本文選題：TIP30　切入點：抑癌基因　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：研究背景和目的膀胱腫瘤(bladdercancer,BC)是世界上最常見的惡性腫瘤之一,74%的膀胱腫瘤初診時都是淺表性膀胱腫瘤[1]。目前對于淺表性膀胱癌的治療主要包括手術(shù)加術(shù)后膀胱內(nèi)化療,但是大部分患者仍然出現(xiàn)復(fù)發(fā)及進展,直至進入腫瘤晚期,而對于晚期膀胱愛,目前缺乏有效的治療手段。因此尋找新的有用的膀胱腫瘤治療手段以提高治療效果具有非常重要的臨床意義。TIP30基因是一種抑癌基因[2]。文獻證實TIP30在多種惡性腫瘤中表達水平下降,如肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌和肝細胞癌等[2-12]。上調(diào)TIP30可以抑制多種腫瘤細胞生長,促進腫瘤細胞凋亡,抑制腫瘤血管形成及轉(zhuǎn)移[3,4,13,14]。目前國內(nèi)有研究發(fā)現(xiàn)TIP30蛋白在膀胱腫瘤中低表達,但具體機制未有研究,且國內(nèi)外均無相關(guān)的文獻報道。因此探索TIP30在膀胱腫瘤的發(fā)生發(fā)展中的作用及機制,有望為膀胱腫瘤的基因治療提供實驗依據(jù)。方法:1.用免疫組化檢測TIP30在膀胱腫瘤和正常膀胱黏膜中的表達,分析TIP30表達強度與患者多項臨床病理參數(shù)的關(guān)系,分析TIP30的表達和無進展生存期和總生存期的關(guān)系。2.構(gòu)建載體過表達T24細胞中TIP30基因,檢測過表達后腫瘤細胞生長能力、細胞周期及膀胱腫瘤細胞遷移能力和侵襲能力。3.運用WB檢測過表達TIP30后EGFR/AKT信號傳導(dǎo)通路相關(guān)蛋白表達。統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS17.0行統(tǒng)計學(xué)分析,不同組間TIP30表達MOD值比較采用兩獨立樣本的t檢驗和單因素方差分析(One-Way ANOVA),多個樣本均數(shù)兩兩比較采用Dunnett T3法。生存分析采用Kaplan-Meier法,差異性檢驗采用log-rank法。采用多因素Cox回歸模型對影響患者預(yù)后的相關(guān)因素進行分析。檢驗水準α=0.05,P0.05認為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1.免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn),和正常組織相比,TIP30在膀胱腫瘤組織中的表達明顯下降。低級別(G1)組膀胱腫瘤組織中TIP30表達較高級別(G2+G3)組明顯下降。非肌層浸潤組TIP30的表達明顯高于肌層浸潤組。2.進展組患者TIP30的表達明顯低于非進展組。TIP30高表達組的總生存時間明顯高于低表達組,但兩組患者的無瘤生存時間無明顯差異。3.TIP30過表達后T24細胞中TIP30mRNA及TIP30蛋白表達均明顯上升,進而抑制細胞生長、誘導(dǎo)細胞周期G1期阻滯、誘導(dǎo)凋亡。Transwell侵襲及遷移能力檢測提示過表達TIP30基因能夠抑制T24細胞的侵襲和遷移能力。4.TIP30過表達后抑制EGFR/AKT的表達,促進Bax和P21表達上調(diào)及抑制Bcl2,cyclinD1和cyclinE的表達抑制T24細胞增殖周期,通過激活caspase3引起T24細胞凋亡。通過下調(diào)MMP2,6,9表達抑制T24細胞轉(zhuǎn)移。結(jié)論TIP30可能參與了膀胱腫瘤發(fā)生、發(fā)展。TIP30作為抑癌基因,可作為膀胱腫瘤治療的一個靶基因。TIP30在T24細胞中可能通過EGFR/AKT信號通路發(fā)揮抑癌作用。
[Abstract]:Background and objective bladder cancer BCis one of the most common malignant tumors in the world.At present, the treatment of superficial bladder cancer mainly includes surgery and postoperative intravesical chemotherapy, but most of the patients still have recurrence and progress until the advanced stage of the tumor, but for the late bladder love, there is a lack of effective treatment.Therefore, it is very important to find a new and useful therapy for bladder cancer in order to improve the therapeutic effect. TIP30 gene is a tumor suppressor gene [2].The literature confirmed that the expression of TIP30 decreased in many malignant tumors, such as lung cancer, breast cancer, colon cancer and hepatocellular carcinoma [2-12].Upregulation of TIP30 can inhibit the growth of many kinds of tumor cells, promote the apoptosis of tumor cells, and inhibit the angiogenesis and metastasis of tumor cells.At present, low expression of TIP30 protein in bladder tumors has been found in China, but the specific mechanism has not been studied, and there is no related literature report at home and abroad.Therefore, to explore the role and mechanism of TIP30 in the occurrence and development of bladder tumors, it is expected to provide experimental evidence for gene therapy of bladder tumors.Method 1: 1.The expression of TIP30 in bladder tumor and normal bladder mucosa was detected by immunohistochemistry. The relationship between the expression of TIP30 and several clinicopathological parameters was analyzed, and the relationship between TIP30 expression and progressive survival and total survival was analyzed.The TIP30 gene was overexpressed in T24 cells. The growth ability, cell cycle, migration ability and invasion ability of bladder tumor cells were detected.WB was used to detect the expression of EGFR/AKT signal transduction pathway associated protein after overexpression of TIP30.The MOD of TIP30 expression in different groups was compared with that of two independent samples by t-test and one-way ANOVAN analysis of variance, and the Dunnett T3 method was used to compare the mean of multiple samples.Kaplan-Meier method was used for survival analysis and log-rank method was used for difference test.Multivariate Cox regression model was used to analyze the related factors affecting the prognosis of patients.The test level was 0.05%, and the difference was statistically significant.Result 1.Immunohistochemical results showed that the expression of TIP30 in bladder neoplasms was significantly lower than that in normal tissues.The expression of TIP30 in low grade G 1 group was significantly lower than that in high grade G 2 G 3 group.The expression of TIP30 in non-myometrial infiltrating group was significantly higher than that in myometrial infiltration group.The expression of TIP30 in the advanced group was significantly lower than that in the non-progressive group. The total survival time of the high expression group of TIP30 was significantly higher than that of the low expression group. However, there was no significant difference in the tumor-free survival time between the two groups. 3. After overexpression of TIP30, the expression of TIP30mRNA and TIP30 protein in T24 cells increased significantly.The results showed that overexpression of TIP30 gene could inhibit the invasion and migration of T24 cells. 4. Overexpression of TIP30 could inhibit the expression of EGFR/AKT.Promote the up-regulation of Bax and P21 expression and inhibit the expression of Bcl-2 cyclin D1 and cyclinE to inhibit the proliferation of T24 cells, and induce the apoptosis of T24 cells by activating caspase3.By down-regulating the expression of MMP2 + 6 + 9, the metastasis of T 24 cells was inhibited.Conclusion TIP30 may be involved in the development of bladder tumor. TIP30, as a tumor suppressor gene, can be used as a target gene for the treatment of bladder cancer. TIP30 may play an inhibitory role in T24 cells through EGFR/AKT signaling pathway.
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.14

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本文編號：1700833