本文選題：極低頻電磁場(chǎng)　切入點(diǎn)：生殖毒性　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：研究背景:現(xiàn)代社會(huì),人們廣泛暴露于由生產(chǎn)、傳輸和使用電能而產(chǎn)生的極低頻電磁場(chǎng)(ELF-EMF),其對(duì)人體健康的潛在危害已引起科學(xué)界和公眾的普遍擔(dān)憂。由于雄性生殖器官對(duì)環(huán)境有害因素非常敏感,男性不育人群逐漸增加,因此ELF-EMF暴露對(duì)雄性生殖健康的影響成為了關(guān)注熱點(diǎn)。然而,目前流行病學(xué)以及實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果還不一致,ELF-EMF暴露是否誘導(dǎo)雄性生殖毒性還未定論。研究表明,雄性生殖細(xì)胞DNA損傷引起的遺傳毒性可能是ELF-EMF暴露導(dǎo)致雄性生殖障礙的原因之一。精子發(fā)生是精子細(xì)胞從精原干細(xì)胞分化增殖為精子的過(guò)程,在雄性生殖中起重要作用,但目前ELF-EMF暴露對(duì)精子發(fā)生的研究甚少。研究?jī)?nèi)容:①細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ELF-EMF暴露的遺傳毒性:將小鼠精母細(xì)胞來(lái)源的細(xì)胞株GC-2細(xì)胞間歇(5分鐘開(kāi)10分鐘關(guān))暴露于極低頻電磁場(chǎng)(50 Hz,1,2,3 mT)24小時(shí),每組都有相對(duì)應(yīng)的假暴露組。用CCK-8法檢測(cè)ELF-EMF暴露對(duì)細(xì)胞活力的影響以及延遲效應(yīng);用堿性彗星實(shí)驗(yàn)檢測(cè)DNA鏈斷裂;用γH2AX免疫熒光法觀察統(tǒng)計(jì)γH2AX焦點(diǎn)形成,檢測(cè)DNA雙鏈斷裂;用FPG-修飾彗星實(shí)驗(yàn)檢測(cè)氧化性DNA堿基損傷。為了保證實(shí)驗(yàn)程序正確無(wú)誤,每個(gè)實(shí)驗(yàn)都設(shè)陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照,其中CCK-8法和彗星實(shí)驗(yàn)用H2O2作為陽(yáng)性對(duì)照,γH2AX免疫熒光法用依托泊苷作為陽(yáng)性對(duì)照,培養(yǎng)在普通培養(yǎng)箱中的細(xì)胞作為陰性對(duì)照。所有實(shí)驗(yàn)至少獨(dú)立重復(fù)三次。②動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ELF-EMF暴露對(duì)精子發(fā)生的影響:將雄性成年SD大鼠(8周齡)全身暴露于極低頻電磁場(chǎng)(50 Hz,500μT)4周和8周,每天暴露4小時(shí),每周暴露7天,假暴露組大鼠置于同樣暴露裝置但開(kāi)關(guān)關(guān)閉。暴露期間,每周監(jiān)測(cè)一次大鼠體重。暴露結(jié)束后,稱取睪丸、附睪重量;心臟取血離心收集血清檢測(cè)血液睪酮水平;收集附睪尾精子,計(jì)數(shù)總精子和分析畸形精子百分比;用HE染色法觀察睪丸組織形態(tài)學(xué)變化,分析生精小管直徑和損傷生精小管所占百分比;用PAS-H染色法觀察睪丸生精上皮各期變化,分析生精上皮14個(gè)期各期所占百分比;用染色質(zhì)擴(kuò)散方法,SCP3和γH2AX免疫熒光,分析精母細(xì)胞第一次減數(shù)分裂四期所占百分比;用TUNEL法檢測(cè)生殖細(xì)胞凋亡情況;用比色法檢測(cè)睪丸組織SOD、CAT活性和MDA含量,評(píng)估睪丸氧化應(yīng)激水平。研究結(jié)果:①細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),GC-2細(xì)胞暴露于較高強(qiáng)度的ELF-EMF 24小時(shí)后,與假暴露組相比,細(xì)胞活力沒(méi)明顯降低,堿性彗星實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞暴露于3 mT ELF-EMF顯著增加DNA損傷四個(gè)參數(shù)(彗星尾部DNA%、尾長(zhǎng)、尾距和Olive尾距)值,γH2AX焦點(diǎn)形成也顯著增加,表明DNA鏈斷裂,但任何強(qiáng)度ELF-EMF暴露都不能引起氧化性DNA堿基損傷。②動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),雄性SD大鼠暴露于職業(yè)限值水平的ELF-EMF 4周和8周后,與假暴露組相比,大鼠體重增加、睪丸和附睪絕對(duì)重量以及相對(duì)重量均無(wú)明顯增加;盡管精子數(shù)目和畸形精子率有所增加,睪酮水平先升后降,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;睪丸形態(tài)基本正常,生精小管直徑和損傷小管百分比沒(méi)有顯著變化;精母細(xì)胞第一次減數(shù)分裂四期(細(xì)線期、偶線期、粗線期和雙線期)以及生精上皮14個(gè)分期各期所占百分比沒(méi)有明顯變化;睪丸SOD、CAT活性和MDA含量也無(wú)顯著變化�？傊�,ELF-EMF暴露不影響精子發(fā)生,未引起雄性大鼠生殖毒性。研究結(jié)論:本研究以雄性生殖細(xì)胞DNA損傷和精子發(fā)生過(guò)程為切入點(diǎn),分別從體外細(xì)胞和整體動(dòng)物兩個(gè)水平探討了ELF-EMF暴露的雄性生殖毒性效應(yīng)。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)3 mT ELF-EMF急性暴露在不引起DNA堿基損傷的情況下導(dǎo)致DNA鏈斷裂,但不影響細(xì)胞行為,提示ELF-EMF暴露可能引起一定的生殖毒性。在體動(dòng)物暴露于職業(yè)限值水平(500μT)ELF-EMF 4周和8周,大鼠精子質(zhì)量、精子發(fā)生過(guò)程未發(fā)生顯著改變,未能檢測(cè)到生殖細(xì)胞凋亡和睪丸組織氧化應(yīng)激反應(yīng),表明在該暴露條件下低強(qiáng)度ELF-EMF無(wú)明顯的生殖毒性。以上研究結(jié)果為深入認(rèn)識(shí)ELF-EMF的雄性生殖效應(yīng)提供了新的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R114

【參考文獻(xiàn)】

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1 IzzetKo噻ak,MehmetDündar,Mine Hekimgil,Pinar Okyay;Assessment of germ cell apoptosis in cryptorchid rats[J];Asian Journal of Andrology;2002年03期

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本文編號(hào)：1712665