本文選題：紅參　切入點(diǎn)：24-OH-PD　出處：《吉林大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：本研究從紅參有效成分提取分離及結(jié)構(gòu)鑒定入手,分離獲得了兩個(gè)新的達(dá)瑪烷型三萜類化合物,對(duì)其中新化合物20(S)達(dá)瑪-20,25-環(huán)氧-3β,12β,24α-三醇,簡(jiǎn)稱24-OH-PD,開(kāi)展了體外抗癌活性和癌癥相關(guān)蛋白的計(jì)算機(jī)輔助分子對(duì)接及藥代動(dòng)力學(xué)研究。取得了以下創(chuàng)新性成果:1.從紅參中鑒定出2個(gè)達(dá)瑪烷型三萜類新化合物。對(duì)紅參的85%乙醇提取物進(jìn)行了分離,根據(jù)理化性質(zhì)、TLC對(duì)照、波譜解析(~1H-NMR、~(13)C-NMR、2D-NMR、MS)等技術(shù),從中鑒定了13個(gè)化合物,分別為:20(R)-人參皂苷Rh_1(1)、20(S),25(R)-達(dá)瑪-20,25-環(huán)氧-3β,2β,26,24β-四醇(2)、20(S)-原人參二醇(3)、20(S)-達(dá)瑪-20,25-環(huán)氧-3β,12β,24α-三醇(4)、20(S)-達(dá)瑪-20,25-環(huán)氧-3β,12β,24β-三醇(5)、20(R)-人參皂苷Rg3(6)、20(S),24(R)-達(dá)瑪-20,24-環(huán)氧-3α,12β,25-三醇(7)、20(R)-人參皂苷Rf(8)、20(S)-人參皂苷Rg3(9)、20(R)-人參皂苷Rg_2(10)、20(R)-人參皂苷Rg_1(11)、人參皂苷Rb_1(12)、人參皂苷Re(13)。其中化合物2和化合物4為新化合物,化合物5和化合物7為首次從紅參中分離得到。2.首次對(duì)新化合物24-OH-PD進(jìn)行了體外抗癌活性研究。采用MTT比色法和Cell Titer Glo?發(fā)光法細(xì)胞活力檢測(cè)法,研究了24-OH-PD對(duì)M14、MD-MBA-231、CCRF-CEM和Jeko-1四種腫瘤細(xì)胞的增殖影響;同時(shí)采用FITC-Annexin V/PI雙染法研究了24-OH-PD促進(jìn)癌細(xì)胞的凋亡作用;另外采用計(jì)算機(jī)對(duì)接技術(shù)探討了其作用機(jī)制及可能的活性靶點(diǎn)。研究結(jié)果表明,24-OH-PD對(duì)M14、MD-MBA-231、CCRF-CEM和Jeko-1等4種癌細(xì)胞均有很強(qiáng)的抑制作用和誘導(dǎo)凋亡活性,且呈時(shí)間、濃度依賴關(guān)系;通過(guò)對(duì)24-OH-PD與50個(gè)癌癥相關(guān)蛋白進(jìn)行計(jì)算機(jī)輔助對(duì)接研究,獲得18個(gè)成功的結(jié)果,初步對(duì)24-OH-PD的抑制癌細(xì)胞增殖、促進(jìn)其凋亡活性的作用機(jī)制進(jìn)行探討。3.首次建立了用于測(cè)定生物樣品中24-OH-PD含量的UPLC-MS/MS分析方法。依據(jù)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局對(duì)生物樣本分析方法學(xué)考核的指導(dǎo)原則,以人參三醇(PT)作為內(nèi)標(biāo),采用甲醇沉淀的方法對(duì)生物樣品進(jìn)行處理,并在流動(dòng)相中加入0.1%的甲酸以提高靈敏度,采用離子對(duì)(m/z)477.1→143.0(26-OH-PD),477.4→127.1(PT)作為檢測(cè)離子對(duì),具有良好的選擇性、靈敏度、穩(wěn)定性和準(zhǔn)確度,可用于對(duì)24-OH-PD的藥代動(dòng)力學(xué)研究。4.首次開(kāi)展了大鼠靜脈給予24-OH-PD的血藥動(dòng)力學(xué)研究。應(yīng)用建立的UPLC-MS/MS檢測(cè)分析方法,對(duì)大鼠靜脈注射給予2.5、5、10mg/kg劑量的24-OH-PD后的血藥動(dòng)力學(xué)進(jìn)行研究。數(shù)據(jù)經(jīng)DAS3.0軟件處理后,獲得其藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明給予大鼠2.5-10 mg/kg24-OH-PD后,藥物迅速進(jìn)入體循環(huán),Cmax為3316.86±517.39~8577.11±2792.83μg/L;T_(1/2)為4.82±1.99~5.45±1.83 h,無(wú)劑量依賴關(guān)系;CL為0.44±0.05~0.76±0.61 L/h/kg;而V為3.09±0.89~6.59±7.66 L/kg。5.分析了24-OH-PD與大鼠的血漿蛋白結(jié)合率。建立了血漿和透析液中24-OH-PD的UPLC-MS/MS檢測(cè)分析方法,用平衡透析法對(duì)24-OH-PD與大鼠的血漿蛋白結(jié)合率進(jìn)行了研究。結(jié)果表明24-OH-PD在200~2000ng/m L范圍內(nèi)與大鼠血漿蛋白結(jié)合率為88.10±9.10%~92.30±2.40%,與濃度無(wú)明顯依賴關(guān)系,24-OH-PD與大鼠血漿蛋白結(jié)合率較高。6.開(kāi)展了大鼠靜脈給予24-OH-PD的組織分布研究。建立了大鼠各組織中24-OH-PD的UPLC-MS/MS檢測(cè)分析方法,對(duì)大鼠靜脈注射給予5mg/kg劑量的24-OH-PD之后0.25h、1h、3h、5h的組織分布情況進(jìn)行研究。研究表明,大鼠靜脈注射5.0mg/kg 24-OH-PD能夠快速分布到各組織中,0.25h已達(dá)到高峰,總的分布量從高到低依次為肺、肝、腎、子宮、脾、睪丸、心臟、腸道、胃、肌肉、脂肪,在組織中清除較快,3h除胃外臟器內(nèi)的原型藥物分布量已下降90%,表明24-OH-PD在各組織中均不產(chǎn)生蓄積。7.開(kāi)展了大鼠靜脈給予24-OH-PD的排泄研究。建立了尿液和糞樣中24-OH-PD的UPLC-MS/MS檢測(cè)分析方法,對(duì)大鼠靜脈注射給予5mg/kg劑量的24-OH-PD不同時(shí)間段的排泄情況進(jìn)行研究。結(jié)果表明,靜脈注射后尿液和糞樣中原型藥物的排出速率均在8-12h時(shí)達(dá)到最大,給藥96h內(nèi),有0.0018±0.0013%的原形藥物經(jīng)尿液排出,有1.3844±0.3878%的原形藥物經(jīng)糞便排出。可以看出靜脈注射給藥后24-OH-PD以原形藥物排出的量是極少的,表明24-OH-PD進(jìn)入體內(nèi)后被代謝成為其他產(chǎn)物排出。8.首次開(kāi)展了大鼠靜脈給予24-OH-PD的代謝研究。采用UPLC-Q-TOF-MS高分辨液質(zhì)聯(lián)用儀,對(duì)大鼠靜脈注射給予5.0mg/kg24-OH-PD的血漿、尿液和糞樣中代謝產(chǎn)物進(jìn)行了研究,應(yīng)用Waters Unifi科學(xué)信息系統(tǒng)進(jìn)行分析。研究結(jié)果表明,24-OH-PD在體內(nèi)代謝過(guò)程中同時(shí)存在I相代謝和II相代謝過(guò)程。最終檢測(cè)到原型藥物在內(nèi)的24個(gè)代謝產(chǎn)物,代謝途徑包括脫羥基、脫水、去甲基、甲基化、羥基化、硫酸化、磷酸化、乙酰基化和葡萄糖醛酸化等。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R284.1

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