本文選題：ASPP2　切入點(diǎn)：Sirt1　出處：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：癌癥從根本上來(lái)說(shuō)是細(xì)胞的異常生長(zhǎng)與增殖,其通過(guò)充足的能量和豐富的物質(zhì)供應(yīng)來(lái)滿足自身需要,因此癌癥在物質(zhì)能量代謝方面,如糖代謝、脂質(zhì)代謝和蛋白質(zhì)代謝,發(fā)生了一定程度的改變。最為著名的便是葡萄糖代謝的溫伯格效應(yīng)(the Warburg effect),即腫瘤細(xì)胞利用葡萄糖的無(wú)氧酵解生產(chǎn)自身所需的小分子物質(zhì)來(lái)代替完全氧化成為二氧化碳[1]。然而其他的代謝途徑,如蛋白質(zhì)、核酸、脂質(zhì)代謝,在腫瘤中也得到增強(qiáng)[2]。多數(shù)成年哺乳動(dòng)物組織通過(guò)從血液中攝取游離脂肪酸(FFA)、脂蛋白,如低密度脂蛋白(LDL)來(lái)滿足他們自身對(duì)脂質(zhì)的需求。脂肪酸(FA)與膽固醇生物合成被限制在一小部分特定組織中,如肝、脂肪和哺乳期乳腺組織。然而,在腫瘤組織中經(jīng)�？梢杂^測(cè)到活躍的脂類(lèi)物質(zhì)的生物合成[3]。因此,在過(guò)去幾年里,人們?cè)絹?lái)越多地關(guān)注脂質(zhì)代謝在腫瘤中的作用與其調(diào)控作用。p53凋亡刺激蛋白(Apoptosis Stimulating Proteins of P53,ASPP)是一類(lèi)蛋白家族的總稱(chēng),其由ASPP1、ASPP2和iASPP三種蛋白組成,這類(lèi)蛋白的主要功能是調(diào)控腫瘤細(xì)胞的凋亡。其中ASPP1與ASPP2可以和經(jīng)典的p53分子結(jié)合,增強(qiáng)其與下游靶基因啟動(dòng)子結(jié)合,進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[4]。p53凋亡刺激蛋白家族都含有三部分結(jié)構(gòu),目前研究最為清楚的一部分位于C端,由重復(fù)的錨蛋白序列、SH3結(jié)構(gòu)域和含有脯氨酸的結(jié)構(gòu)域組成,而上述的促凋亡功能則由這部分結(jié)構(gòu)發(fā)揮作用。在本組之前的研究中發(fā)現(xiàn),ASPP2分子在HBV陽(yáng)性的肝癌細(xì)胞系中啟動(dòng)子內(nèi)DNA甲基化水平發(fā)生改變,進(jìn)而使其表達(dá)水平降低;通過(guò)調(diào)控肝癌細(xì)胞的凋亡水平,ASPP2分子可以影響肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)[5]。之后我們發(fā)現(xiàn)ASPP2分子與肝癌脂質(zhì)代謝密切相關(guān),但其具體作用機(jī)制并不清楚,本課題將針對(duì)ASPP2在肝癌細(xì)胞脂代謝中的作用做深入研究。本課題旨在研究ASPP2分子在脂滴與膽固醇兩種代謝途徑的作用及作用機(jī)制。在肝癌細(xì)胞HCC-LM3中,我們先利用shRNA慢病毒干擾沉默ASPP2的表達(dá),通過(guò)基因芯片大數(shù)據(jù)分析,發(fā)現(xiàn)ASPP2對(duì)HCC-LM3腫瘤細(xì)胞的多條信號(hào)通路都產(chǎn)生作用。這些信號(hào)通路幾乎包含了腫瘤生長(zhǎng)的全部通路,其中以脂質(zhì)代謝的多條信號(hào)通路變化尤其明顯,在這些脂質(zhì)代謝通路中,我們著重探究ASPP2在脂滴代謝以及膽固醇代謝通路中的作用。首先,在脂滴代謝中,我們?cè)隗w外通過(guò)shRNA慢病毒干擾沉默ASPP2的表達(dá),發(fā)現(xiàn)肝癌細(xì)胞中脂滴水平下降,為了進(jìn)一步探討ASPP2對(duì)脂滴作用的具體機(jī)制,我們通過(guò)查詢(xún)數(shù)據(jù)庫(kù)及預(yù)測(cè)蛋白結(jié)合的網(wǎng)站,推測(cè)ASPP2分子可能與Sirt1分子結(jié)合,通過(guò)細(xì)胞內(nèi)定位和蛋白質(zhì)免疫共沉淀,我們證明ASPP2分子與Sirt1分子發(fā)生結(jié)合,并發(fā)現(xiàn)兩者對(duì)脂滴產(chǎn)生協(xié)同作用。其次,在膽固醇代謝通路中,我們通過(guò)shRNA慢病毒干擾沉默ASPP2的表達(dá),發(fā)現(xiàn)肝癌細(xì)胞中膽固醇水平上升,與此同時(shí),肝癌細(xì)胞的干性特征增強(qiáng),而膽固醇代謝通路抑制劑辛伐他汀(Simvastatin)可以抑制ASPP2沉默誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞干性特征。在體內(nèi)裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)中,膽固醇代謝通路抑制劑辛伐他汀(Simvastatin)同樣可以有效抑制下調(diào)ASPP2所引起肝癌生長(zhǎng)。通過(guò)基因芯片結(jié)果發(fā)現(xiàn)膽固醇合成代謝通路中一系列關(guān)鍵代謝酶的表達(dá)水平升高,我們進(jìn)而推測(cè)并通過(guò)細(xì)胞內(nèi)定位和蛋白質(zhì)免疫共沉淀證明了ASPP2分子與SREBP2分子發(fā)生結(jié)合,抑制SREBP2與細(xì)胞核內(nèi)膽固醇合成的關(guān)鍵酶啟動(dòng)子SRE區(qū)域結(jié)合,進(jìn)而對(duì)肝癌細(xì)胞產(chǎn)生作用。本課題闡釋了ASPP2在肝癌細(xì)胞中脂滴代謝與膽固醇代謝通路中的作用:1,ASPP2可與Sirt1結(jié)合,兩者對(duì)脂滴產(chǎn)生協(xié)同作用;2,ASPP2通過(guò)與轉(zhuǎn)錄因子SREBP2結(jié)合,抑制SREBP2與下游啟動(dòng)子結(jié)合,進(jìn)而影響肝癌細(xì)胞干性特征。這些發(fā)現(xiàn)拓寬了我們對(duì)肝癌細(xì)胞脂質(zhì)代謝通路作用的認(rèn)知,這為肝癌細(xì)胞診斷提供了新的方向,為抗腫瘤藥物研究提供了新的靶點(diǎn),為肝癌的治療提供了新的策略。
[Abstract]:Cancer is fundamentally abnormal growth and proliferation of cells , which can meet its own needs by abundant energy and abundant supply of substances , so cancer has changed somewhat in terms of substance energy metabolism , such as sugar metabolism , lipid metabolism and protein metabolism . However , other metabolic pathways , such as proteins , nucleic acids , lipid metabolism , are also enhanced in tumors . Most adult mammalian tissues meet their own needs for lipids by taking free fatty acids ( FFA ) , lipoproteins , such as low density lipoprotein ( LDL ) from blood . The biosynthesis of fatty acids ( FA ) and cholesterol is limited to a small number of specific tissues , such as liver , fat and breast tissue . However , biological synthesis of active lipid substances is often observed in tumor tissues . In the past few years , more and more attention has been paid to the role of lipid metabolism in tumor and its regulation . The main function of these proteins is to regulate the apoptosis of tumor cells . The main function of these proteins is to regulate the apoptosis of tumor cells . In vivo nude mice , we found that ASPP could bind to Sirt1 molecule . It was found that ASPP could bind to Sirt1 molecule . In order to further study the effect of ASMC on lipid droplet metabolism and cholesterol metabolic pathway , we found that ASPP could bind to Sirt1 molecule .

【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R735.7

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本文編號(hào)：1689051