本文選題：多發(fā)性骨髓瘤　切入點：PDK1　出處：《浙江大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：第一部分PDK1抑制劑GSK2334470單藥及聯合mTOR抑制劑PP242的抗骨髓瘤作用研究目的:研究PDK1抑制劑GSK-470的抗骨髓瘤作用及其分子機制;通過體內外實驗,探討GSK2334470協同mTOR抑制劑PP242抑制骨髓瘤細胞生長和誘導細胞凋亡的作用和機制。方法:采用MTT法檢測GSK2334470和/或PP242對多發(fā)性骨髓瘤(multiply myeloma,MM)細胞株和患者原代細胞的生長抑制作用;流式細胞儀AnnexinV/PI雙染法檢測細胞凋亡;Western blot 檢測 Caspase-3/8/9、PARP、PI3K/PDK1/Akt/mTOR通路相關蛋白的表達情況。構建RPMI8226細胞荷瘤小鼠模型,檢測GSK2334470和/或PP242對小鼠瘤體生長的影響。結果:1.GSK2334470可以抑制骨髓瘤細胞株及原代MM患者細胞生長,呈濃度依賴性;對正常細胞株無明顯毒性作用。2.外源性IL-6和IGF-1不能逆轉GSK2334470對骨髓瘤細胞株的殺傷作用。3.GSK2334470可以誘導MM細胞株和原代細胞發(fā)生凋亡,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 和 PARP 被激活。4.GSK2334470通過抑制PDK1的磷酸化來調節(jié)PI3K/Akt/mTOR通路及其下游蛋白。5.GSK2334470可以協同PP242殺傷骨髓瘤細胞株和原代細胞,誘導細胞凋亡。6.PP242通過抑制mTORC2、下調Akt第473位點上絲氨酸的磷酸化來增強GSK2334470的抗骨髓瘤作用,兩者聯用完全抑制了 Akt和mTORC1/C2的活性。7.GSK2334470、PP242均可抑制MM荷瘤小鼠瘤體的生長,但聯合組的抑制作用更明顯,差異有統計學意義;聯合組瘤體的mTORC1和mTORC2的活性都有明顯下降。第二部分PTEN在PDK1抑制劑GSK2334470抗骨髓瘤作用中的重要性研究目的:研究和比較GSK2334470對四種MM細胞株殺傷作用的差異及其與PTEN基因的關系;通過腺病毒或藥物改變骨髓瘤細胞中PTEN蛋白的水平來進一步證實PTEN在GSK2334470抗骨髓瘤作用中重要性;研究GSK2334470與蛋白酶體抑制劑MG132的協同抗骨髓瘤作用及其機制。方法:采用MTT法檢測生長抑制作用;流式細胞儀Annexin V/PI雙染法檢測細胞凋亡;PCR和Western blot檢測MM細胞株PTEN的本底表達;腺病毒轉染使MM細胞株過表達或低表達PTEN;Western blot檢測胞漿PTEN、胞核PTEN及PI3K/PDK1/Akt/mTOR通路相關蛋白的表達情況。激光共聚焦檢測PTEN蛋白在細胞內的分布。結果:1.GSK2334470對四種骨髓瘤細胞殺傷作用有明顯的差異,對ARP-1和MM.1R較敏感;ARP-1、MM.1R凋亡細胞比例也明顯高于RPMI8226和OPM-2;與細胞株的PTEN表達呈正相關。2.通過腺病毒轉染改變MM細胞株PTEN的表達,可改變GSK2334470的敏感性。3.MG132通過增加細胞中PTEN的表達,調節(jié)PI3K/Akt/mTOR通路及其下游蛋白,協同GSK2334470殺傷骨髓瘤細胞,誘導凋亡。4.GSK2334470可以使MM細胞株胞漿中高表達的PTEN向細胞核轉移,明確了 GSK2334470抗骨髓瘤作用的其他機制,與MG132協同抗骨髓瘤的分子機制。結論:GSK2334470通過抑制PDK1的磷酸化來調節(jié)PI3K/Akt/mTOR通路,誘導骨髓瘤細胞凋亡;mTOR抑制劑PP242通過抑制mTORC2和p-Akt S473的磷酸化協同GSK2334470發(fā)揮抗骨髓瘤作用。GSK2334470的敏感性與MM細胞內PTEN的表達水平有關;可通過蛋白酶體抑制劑MG132或腺病毒轉染增加細胞內PTEN的表達提高GSK2334470的殺傷作用;同時GSK2334470還可以使高表達的PTEN發(fā)生核轉移,與MG132發(fā)揮協同抗MM作用。提示靶向抑制PDK1及聯合mTOR抑制劑或蛋白酶體抑制劑可能是多發(fā)性骨髓瘤治療的新的措施。
[Abstract]:Objective to study the antitumor action of bone marrow Part 1 PDK1 inhibitor GSK2334470 monotherapy and in combination with the mTOR inhibitor PP242: anti myeloma effect of PDK1 inhibitor GSK-470 and its molecular mechanism; in vivo. To explore the effect and mechanism of GSK2334470 cooperative mTOR inhibitor PP242 inhibits myeloma cell growth and induce cell apoptosis. Methods: MTT detection of GSK2334470 and / or PP242 on multiple myeloma (multiply myeloma, MM) inhibited the growth of primary cells and leukemic cells; flow cytometry AnnexinV/PI method to detect cell apoptosis; Western blot detection of Caspase-3/8/9, PARP, expression of PI3K/PDK1/Akt/mTOR pathway related proteins. Construction of RPMI8226 cell tumor bearing mice model effect, detection of GSK2334470 and / or PP242 on the growth of mouse tumors. Results: 1.GSK2334470 could inhibit the growth of myeloma cell lines and primary MM patients Cell growth in a concentration dependent manner; no obvious toxic effect of the killing effect of.3.GSK2334470.2. of exogenous IL-6 and IGF-1 could not reverse the GSK2334470 of myeloma cells can induce the apoptosis of MM cell lines and primary cells of normal cell lines Caspase-3, Caspase-8, Caspase-9 and PARP are activated by.4.GSK2334470 inhibited PDK1 phosphorylation to regulate the PI3K/Akt/mTOR pathway and its downstream protein.5.GSK2334470 can cooperate with PP242 anti myeloma cell lines and primary cells, induced apoptosis of.6.PP242 cells through inhibition of mTORC2, downregulation of Akt 473rd sites of serine phosphorylation to enhance the anti myeloma effect of GSK2334470 completely inhibited the activity of.7.GSK2334470, Akt and mTORC1/C2 combined with PP242 can inhibit the tumor bearing. The growth of MM in mice, but the inhibitory effect of combined group was more obvious, the difference was statistically significant; the joint group of tumor mTO RC1 and mTORC2 activity was decreased. The second part is the research purpose of the importance of PTEN in the PDK1 inhibitor GSK2334470 anti myeloma effect: To study and compare the differences of four kinds of GSK2334470 MM cell killing effect and its relationship with PTEN gene by adenovirus or drugs; change of PTEN protein level in myeloma cells further confirmed the importance of PTEN in the GSK2334470 anti myeloma effects; research of GSK2334470 and proteasome inhibitor MG132 synergistic anti myeloma effect and its mechanism. Methods: the growth inhibition was detected by MTT assay; flow cytometry Annexin V/PI method to detect cell apoptosis; PCR and Western blot in MM cells was detected PTEN basal expression; adenovirus transfected MM cell line that over expression or low expression of PTEN; Western blot detection of intracellular PTEN, the expression of nuclear PTEN and PI3K/PDK1/Akt/mTOR pathway related proteins induced. The distribution of PTEN protein was detected by confocal light in the cells. Results: the lethal effect of 1.GSK2334470 on four kinds of myeloma cells was significantly different, more sensitive to ARP-1 and MM.1R; ARP-1, the percentage of apoptotic cells was significantly higher than that of RPMI8226 and MM.1R OPM-2; Cheng Zhengxiang.2. expression by adenovirus transfection MM cell line PTEN cell strain PTEN expression and sensitivity of.3.MG132 GSK2334470 can be altered by increasing the expression of PTEN in the cells, regulating PI3K/Akt/mTOR pathway and its downstream proteins, Co GSK2334470 killing myeloma cells, apoptosis induced by.4.GSK2334470 can make the high expression of MM cells in the cytoplasm of PTEN translocates to the nucleus, the other mechanism of GSK2334470 anti myeloma effects, molecular the mechanism of synergistic anti myeloma with MG132. Conclusion: GSK2334470 can inhibit the phosphorylation of PDK1 to regulate PI3K/Akt/mTOR pathway, induce myeloma cell apoptosis; mTO R inhibitor PP242 inhibit the phosphorylation of S473 mTORC2 and p-Akt GSK2334470 expression level of sensitivity and play synergistic anti myeloma effects of MM cells in.GSK2334470 PTEN; by proteasome inhibitor MG132 or adenovirus transfection increased the expression of PTEN in endothelial cells enhance the killing effect of GSK2334470; while GSK2334470 can also make the high expression of PTEN nuclear transfer, play the role of anti MM in coordination with the MG132. Suggesting that targeted inhibition of PDK1 and combined with mTOR inhibitors or proteasome inhibitors may be the treatment of multiple myeloma with new measures.

【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R733.3

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 徐景勃,侯麗君,何志國,朱旬;僅尿中發(fā)現骨髓瘤細胞2例臨床分析[J];中國實用內科雜志;2004年08期

2 姚育亞;嚴壯志;陳玉;劉書朋;;骨髓瘤細胞克隆斑圖像的分割[J];中國醫(yī)療器械雜志;2008年05期

3 傅文海;湯日杰;王峻;傅東海;;骨髓瘤的多層螺旋CT表現[J];上海醫(yī)學影像;2009年02期

4 鮑od屸;孫鼎元;李瑞宗;祁寶興;;骨髓瘤(附21例臨床分析)[J];天津醫(yī)藥雜志;1960年10期

5 郭品娥,周道銀,王學,惠小陽;胸腔積液中查見骨髓瘤細胞1例[J];臨床檢驗雜志;2002年01期

6 潘耀柱;陳協群;高廣勛;顧宏濤;張永清;董寶俠;白慶咸;朱華峰;;酪氨酸激酶抑制劑逆轉黏附誘導的骨髓瘤細胞的耐藥性[J];中國實驗血液學雜志;2006年02期

7 Peter West;元靜;;骨髓瘤新舊療法讓患者有了更多的選擇[J];醫(yī)藥論壇雜志;2008年06期

8 潘耀柱;白海;王存邦;;酪氨酸激酶抑制劑抑制骨髓瘤細胞的增殖及黏附[J];中國現代醫(yī)學雜志;2008年13期

9 楊文江;連業(yè)欽;夏同敬;;骨髓瘤影像學診斷[J];醫(yī)學影像學雜志;2009年02期

10 梁興東;容亓;韋廷安;;免疫固定電泳技術在骨髓瘤腎臟病診斷中的應用價值分析[J];內科;2012年04期

相關會議論文 前10條

1 劉薇;陳世倫;劉晉偉;李欣;夏成青;齊曼;;白細胞介素-2激活骨髓抗骨髓瘤活性的研究[A];中華醫(yī)學會第八次全國血液學學術會議論文匯編[C];2004年

2 高巍然;侯健;熊紅;;2-甲氧基雌二醇對原代骨髓瘤細胞分化作用初探[A];2005年華東六省一市血液病學學術會議暨浙江省血液病學學術年會論文匯編[C];2005年

3 高巍然;侯健;熊紅;;2-甲氧基雌二醇誘導骨髓瘤細胞分化的分子機制研究[A];第10屆全國實驗血液學會議論文摘要匯編[C];2005年

4 高巍然;侯健;熊紅;;2-甲氧基雌二醇對原代骨髓瘤細胞分化作用初探[A];第10屆全國實驗血液學會議論文摘要匯編[C];2005年

5 楊肅文;金紅;鐘玉虹;王偉;;采用多參數流式細胞術檢測鑒別正常漿細胞與骨髓瘤細胞[A];2012年浙江省檢驗醫(yī)學學術年會論文集[C];2012年

6 莊俊玲;王玄;武永吉;張潔萍;;骨髓基質細胞和黏附分子對骨髓瘤細胞生長的影響[A];第10屆全國實驗血液學會議論文摘要匯編[C];2005年

7 趙冠飛;翟玉華;孫衛(wèi)紅;劉金英;王清濤;;非分泌型多發(fā)性骨髓瘤臨床特征及相關實驗室指標淺析[A];第七屆全國醫(yī)學生物化學與分子生物學和第四屆全國臨床應用生物化學與分子生物學聯合學術研討會暨醫(yī)學生化分會會員代表大會論文集[C];2011年

8 侯健;;靶向未折疊蛋白反應途徑治療骨髓瘤的實驗研究[A];第12屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2009年

9 鄒劍峰;姜華;侯健;;修飾未折疊蛋白反應在誘導骨髓瘤細胞分化中的作用研究[A];第12屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2009年

10 由希雷;王永明;;多發(fā)骨髓瘤并發(fā)腎損害的血液凈化治療[A];2009年全國危重病急救醫(yī)學學術會議論文匯編[C];2009年

相關重要報紙文章 前3條

1 ;開啟治療骨髓瘤之門[N];健康報;2008年

2 本報記者 曹玉祥;如何診斷治療骨髓瘤[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2007年

3 健康時報特約記者 徐凱;骨髓瘤易誤診誤治[N];健康時報;2009年

相關博士學位論文 前10條

1 楊建柱;Twist1在骨髓瘤中的表達及其作用的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學;2016年

2 王曉桃;MIP-1α和sclerostin在骨髓瘤骨病患者中的表達及相互關系的研究[D];廣西醫(yī)科大學;2016年

3 楊春梅;新型PDK1抑制劑對多發(fā)性骨髓瘤的殺傷作用及分子機制研究[D];浙江大學;2017年

4 鄒劍峰;修飾未折疊蛋白反應誘導骨髓瘤細胞分化的實驗研究[D];第二軍醫(yī)大學;2010年

5 高巍然;2-甲氧基雌二醇對骨髓瘤細胞作用的體外實驗研究[D];第二軍醫(yī)大學;2005年

6 姜華;靶向治療藥物對骨髓瘤細胞未折疊蛋白反應影響的實驗研究[D];第二軍醫(yī)大學;2008年

7 莊俊玲;骨髓基質細胞和黏附分子對骨髓瘤細胞生長的影響作用初探[D];中國協和醫(yī)科大學;2004年

8 王旭東;miRNA-21調控多發(fā)性骨髓瘤細胞生長與耐藥機制研究[D];第二軍醫(yī)大學;2011年

9 高瑛;抑制蛋白酶體干擾骨髓瘤細胞未折迭蛋白反應與自噬[D];第四軍醫(yī)大學;2009年

10 王冉東;重組人骨保護蛋白治療多發(fā)性骨髓瘤骨病的實驗研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2006年

相關碩士學位論文 前10條

1 肖翠容;miRNAs作為多發(fā)性骨髓瘤的診斷和耐藥的標志的臨床和實驗研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

2 周敏;骨髓間充質干細胞與骨髓瘤細胞融合的實驗研究[D];蘇州大學;2015年

3 許俊;SENP1對骨髓瘤細胞生物學特性的影響及機制研究[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

4 金玉龍;丙戊酸鈉抑制自噬并增強DNA損傷劑的抗骨髓瘤活性[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

5 張慧霞;PIK3CA基因沉默對阿司匹林抗骨髓瘤作用的影響及機制研究[D];南昌大學醫(yī)學院;2015年

6 謝玉琴;阿司匹林對來那度胺抗骨髓瘤效應的增敏作用及分子機制研究[D];南昌大學醫(yī)學院;2015年

7 李爽;來那度胺聯合克拉霉素的抗骨髓瘤活性及其機制的研究[D];吉林大學;2016年

8 盧燕燕;阿霉素誘導的骨髓瘤細胞化療耐藥的分子機制分析[D];福建醫(yī)科大學;2014年

9 侯楠;長鏈非編碼RNA在多發(fā)性骨髓瘤細胞中的表達水平及對其生物學行為的影響[D];第二軍醫(yī)大學;2016年

10 李婷婷;MicroRNA-375調控PDK1與IGF-1R影響骨髓瘤細胞增殖及機制研究[D];南昌大學;2016年

，

本文編號：1613305