本文選題：乳腺癌　切入點(diǎn)：microRNA-761　出處：《鄭州大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分MicroRNA-761在乳腺癌中的表達(dá)及生物學(xué)功能研究目的MicroRNA(miRNA)是小的內(nèi)源性非編碼單鏈RNA,它們調(diào)控許多生理和病理過程。本部分旨在研究miR-761在乳腺癌中的表達(dá)及功能。方法收集56例原發(fā)性乳腺癌的病人腫瘤及癌旁組織標(biāo)本(19例TNBC與37例非TNBC),提取RNA,定量PCR法檢測miR-761的表達(dá)。構(gòu)建miR-761表達(dá)質(zhì)粒,建立miR-761穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系。應(yīng)用增殖,集落形成,遷移和侵襲實驗檢測miR-761在體外對乳腺癌細(xì)胞行為的影響。建立皮下移植瘤模型分析miR-761對乳腺癌細(xì)胞成瘤的影響。經(jīng)尾靜脈注射乳腺癌細(xì)胞建立肺轉(zhuǎn)移模型,研究miR-761對肺轉(zhuǎn)移的影響。結(jié)果miR-761在原發(fā)性乳腺癌組織中表達(dá)顯著上調(diào)(P=0.0098)。與非TNBC組織相比較,TNBC組織中miR-761表達(dá)顯著上調(diào)(P=0.0136)。相比于非惡性MCF10A乳腺上皮細(xì)胞中miR-761的表達(dá)情況,在乳腺癌細(xì)胞中觀察到miR-761表達(dá)顯著增加(P0.05),特別是在MDA-MB-453和MDA-MB-468細(xì)胞中。較非TNBC細(xì)胞MCF-7和T-47D,這些細(xì)胞miR-761表達(dá)水平呈顯著增加的趨勢(P0.05)。與未轉(zhuǎn)染的對照細(xì)胞相比較,外源性過表達(dá)miR-761能夠增強(qiáng)MDA-MB-231細(xì)胞的增殖和集落形成的能力。相反,miR-761表達(dá)下調(diào)則導(dǎo)致MDA-MB-231細(xì)增殖能力和集落形成顯著下降。外源性過表達(dá)miR-761顯著(P0.05)增加MDA-MB-453細(xì)胞遷移和侵襲能力,而miR-761表達(dá)下調(diào)導(dǎo)致這些細(xì)胞的遷移和侵襲能力有明顯的降低。在MDA-MB-231細(xì)胞中得到的結(jié)果非常相似。這些結(jié)果表明,miR-761具有促進(jìn)對TNBC細(xì)胞侵襲活性的能力。過度表達(dá)miR-761的MDA-MB-231裸鼠移植瘤的體積顯著(P0.05)高于對照組腫瘤體積。與對照組相比,被接種4周后miR-761過表達(dá)組的腫瘤平均重量平均增加85%(P=0.0241)。我們也把miR-761或空載體轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細(xì)胞注射裸鼠尾靜脈。在接種5周后評估肺部轉(zhuǎn)移性病變的發(fā)生情況。我們發(fā)現(xiàn)miR-761過表達(dá)組的肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)比對照空載體組明顯增加(P=0.0019)。結(jié)論miR-761在乳腺癌尤其是TNBC中表達(dá)顯著增加。miR-761可以增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞增殖和侵襲能力并可以促進(jìn)乳腺癌移植瘤生長和肺轉(zhuǎn)移。第二部分MicroRNA-761通過抑制TRIM29表達(dá)促進(jìn)乳腺癌生長和轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究目的MicroRNA-761通過抑制TRIM29表達(dá)促進(jìn)乳腺癌生長和轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究。方法基于miRDB(http://mirdb.org/miRDB/)算法預(yù)測miR-761的靶基因。構(gòu)建TRIM29表達(dá)質(zhì)粒,并與miR-761共轉(zhuǎn)至乳腺癌細(xì)胞中,觀察其逆轉(zhuǎn)效應(yīng)。克隆野生型或突變型TRIM29的3’-UTR到熒光素酶基因的下游從而產(chǎn)生對應(yīng)的3’-UTR報告基因。轉(zhuǎn)染0.2μg各種不同3’-UTR報告克隆,0.02μg p RL-TK和50 nm miR-761模擬物或?qū)φ誱iRNA進(jìn)入293T細(xì)胞。用表達(dá)Renilla熒光酶的p RL-TK載體作為熒光素酶活性的內(nèi)部對照。應(yīng)用Western blot法檢測miR-761對TRIM29蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果TRIM293’-UTR上含有一個miR-761的結(jié)合位點(diǎn)。miR-761表達(dá)水平與TRIM29蛋白表達(dá)水平呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.452,P=0.0126)。外源性表達(dá)的miR-761顯著(P0.05)降低攜帶野生型TRIM293’-UTR的報告基因的活性,外源性表達(dá)的miR-761對攜帶突變型TRIM293’-UTR的報告基因的活性并沒有影響。在報告基因檢測法一致,我們發(fā)現(xiàn)在MDA-MB-231細(xì)胞中過表達(dá)miR-761模擬物之后,內(nèi)源性TRIM29表達(dá)明顯減少,而轉(zhuǎn)染anti-miR-761后,TRIM29表達(dá)顯著增高。另外,在小鼠模型中,過表達(dá)miR-761的腫瘤中TRIM29的表達(dá)水平顯著下降。當(dāng)該質(zhì)粒與miR-761模仿物共轉(zhuǎn)染進(jìn)入MDA-MB-231細(xì)胞時,miR-761-介導(dǎo)的TRIM29表達(dá)下調(diào)的作用完全消失。在MDA-MB-231細(xì)胞中過表達(dá)TRIM29能夠降低過表達(dá)miR-761模仿物所誘導(dǎo)的人乳腺癌細(xì)胞的增殖和浸潤。結(jié)論TRIM29是一個miR-761的靶基因,miR-761與TRIM29在乳腺癌標(biāo)本中的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)。miR-761通過靶向抑制TRIM29促進(jìn)乳腺癌生長和轉(zhuǎn)移。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

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6 劉兆U，

本文編號：1639613