本文選題：原發(fā)性輕鏈型淀粉樣變 + 全外顯子組測序�。� 參考：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2017年博士論文

【摘要】：背景和目的原發(fā)性輕鏈型淀粉樣變(pAL)是一種免疫球蛋白輕鏈沉積在各個(gè)組織器官內(nèi)造成多器官損害的單克隆漿細(xì)胞病。臨床表現(xiàn)取決于受累器官,可包括限制性心肌病、腎病綜合征、肝功能衰竭和自主神經(jīng)病變等。目前已知pAL主要是亞單位蛋白質(zhì)發(fā)生了構(gòu)象改變所致,但發(fā)生構(gòu)象改變的機(jī)制依舊不明。二代測序技術(shù)(Next generation sequencing)以其高通量、高時(shí)效和低成本三大特點(diǎn),開始越來越多地應(yīng)用于臨床研究。對于血液系統(tǒng)腫瘤,尤其是罕見病種,尋找其腫瘤細(xì)胞特異性的基因突變,進(jìn)而進(jìn)行診斷及治療研究,已經(jīng)成為該領(lǐng)域的重要研究手段。但是,目前pAL的基因譜及相應(yīng)基因突變與臨床相關(guān)性方面都還缺乏系統(tǒng)的研究。材料與方法收集2015年12月至2017年5月在北京協(xié)和醫(yī)院確診為pAL的初治患者48例,收集患者骨髓標(biāo)本和外周血標(biāo)本,并隨訪收集患者的臨床資料。采用CD138免疫磁珠分選得到純化的骨髓漿細(xì)胞,再使用DNA Kit提取骨髓漿細(xì)胞和外周血單個(gè)核細(xì)胞DNA,以自身外周血作為正常對照,對10例pAL患者進(jìn)行全外顯子組測序。篩選出高頻突變基因和已知驅(qū)動基因,同時(shí)結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)告過的pAL相關(guān)突變基因建立靶向基因譜。之后,擴(kuò)大樣本量對48例pAL患者的骨髓漿細(xì)胞進(jìn)行靶向基因測序。通過比較基因突變數(shù)量和不同基因的突變情況來探索pAL基因譜與臨床特征的相關(guān)性。采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,當(dāng)p0.05時(shí)認(rèn)為存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果本研究對10例患者進(jìn)行全外顯子組測序,共檢測到3307個(gè)SNVs,外顯子編碼區(qū)占14.3%,其中非同義突變占69.5%(錯(cuò)義突變63.6%,stopgain5.5%,stoploss 0.4%)。這10例患者骨髓漿細(xì)胞樣本的平均每Mbp堿基發(fā)生非同義突變數(shù)為:1.22(0.15-3.08)Mutations/Mb。當(dāng)FDR值0.2,共得到12個(gè)高頻突變基因,其中有4個(gè)影響NF-κB信號通路,包括DUSP2,NFKBIA,KRAS,BIRC3,證明NF-κB信號通路可能在pAL發(fā)病機(jī)制中具有重要作用。綜合全外顯子組測序的結(jié)果,篩選FDR值1,我們得到出52個(gè)高頻突變基因和17個(gè)已知驅(qū)動基因,并通過查閱文獻(xiàn)篩選出29個(gè)已在pAL中報(bào)道過的突變基因,建立了共含98個(gè)基因的靶向基因譜。進(jìn)一步對48例患者進(jìn)行了上述98個(gè)基因的靶向測序,得到133個(gè)單核苷酸變異(SNVs)和20個(gè)插入/缺失突變(InDel)。48例患者中有41例患者(85%)存在至少一個(gè)SNVs或者InDel�？傮w突變頻率較低,平均每個(gè)患者的突變個(gè)數(shù)為3(0-13)個(gè)。共檢測出70個(gè)突變基因。IGLL5是最常見的突變基因(17%),其次是ASCC3(15%),還有14例患者(29.2%)存在NF-κB信號通路相關(guān)基因的突變。高危組(Mayo2012分期3期和4期)患者的平均基因突變個(gè)數(shù)明顯高于低危組(Mayo2012 分期 1 期和 2 期)患者(3.8±0.5 vs2.1±0.5 個(gè),p=0.021)�？偵嫫�(OS)與基因突變的數(shù)量呈負(fù)相關(guān),存在4個(gè)或以上突變的患者的預(yù)計(jì)1年存活率為52.1%,而不足4個(gè)突變的患者的預(yù)計(jì)1年生存率為90.4%(p= 0.005)。當(dāng)與Mayo 2012分期(曲線下面積AUC=0.870)相比時(shí),綜合測序結(jié)果的預(yù)后模型增加了預(yù)測潛力(AUC=0.915)。研究還發(fā)現(xiàn)pAL中存在4個(gè)重復(fù)突變:ASB15(c.844CT)、ASCC3(c.1595AG)、HIST1H1E(c.311CT)、和KRAS(c.35 GA)。預(yù)后分析表明存在ASB15或HIST1H1E突變患者的預(yù)后不良(p0.05)。結(jié)論pAL骨髓漿細(xì)胞的總體突變頻率較低。基因突變數(shù)量與患者的預(yù)后呈負(fù)相關(guān),當(dāng)基因突變個(gè)數(shù)≥4個(gè)時(shí),其預(yù)后明顯更差。綜合基因突變數(shù)量與Mayo2012分期的預(yù)后模型具有更高的預(yù)測價(jià)值。高頻突變基因中存在4個(gè)與NF-κB信號通路相關(guān)基因(DUSP2、NFKBIA、KRAS、和BIRC3),提示NF-κB信號通路的激活可能與pAL的發(fā)病機(jī)制相關(guān)。研究還發(fā)現(xiàn)了 4個(gè)重復(fù)突變基因:ASB15、ASCC3、HIST1H1E、KRAS,其中存在ASB15、HIST1H1E突變患者預(yù)后不佳。
[Abstract]:BACKGROUND & OBJECTIVE : Primary light chain amyloid ( pAL ) is a kind of monoclonal plasma cell disease caused by multiple organ damage in various tissues and organs . The clinical manifestation depends on the affected organs , including restrictive cardiomyopathy , nephrotic syndrome , liver function failure and autonomic neuropathy . A total of 12 high - frequency mutational genes were obtained in 48 patients . Overall survival ( OS ) was negatively correlated with the number of mutations , with an estimated 1 - year survival rate of 52.1 % for patients with 4 or more mutations , compared with 90.4 % for patients with less than 4 mutations ( p = 0.005 ) . The prognostic model of the combined sequencing results increased the predictive potential ( AUC = 0.915 ) when compared to the Mayo 2012 stage ( AUC = 0.870 under the curve ) . The study also found that there were four repeat mutations in pAL : ASB15 ( c.844CT ) , ASCC3 ( c.1595AG ) , HISTH1E ( c.311CT ) , as well as that of ( c.35 GA ) . The prognosis analysis showed that there were poor prognosis in patients with ASB15 or HISTH 1E mutation ( p < 0.05 ) . Conclusion The number of mutations in pAL is correlated with the prognosis of patients . There are four genes associated with NF - 魏B signaling pathway ( DUSP2 , NFKBIA , WRI , and BIRC3 ) , suggesting that the activation of NF - 魏B signaling pathway may be associated with the pathogenesis of pAL . Four repeat mutation genes , ASB15 , ASCC3 , HISTH1E , are also found , among which ASB15 , HISTH1E mutation patients have poor prognosis .

【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R597.2

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本文編號：1740454