發(fā)布時間：2018-03-31 08:01

  本文選題：miR-374a　切入點：非小細(xì)胞肺癌　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：肺癌是全球發(fā)病率最高的腫瘤,其中非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)約占85%,臨床癥狀出現(xiàn)時,多已發(fā)展到中晚期,5年生存率小于15%。對中晚期肺癌患者而言,傳統(tǒng)的治療方法效果不理想,延長生存期有限。通過對肺癌基因及其作用機(jī)制的研究,實施精準(zhǔn)分子靶向治療成為當(dāng)前有前景的重要研究方向。microRNA(miRNA)是具有調(diào)控功能的非編碼小RNA,主要通過直接調(diào)節(jié)細(xì)胞生長或作用于轉(zhuǎn)錄因子、信號通路阻斷細(xì)胞程序性死亡,發(fā)揮類似于癌基因或抑癌基因的功能。其中,miR-374a已被報道在骨肉瘤,結(jié)腸癌,乳腺癌和胃癌中發(fā)揮癌基因作用。但數(shù)項miR-374a在肺癌的作用研究報道結(jié)果并不一致,這表明miR-374a在肺癌中作用復(fù)雜,其究竟扮演何種角色,其調(diào)節(jié)的具體信號通路需要深入研究探討�；诖�,本課題的目的是研究miR-374a在非小細(xì)胞肺癌中的功能、其參與的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,為NSCLC發(fā)病機(jī)制提供新思路,為診斷和治療提供新的策略。我們首先用慢病毒載體在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中過表達(dá)miR-374a,轉(zhuǎn)染miR-374a mimics 和 inhibitors,應(yīng)用 qRT-PCR 檢測轉(zhuǎn)染前后 miR-374a 的表達(dá)情況;應(yīng)用MTT,平板克隆,流式細(xì)胞術(shù),Edu,Transwell,Boyden,裸鼠皮下成瘤,裸鼠肝包膜等方法檢測miR-374a轉(zhuǎn)染前后非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株的增殖,侵襲和轉(zhuǎn)移變化;再通過雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灪蚖esternblot實驗驗證miR-374a能直接結(jié)合CCND1和PTEN的3'UTR端;用Westernblot實驗檢測miR-374a調(diào)控之信號通路蛋白;通過原位雜交和免疫組化方法檢測miR-374a和CCND1以及PTEN在非小細(xì)胞肺癌的表達(dá),并分析兩兩之間的相互關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn):1,穩(wěn)定過表達(dá)miR-374a可以抑制A549細(xì)胞增殖、克隆和體內(nèi)成瘤能力,但促進(jìn)SPCA-1和H1975細(xì)胞增殖、克隆和體內(nèi)成瘤能力。miR-374a Inhibitors能夠逆轉(zhuǎn)穩(wěn)定過表達(dá)或瞬時過表達(dá)miR-374a后A549、SPCA-1和H1 975細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力。2,A549細(xì)胞中miR-374a能夠直接靶向CCND1和PTEN的3'UTR區(qū),過表達(dá)miR-374a后,A549細(xì)胞中CCND1的表達(dá)下調(diào),而SPCA-1和H1975細(xì)胞中PTEN表達(dá)下調(diào),瞬時轉(zhuǎn)染miR-374a inhibitor后能夠逆轉(zhuǎn)這一作用。3,Western blot檢測穩(wěn)定過表達(dá)miR-374a后A549細(xì)胞中pPI3K、pAkt、c-Myc、CDK4 及 N-cadherin 的表達(dá)下調(diào);P21 及 E-cadherin 的表達(dá)則上調(diào),miR-374a inhibitor能逆轉(zhuǎn)相關(guān)蛋白表達(dá)。穩(wěn)定過表達(dá)miR-374a后SPCA-1和H1975細(xì)胞中β-catenin信號通路相關(guān)蛋白β-catenin、TCF4、c-Myc、P21和N-cadherin的表達(dá)上調(diào);而P21的表達(dá)則下調(diào)。miR-374a inhibitor能逆轉(zhuǎn)過表達(dá)相關(guān)蛋白的表達(dá)。4,瞬時干擾CCND1后,A549細(xì)胞中pPI3K、pAkt、c-Myc、CDK4及N-cadherin的表達(dá)下調(diào);E-cadherin和P21表達(dá)上調(diào)。,瞬時干擾PTEN后 SPCA-1 和 H1975 細(xì)胞中 β-catenin 信號通路相關(guān)蛋白 β-catenin、TCF4、c-Myc、P21和N-cadherin的表達(dá)上調(diào);而P21的表達(dá)下調(diào)。5,早期NSCLC肺組織中高表達(dá)miR-374a的患者預(yù)后好,晚期NSCLC肺組織中高表達(dá)miR-374a則不利于預(yù)后,低表達(dá)miR-374a與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。在早期NSCLC組織中,miR-374a與CCND1表達(dá)呈正相關(guān),在晚期NSCLC組織中,miR-374a和CCND1無相關(guān)性;晚期NSCLC組織中,miR-374a與PTEN表達(dá)呈負(fù)相關(guān),而在早期NSCLC組織中,miR-374a和PTEN卻無相關(guān)性。研究結(jié)論是:miR-374a在不同的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中發(fā)揮的功能不同,在非小細(xì)胞肺癌不同階段扮演的角色也不相同。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R734.2

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本文編號：1689843