本文選題：肝郁證　切入點(diǎn)：PRL　出處：《北京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：本研究基于"方證相關(guān)"理論,以肝郁證、泌乳素與神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)三者之間的關(guān)聯(lián)性和柴胡疏肝散對(duì)肝郁證的療效為立論前提,根據(jù)中醫(yī)病因?qū)W及發(fā)病學(xué)的原理復(fù)制了肝郁證大鼠模型,以中醫(yī)肝郁證存在免疫系統(tǒng)和PRL異常及PRL可能參與其免疫功能調(diào)節(jié)為問題切入,探查不同時(shí)間點(diǎn)的免疫功能狀態(tài)、PRL及其相關(guān)調(diào)節(jié)因素的變化,以從泌乳素神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫關(guān)聯(lián)的角度探討中醫(yī)肝郁證的現(xiàn)代內(nèi)涵。在此基礎(chǔ)上,以"肝郁證-PRL-細(xì)胞免疫-分子信號(hào)通路"之間的關(guān)聯(lián)為切入,從系統(tǒng)生物學(xué)和分子生物學(xué)角度,探討肝郁證模型泌乳素—免疫細(xì)胞功能—泌乳素受體及其信號(hào)通路關(guān)聯(lián)蛋白和目的基因的變化上,探查柴胡疏肝散、氟西汀和溴隱亭對(duì)模型上述環(huán)節(jié)的干預(yù)效應(yīng)。論文分為文獻(xiàn)綜述和實(shí)驗(yàn)研究兩部分。文獻(xiàn)研究主要是對(duì)肝郁證及其現(xiàn)代神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫學(xué)內(nèi)涵和泌乳素免疫調(diào)節(jié)作用的實(shí)驗(yàn)和臨床研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述。實(shí)驗(yàn)研究包括研究一和研究二兩部分,研究一側(cè)重探查不同時(shí)間點(diǎn)肝郁證神經(jīng)內(nèi)分泌免疫狀態(tài)及泌乳素分泌水平的變化;研究二重點(diǎn)探查肝郁證高泌乳素血癥神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫異常機(jī)制及柴胡疏肝散作用。研究一 肝郁證模型大鼠的免疫功能狀態(tài)及泌乳素變化方法:大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、肝郁模型組。模型組按慢性束縛制模方法處理,連續(xù)28d;分別于造模第15d、22d、29d,腹主動(dòng)脈取血,低溫取下丘腦;酶免法測(cè)定血清NE、E、IL-2、IL-6、γ-IFN、TNF-α,下丘腦5-HT、DA;放免法測(cè)定下丘腦TRH、血清CORT,PRL;流式細(xì)胞儀法測(cè)定CD3+T、CD4+T、CD4+T/CD8+T。各組指標(biāo)數(shù)據(jù)均以(x±s)表示,數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。結(jié)果:造模兩周后,模型大鼠開始出現(xiàn)易怒煩躁,并逐漸轉(zhuǎn)為情緒低落、表情淡漠和爭(zhēng)斗減少,伴見飲食減少,大便較干;與正常組相比,模型大鼠2W末、3W末、4W體重均見明顯降低(P0.01);模型大鼠2W末、3W末、4W活動(dòng)狀態(tài)和情緒睡眠積分明顯增加(P0.05或P0.01)、4W末皮膚毛發(fā)積分值明顯增加(P0.05);模型大鼠2W末、4W末糖水偏嗜量明顯降低(P0.01)。模型大鼠2W末血清NE、E、CORT、PRL、TNF-α、γ-IFN、CD3、CD4含量明顯增加,血清IL-6含量和下丘腦5-HT、DA含量明顯降低(P0.05或P0.01);3W末、4W末血清NE、E、CORT、PRL含量和下丘腦5-HT和TRH含量明顯增加,血清IL-2、IL-6、TNF-α、γ-IFN、CD3、CD4、CD4/CD8含量明顯降低(P0.05或P0.01)。研究二肝郁證模型大鼠高泌乳素及神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫機(jī)制和相關(guān)方藥的作用方法:大鼠隨機(jī)分成正常組、肝郁組、柴胡疏肝散大劑量組、柴胡疏肝散小劑量組、溴隱亭組、氟西汀組。實(shí)驗(yàn)期間觀察并記錄各組大鼠每周外觀行為和體重的變化。模型組分別按上述方法造模,連續(xù)28d;于造模第15d,西藥組分別給予溴隱亭0.22mg/kg·d灌胃,氟西汀1.8mg/kg·d灌胃;中藥大劑量組大鼠給予柴胡疏肝散顆粒1.24g/kg· d灌胃,小劑量組大鼠給予柴胡疏肝散顆粒0.31g/kg·d灌胃,1次/d,連續(xù)14d。實(shí)驗(yàn)第29d,腹主動(dòng)脈取血,低溫取下丘腦和垂體。酶免法測(cè)定血清NE、E、IL-2、IL-6、γ-IFN、TNF-α,下丘腦5-HT、DA;放免法測(cè)定下丘腦TRH、血清CORT,PRL;流式細(xì)胞儀法測(cè)定CD3+T、CD4+T、CD4+T/CD8+T。蛋白免疫印跡法測(cè)定T淋巴細(xì)胞STAT5、PRLR蛋白表達(dá);實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測(cè)定T淋巴細(xì)胞IRF-1基因表達(dá);免疫熒光法測(cè)定垂體PRL蛋白表達(dá)。各組指標(biāo)數(shù)據(jù)均以(x土s)表示,采用單因素方差分析(one-wayANOVA)后,行多組間比較,采用LSD檢驗(yàn)。結(jié)果:造模兩周后,模型大鼠開始出現(xiàn)易怒煩躁,并逐漸轉(zhuǎn)為情緒低落、表情淡漠和爭(zhēng)斗減少,伴見飲食減少,大便較干;與正常組比較,模型大鼠1W末、2W末、3W末、4W體重均見明顯降低(P0.01);模型大鼠2W末、3W末、4W活動(dòng)狀態(tài)和情緒睡眠積分明顯增加(P0.05或P0.01)、4W末皮膚毛發(fā)積分值明顯增加(P0.05);模型大鼠2W末、4W末糖水偏嗜量明顯降低(P0.01);模型大鼠2W末爬行格數(shù)、直立次數(shù)、中央格停留時(shí)間、里程數(shù)均明顯升高(P0.01),修飾次數(shù)明顯降低(P0.01),4W末爬行格數(shù)、直立次數(shù)、修飾次數(shù)、里程數(shù)均明顯降低(P0.05或P0.01),中央格停留時(shí)間明顯升高(P0.01);模型大鼠4W末血清NE、E、CORT、PRL含量、下丘腦5-HT和TRH含量和垂體PRL表達(dá)量明顯增加,血清IL-2、IIL-6、TNF-α、γ-IFN、CD3、CD4、CD4/CD8含量、T淋巴細(xì)胞STAT5蛋白、PRLR蛋白和IRF-1 mRNA表達(dá)量明顯降低(P0.05 或 P0.01)。給藥2W后,柴胡疏肝散大劑量組大鼠情緒改善明顯,活動(dòng)稍增多,飲食有所增加；柴胡疏肝散小劑量組和溴隱亭組大鼠無明顯變化;氟西汀組大鼠情緒改善明顯,活動(dòng)和飲食增多,扎堆倦臥減少,皮膚毛發(fā)明顯改善。與肝郁模型組比較,柴胡疏肝散大劑量組大鼠體重、糖水偏嗜度、爬行格數(shù)、里程數(shù)以及血中IL-2、IL-6、TNF-α、γ-IFN、CD3+T淋巴細(xì)胞數(shù)、CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)、CD4/CD8T淋巴細(xì)胞數(shù)、T淋巴細(xì)胞STAT5蛋白、PRLR蛋白和IRF-1mRNA表達(dá)量均明顯升高,活動(dòng)行為積分值、情緒睡眠積分值、皮膚毛發(fā)積分值、中央格停留時(shí)間以及血中NE、E、CORT、PRL和下丘腦5-HT、TRH、垂體PRL的表達(dá)均明顯降低(P0.05或P0.01);氟西汀組大鼠體重、糖水偏嗜度、爬行格數(shù)、修飾次數(shù)、里程數(shù)以及血IL-6、TNF-α、γ-IFN、CD4/CD8T淋巴細(xì)胞數(shù)明顯升高,活動(dòng)行為積分值、情緒睡眠積分值、皮膚毛發(fā)積分值和中央格停留時(shí)間以及血NE、E、CORT、PRL、垂體PRL和T淋巴細(xì)胞的IRF-1 mRNA表達(dá)量明顯降低(P0.05或P0.01);溴隱亭組大鼠血PRL、下丘腦TRH和垂體PRL的表達(dá)明顯降低,血IL-6、CD3、CD4和CD4/CD8T淋巴細(xì)胞數(shù)、T淋巴細(xì)胞STAT5蛋白、PRLR蛋白和IRF-1 mRNA表達(dá)量均明顯升高(P0.05或P0.01)。與柴胡舒肝散大劑量比,氟西汀組大鼠情緒睡眠積分值、爬行格數(shù)、里程數(shù)、外周血CD3、CD4、CD4/CD8T淋巴細(xì)胞數(shù)目、T淋巴細(xì)胞PRLR蛋白、STAT5蛋白及IRF-1 mRNA表達(dá)量明顯降低,中央格停留時(shí)間、糖水偏嗜量、明顯升高(P0.05或P0.01);柴胡疏肝散小劑量組大鼠活動(dòng)狀態(tài)、情緒睡眠積分值、中央格停留時(shí)間、血清PRL和下丘腦TRH均明顯升高,糖水偏嗜量、爬行格數(shù)、里程數(shù)、血清IL6、外周血CD3、CD4、CD4/CD8T淋巴細(xì)胞數(shù)目和T淋巴細(xì)胞PRLR蛋白、IRF-1 mRNA表達(dá)量均明顯降低(P0.05或P0.01);溴隱亭組大鼠在活動(dòng)狀態(tài)、情緒睡眠積分值、下丘腦5-HT含量均明顯升高,糖水偏嗜量、T淋巴細(xì)胞PRLR蛋白表達(dá)量明顯降低(P0.05或P0.01)。結(jié)論:肝郁證模型大鼠存在持續(xù)性泌乳素升高、HPA軸亢進(jìn)及神經(jīng)內(nèi)分泌免疫的異常(中樞單胺類遞質(zhì)出現(xiàn)先降低逐漸回升,免疫功能先升高后降低),其機(jī)制涉及到T細(xì)胞及其JAK-STAT信號(hào)通路的傳導(dǎo)異常,其中過高的PRL引起的T細(xì)胞膜上的PRL受體表達(dá)降低是其重要的調(diào)控環(huán)節(jié)。另外,肝郁證免疫功能降低可能還涉及到HPA軸的亢進(jìn),其確切的調(diào)控機(jī)制仍待進(jìn)一步探查。柴胡疏肝散對(duì)該模型大鼠的肝郁證候和西醫(yī)(神經(jīng)內(nèi)分泌免疫系統(tǒng))病生理指標(biāo)均有良好的改善作用;氟西汀對(duì)該模型大鼠的肝郁證候有改善作用,對(duì)其中神經(jīng)內(nèi)分泌部分指標(biāo)有改善作用,對(duì)免疫功能的改善作用不明顯;溴隱亭對(duì)肝郁證候無明顯作用,對(duì)高泌乳素血癥及免疫功能有一定的改善作用。較之于西藥,中醫(yī)因證治方具有整體和多環(huán)節(jié)調(diào)節(jié)作用優(yōu)勢(shì)。肝郁模型大鼠存在"PRL-免疫系統(tǒng)-T細(xì)胞-JAK-STAT"調(diào)節(jié)異常,中藥柴胡疏肝散和西藥溴隱亭對(duì)模型大鼠免疫功能均有改善作用,其機(jī)制均涉及PRL中樞調(diào)節(jié)及T細(xì)胞PRL-JAK-STAT信號(hào)通路的調(diào)節(jié)。氟西汀對(duì)肝郁證免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)可能不涉及T細(xì)胞JAK-STAT信號(hào)通路。推測(cè)PRL的升高不僅是慢性應(yīng)激肝郁證神經(jīng)內(nèi)分泌免疫功能異常的部分生物學(xué)基礎(chǔ),也是柴胡疏肝散方作用于肝郁證的重要分子靶標(biāo)。
[Abstract]:This study is based on the "formula" theory to the stagnation of the liver, between prolactin and neuro endocrine immune network and the relevance of the three CHSGS effect on Ganyu as premise, according to the principle of model rats with liver qi stagnation TCM etiology and pathogenetic, with TCM syndrome of stagnation of liver qi in the immune system and the abnormal PRL and PRL may be involved in the regulation of immune function as a breakthrough, the immune status of exploration at different time points and the changes of PRL and related regulatory factors, explore the modern connotation of liver depression syndrome from prolactin neuroendocrine immune related angle. On this basis, "the association between -PRL- - Cell Immunity Liver Qi syndrome pathway" as a breakthrough, from the perspective of systems biology and molecular biology, to explore the model of liver qi stagnation syndrome and immune cell function - prolactin prolactin receptor and its signaling pathway associated protein The change of target gene and on the exploration of CHSGS, the intervention effect of fluoxetine and bromocriptine on the part of the model. The thesis is divided into two parts: literature review and experimental research. The literature research is mainly on Ganyu and modern nerve endocrine immunological connotation and immune regulation of prolactin in experimental and clinical research progress were reviewed. The experiment includes research and study of the 22 part, on the side of heavy changes at different time points Ganyu exploration of neuroendocrine immune state and prolactin secretion; study two key exploration Ganyu hyperprolactinemia nerve endocrine abnormal immune mechanism and CHSGS effect. The immune functional state and lactation research a model of syndrome of stagnation of liver of rats in change methods: rats were randomly divided into normal control group, liver depression model group. Model group by chronic restraint molding method, continuous 28d;鍒嗗埆浜庨，

本文編號(hào)：1614048