大鼠僵直時(shí)間明顯降低,與模型組比較有顯著性差異(P0.05和P0.01)。二、朱砂安神丸聯(lián)合多次消退訓(xùn)練對(duì)大鼠場(chǎng)景恐懼消退的影響(恐懼消退范式二)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:與假操作組相比,10～14日的消退訓(xùn)練中模型組動(dòng)物僵直時(shí)間均明顯高于假操作組(P0.05或P0.01)。與模型組相比,陽(yáng)性藥組僵直時(shí)間在第12、13和14日明顯減少(P0.05);ZSASW高劑量組大鼠在第13和第14日僵直時(shí)間明顯減少(P0.05和 P0.01)。三、朱砂安神丸對(duì)PTSD大鼠自主活動(dòng)的影響開野實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:對(duì)大鼠的活動(dòng)距離的影響,SPS應(yīng)激和朱砂安神丸兩因素之間沒有交互作用(F(2,53)=1.244,P=0.2965)。SPS 應(yīng)激處理(F(1,53=0.001494,P=0.9693)和藥物處理(F(2,53)=0.5326,P=0.5902)的主效應(yīng)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)于大鼠運(yùn)動(dòng)時(shí)間的影響,SPS應(yīng)激和朱砂安神丸處理兩因素之間沒有交互作用(F(2,53)=2.639,P=0.0808);SPS 應(yīng)激處理(F(1,53)=0.9319,P=0.3388)和藥物處理(F(2,53)=0.8356,P=0.4392)的主效應(yīng)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第二部分:朱砂安神丸對(duì)PTSD大鼠睡眠的影響一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物監(jiān)測(cè)系統(tǒng)睡眠探測(cè)分析模塊用于分析大鼠睡眠的方法評(píng)價(jià)EEG組動(dòng)物與CLAMS組動(dòng)物在睡眠時(shí)間和覺醒次數(shù)和短時(shí)覺醒次數(shù)上均沒有明顯的差異。二、建立篩選共病睡眠障礙PTSD大鼠的方法SPS應(yīng)激后第9日,與空白對(duì)照組比較,SPS暴露組大鼠睡眠時(shí)間沒有明顯變化,覺醒次數(shù)和短時(shí)覺醒次數(shù)明顯增多(P0.01和P0.05);高反應(yīng)組大鼠睡眠時(shí)間明顯減少(P0.05),覺醒次數(shù)和短時(shí)覺醒次數(shù)均明顯增多(P0.01)。SPS應(yīng)激后第14日,SPS暴露組大鼠僅短時(shí)覺醒次數(shù)增多(P0.05);高反應(yīng)組大鼠覺醒次數(shù)和短時(shí)覺醒次數(shù)明顯增多(P0.05和P0.01)。睡眠相關(guān)指標(biāo)與新異環(huán)境中SPS大鼠僵直時(shí)間的相關(guān)性研究發(fā)現(xiàn),SPS暴露組大鼠和高反應(yīng)組大鼠睡眠時(shí)間、覺醒次數(shù)和短時(shí)覺醒次數(shù)均與大鼠在新異環(huán)境中僵直時(shí)間有相關(guān)性(P0.05或P0.01)。三、朱砂安神丸對(duì)PTSD大鼠睡眠的影響SPS應(yīng)激后第9日,在明相,與對(duì)照組大鼠相比較,模型組大鼠各項(xiàng)睡眠指標(biāo)均有顯著性變化(P0.05或P0.01)。與模型組比較,陽(yáng)性藥組和朱砂安神丸高、低劑量組大鼠睡眠各項(xiàng)指標(biāo)均未有明顯影響。在暗相,與空白對(duì)照組大鼠相比較,模型組大鼠短時(shí)覺醒次數(shù)顯著升高(P0.05)。與模型組比較,陽(yáng)性藥組和朱砂安神丸高、低劑量組大鼠短時(shí)覺醒次數(shù)均未有顯著性變化。SPS應(yīng)激后第14日,與對(duì)照組大鼠相比較,模型組大鼠覺醒次數(shù)和短時(shí)覺醒次數(shù)均有顯著性差異(P0.01)。與模型組比較,陽(yáng)性藥組和高劑量朱砂安神丸組大鼠覺醒次數(shù)和短時(shí)覺醒次數(shù)均顯著降低(P0.05或P0.01);低劑量朱砂安神丸組大鼠短時(shí)覺醒次數(shù)顯著減少(P0.05)。在暗相,與對(duì)照組大鼠相比較,模型組大鼠短時(shí)覺醒次數(shù)顯著增加(P0.05)。與模型組比較,陽(yáng)性藥組和高劑量朱砂安神丸組大鼠短時(shí)覺醒次數(shù)均顯著降低(P0.05)。第三部分:基于LC-NA神經(jīng)系統(tǒng)的朱砂安神丸改善PTSD大鼠恐懼消退障礙和睡眠障礙的神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制研究一、基于LC-NA神經(jīng)系統(tǒng)的朱砂安神丸改善PTSD大鼠恐懼消退障礙的神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制研究與假操作組相比,模型組大鼠LC內(nèi)TH和CRFR1二者的mRNA和蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)(P0.01和P0.05),CeA內(nèi)CRF mRNA和蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)(P0.01或P0.05),PVN中僅mRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)(P0.05)。與模型組比較陽(yáng)性藥哌唑嗪顯著降低了 TH mRNA和蛋白表達(dá)(P0.05 和 P0.01),以及 CeA 內(nèi) CRF mRNA 表達(dá)(P0.01);高劑量ZSASW明顯降低TH mRNA和蛋白表達(dá)(P0.01或P0.05),只降低 CRFR1蛋白(P0.05)和 CeA 內(nèi) CRF mRNA 表達(dá)(P0.01);低劑量ZSASW明顯降低CeA內(nèi)CRF mRNA(P0.01)表達(dá)。二、基于LC-NA神經(jīng)系統(tǒng)的朱砂安神丸改善PTSD大鼠睡眠障礙的神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制研究對(duì)大鼠尿液中皮質(zhì)酮水平研究發(fā)現(xiàn)與假操作組相比,模型組大鼠暗相尿液中的CORT水平顯著升高(P0.05);明相CORT變化不明顯。與空白對(duì)照組相比,模型組大鼠LC內(nèi)的TH mRNA和蛋白表達(dá)均明顯增強(qiáng)(P0.01),PVN內(nèi)CRF mRNA和蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)(P0.05)。與模型組比較,陽(yáng)性藥哌唑嗪使LC內(nèi)的TH mRNA和蛋白表達(dá)明顯下降(P0.05和P0.01),同時(shí)PVN內(nèi)CRF蛋白表達(dá)明顯下降(P0.05);高劑量ZSASW明顯降低TH mRNA和蛋白表達(dá)(P0.01),使PVN內(nèi)CRF蛋白表達(dá)明顯下降(P0.05)。結(jié)論:1、朱砂安神丸可以增強(qiáng)恐懼消退記憶的保持,提高恐懼消退的效率。2、朱砂安神丸有改善PTSD大鼠睡眠障礙的作用。3、朱砂安神丸改善PTSD大鼠恐懼消退障礙的作用一方面是由于藥物下調(diào)LC內(nèi)的CRFR1水平,同時(shí)又減弱了 CeA內(nèi)CRF mRNA表達(dá),最終減弱了 CRF對(duì)LC的興奮作用,從而下調(diào)了 LC-NA的神經(jīng)功能,使恐懼表達(dá)(僵直)減少;另一方面,由于朱砂安神丸改善大鼠睡眠的作用,有利于消退記憶的鞏固,改善了 PTSD大鼠的場(chǎng)景恐懼消退障礙。4、朱砂安神丸改善PTSD大鼠睡眠障礙的作用與下調(diào)LC-NA神經(jīng)功能有關(guān),而LC-NA的上游調(diào)節(jié)機(jī)制可能與藥物降低了 PVN內(nèi)CRF表達(dá)有關(guān)。
【圖文】：

數(shù)據(jù)用于統(tǒng)計(jì)分析。逡逑３．４實(shí)驗(yàn)流程逡逑實(shí)驗(yàn)流程如圖１所示，，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物暴露于ＳＰＳ應(yīng)激當(dāng)日（即模型逡逑復(fù)制當(dāng)日）設(shè)為第０天，ＳＰＳ應(yīng)激步驟如３．４項(xiàng)下所示。假操作組逡逑動(dòng)物除不暴露于ＳＰＳ應(yīng)激外，其它的操作均與余下四組相同（如離逡逑開通風(fēng)籠相同的時(shí)間，對(duì)動(dòng)物進(jìn)行捉拿和捏持等）。第８日起開始逡逑藥物干預(yù)，共給藥６次，每日一次灌胃給藥，給藥時(shí)間在１９：邋００－１９：逡逑４０之間。第１２日進(jìn)行恐懼習(xí)得訓(xùn)練，各組大鼠均接受足底電刺激，逡逑電刺激參數(shù)和時(shí)間設(shè)置如３．６．１項(xiàng)中所示。第１３日各組大鼠進(jìn)行消逡逑退訓(xùn)練，消退訓(xùn)練方法如３．６．２項(xiàng)中所示。第１４日所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均逡逑４１逡逑

表１朱砂安神丸對(duì)大鼠場(chǎng)景恐懼習(xí)得的影響（３＾邋±邋Ｓ邋）逡逑Ｇｒｏｕｐ邐ＦＳ邐１邐ＦＳ邋２邐ＦＳ邋３邐ＦＳ邋４邐ＦＳ邋５逡逑Ｓｈａｍ邐１６．３６邋＋邋８．９９邐３５．８７邋＋邐７１．５邋１邋±邐７８．２３邋＋邋９．３邋１邐６４．３５邋＋逡逑１６．１１邐１８．３３邐１７．１５逡逑Ｍｏｄｅｌ邐２０．２０邋＋邐４３．５９邋＋邐７８．３２邋＋邐８１．７邋１邋＋邐７０．５９邋＋逡逑１２．６７邐１４．３３邐１５．４２邐１４．４７邐１９．３４逡逑Ｈｉｇｈ邐１７．７０邋＋邋８．６６邐４１，６５邋＋邐７５．５７邋＋邐８０．６５邋＋邐７２．９５邋＋逡逑１４．３５邐１２．０４邐１６．６２邐１０．５６逡逑Ｌｏｗ邐１９．６８邋＋邋９．４３邐４３．５２邋＋邐６８．９６邋＋邐８２．２７邋＋邐７４．９５邋＋逡逑１７．６３邐１１．５１邐１８．３９邐１７．５１逡逑ｐｒａｚｏｓｉｎ邐２１．１３邋＋邐４９．９４邋＋邐６１．４２邋＋邐６８．６４邋＋邐６１．３７邋＋逡逑邐１２．６９邐１６．３７邐１２．３９邐２０．１７邐２０．６５逡逑注：ＦＳｌ？ＦＳ５代表５個(gè)獨(dú)立的觀察單元。逡逑客＇逡逑？？．
【學(xué)位授予單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

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1 李海燕;;朱砂安神丸的方藥配伍分析與臨床應(yīng)用[J];中國(guó)醫(yī)藥指南;2009年18期

2 李天杰;朱砂安神丸臨床運(yùn)用舉隅[J];四川中醫(yī);1986年09期

3 李鐘文,董桂蘭,蔣傳富,盛展能,熊少希;朱砂及朱砂安神丸鎮(zhèn)心安神功效的研究[J];中國(guó)中藥雜志;1993年07期

4 ;朱砂安神丸的藥理研究[J];江蘇中醫(yī);1995年12期

5 陳建明;錢e

本文編號(hào)：2545589