本文選題：ERLIN1 + microRNA�。� 參考：《鄭州大學》2017年博士論文

【摘要】：目的:乳腺癌是全世界婦女中最常見的惡性腫瘤,其發(fā)生率大約占所有惡性腫瘤的23%,其腫瘤相關(guān)性死亡率高達14%。乳腺癌中,超過90%為導管型和小葉型乳腺癌。多項研究表明,乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程非常復雜,其過程涉及到多基因參與和多步驟完成。乳腺癌細胞中許多基因表達水平及產(chǎn)物活性發(fā)生了改變,例如參與其過程中的微小RNA(microRNA,mi RNA)。miRNA是一類非編碼RNA,其長度約為20nt,可以特異性抑制序列翻譯或降解其下游調(diào)控的mRNA來調(diào)節(jié)基因的表達情況和水平,從而參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸過程。有研究表明,miRNA可以調(diào)節(jié)多種生命過程,包括生長發(fā)育、凋亡、造血細胞分化和脂肪代謝等。同時,多種miRNA參與調(diào)控乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程,直接或間接影響相關(guān)的分子信號通路,從而發(fā)揮正向或者負向的調(diào)節(jié)乳腺癌進程作用。因此,明確miRNA的調(diào)節(jié)作用和相關(guān)機制,可為乳腺癌惡的診治提供理論依據(jù)。ERLIN1屬于一個大的蛋白質(zhì)家族,這個蛋白家族的成員擁有進化上保守的stomatin/prohibitin/flotillin/HflK/C(SPFH)結(jié)構(gòu)域。這種含有SPFH結(jié)構(gòu)域的蛋白定位于擁有共同特征的一類膜上。ERLIN1及其同源物ERLIN2定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜的脂肪區(qū)域,彼此相互作用可以形成功能復合物。在一項對人乳腺癌標本的研究中發(fā)現(xiàn)在28%的乳腺癌病人中ERLIN1區(qū)域的表達增高。最近,人類遺傳研究發(fā)現(xiàn)ERLIN1基因突變與兒童期神經(jīng)元疾病相關(guān)。這類疾病以兒童下肢進行性無力、痙攣和智力障礙有關(guān)。然而,ERLIN1在多種病理生理學過程中的作用和機制仍然知之甚少。本課題,著重研究乳腺癌中是否有miRNA可以直接調(diào)控ERLIN1的表達并發(fā)揮相應的功能。方法:1、我們在乳腺癌細胞系MCF-7和T47D中通過CCK-8實驗、集落形成實驗、Transwell遷移實驗、Transwell侵襲實驗和流式細胞術(shù)實驗驗證ERLIN1對細胞增殖、遷移及侵襲能力的影響。2、我們通過生物信息學方法,篩選出可以靶定ERLIN1的miR-410作為研究對象,并利用熒光報告載體實驗,實時定量PCR和Western Blot技術(shù)驗證miR-410對ERLIN1的直接調(diào)控作用。3、實時定量PCR和Western Blot檢測了5種乳腺癌細胞和20對乳腺癌組織及其癌旁正常組織中miR-410和ERLIN1的表達。4、我們在乳腺癌細胞系MCF-7和T47D中通過CCK-8實驗、集落形成實驗、Transwell遷移實驗、Transwell侵襲實驗和流式細胞術(shù)實驗驗證miR-410對細胞增殖、遷移及侵襲能力的影響。結(jié)果:1、敲降ERLIN1抑制MCF-7和T47D細胞的生長、遷移及侵襲能力,促進細胞凋亡。在MCF-7和T47D細胞中,CCK-8檢測得到NC組OD450nm的值分別為0.875±0.053和0.961±0.042,shR-ERLIN1組OD450nm的值分別為0.325±0.050(p=0.0013)和0.417±0.049(p=0.0015);克隆形成實驗得到NC組克隆形成數(shù)分別為672±29和771±32,shR-ERLIN1組克隆形成數(shù)分別為436±17(p=0.023)和414±17(p=0.019);Transwell遷移實驗得到NC組轉(zhuǎn)移細胞數(shù)分別為327±12和178±24,shR-ERLIN1組轉(zhuǎn)移細胞數(shù)分別為128±25(p=0.015)和80±9(p=0.014)。2、mi R-410可以直接靶定ERLIN1。我們根據(jù)生物學信息軟件:targetscan,microrna,pictar預測ERLIN1上游的潛在性miRNA。熒光定量PCR和Western Blot結(jié)果表明,在MCF-7細胞中,miR-410可以顯著抑制系ERLIN1表達水平(p=0.0110;p=0.0090)。雙熒光報告載體實驗驗證ERLIN1是miR-410的直接靶基因。3、乳腺癌細胞和臨床組織中mi R-410和ERLIN1的表達mi R-410在MCF-7細胞中表達最高,ERLIN1在MCF-7細胞中表達最低;miR-410在T47D細胞中表達最低,ERLIN1在T47D細胞中表達最高。臨床組織中,與癌旁正常組織相比miR-410 mRNA的表達明顯降低,而ERLIN1的mRNA表達明顯升高。4、miR-410抑制MCF-7和T47D細胞的生長、遷移及侵襲能力,促進細胞凋亡。在MCF-7和T47D細胞中,CCK-8檢測得到ASO-NC組OD450nm的值分別為0.901±0.013和0.948±0.061,ASO-miR-410組OD450nm的值分別為1.450±0.034(p=0.0014)和0.489±0.017(p=0.0043);克隆形成實驗得到ASO-NC組克隆形成數(shù)分別為178±18和414±17,ASO-miR-410組克隆形成數(shù)分別為452±28(p=0.020)和171±12(p=0.021);Transwell遷移實驗得到ASO-NC組轉(zhuǎn)移細胞數(shù)分別為120±1和126±1,ASO-miR-410組轉(zhuǎn)移細胞數(shù)分別為262±1(p=0.012)和62±2(p=0.0082)。結(jié)論:1.ERLIN1可以促進乳腺癌細胞的活性及增殖能力,抑制細胞凋亡,同時促進乳腺癌細胞的遷移和侵襲能力。2.miR-410對ERLIN1的表達有直接負調(diào)控作用3.5種不同乳腺癌細胞系中,miR-410表達最高的細胞系(MCF-7)中ERLIN1表達最低,且miR-410表達最低的細胞系(T47D)中ERLIN1表達又最高;臨床組織中,與癌旁正常組織相比miR-410 mRNA的表達明顯降低,而ERLIN1的mRNA表達明顯升高;4.miR-410可以減弱乳腺癌細胞的活性及增殖能力,促進細胞凋亡,同時抑制乳腺癌細胞的侵襲和遷移。綜上所述,miR-410通過抑制細胞生長、遷移和侵襲能力在乳腺癌中扮演一個抑癌miRNA的角色,ERLIN1是其下游靶基因,以上結(jié)果為理解乳腺癌發(fā)生發(fā)展的分子生物學機制增添了新的視野和思路,為乳腺癌的臨床靶向治療等奠定了一定的理論基礎。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

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本文編號：1742753