本文選題：阿司匹林抵抗　切入點(diǎn)：水楊酸　出處：《南京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景阿司匹林作為臨床常用的抗血小板藥物,在心腦血管的二級(jí)預(yù)防中發(fā)揮著重要作用。臨床上口服阿司匹林的部分患者仍然會(huì)發(fā)生血栓栓塞性事件,即存在"阿司匹林抵抗"(aspirinresistance,AR)現(xiàn)象。糖尿病已經(jīng)被證實(shí)是AR的危險(xiǎn)因素,但目前糖尿病相關(guān)的AR機(jī)制仍然不清楚�；钛鲱愔兴幰驯粡V泛應(yīng)用于臨床抗血小板和抗凝治療,其活性成分已成為AR治療的替代藥物之一。目的1.評(píng)估糖尿病狀態(tài)下阿司匹林的抗血小板作用在性別上的差異;2.揭示阿司匹林的主要代謝物SA與糖尿病狀態(tài)下AR具有潛在的聯(lián)系及可能的機(jī)制;3.從內(nèi)源性物質(zhì)代謝變化角度探討了川芎嗪(TMP)干預(yù)糖尿病狀態(tài)下AR的代謝調(diào)控機(jī)制;方法高脂飼料(HFD)結(jié)合鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)2型糖尿病(T2DM)病小鼠模型。正常飼料喂養(yǎng)小鼠隨機(jī)分為2組,每組14只(雌雄各7只),分別設(shè)正常組(Control),正常+阿司匹林組(Control+Asp);HFD/STZ誘導(dǎo)T2DM小鼠隨機(jī)分為5組分別為2型糖尿病模型組(T2DM)、2型糖尿病模型+阿司匹林組(T2DM+Asp)(雌雄各7只);2型糖尿病+Asp組預(yù)給水楊酸(T2DM+SA+Asp)、2型糖尿病+Asp組預(yù)給碳酸氫鈉(T2DM+NaHC03+Asp),T2DM+Asp組預(yù)先給予川芎嗪注射液(T2DM+TMP+Asp);(雌鼠7只);,Asp 劑量 13 mg/kg/day;SA 劑量 10 mg/kg/day;NaHCO3 劑量為 600 mg/kg/day;TMP 劑量為 100 mg/kg/day;SA 和 NaHC03 給藥方式為灌胃;TMP給藥方式為腹腔注射,均在阿司匹林給藥前,給藥周期同為10天。小鼠血糖用一次性血糖儀檢測(cè);血清胰島素、膽固醇、甘油三酯用酶法檢測(cè);腎組織病理切片通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀察;Elisa法檢測(cè)小鼠血清T IL-1β、IL-6水平;采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)血小板CD62P(p-selectin)表達(dá);放免法檢測(cè)小鼠血漿TXB2、6-keto-PGF1 α水平;HPLC檢測(cè)小鼠血漿SA水平;qPCR法測(cè)定小鼠主動(dòng)脈COX-2及腎臟轉(zhuǎn)運(yùn)體(OATs、SMCTs、URAT1)mRNA水平;氣相色譜/質(zhì)譜(GC/MS)聯(lián)合多元統(tǒng)計(jì)分析用來(lái)確定TMP干預(yù)糖尿病狀態(tài)下AR小鼠血漿內(nèi)源性代謝物的變化。結(jié)果1.T2DM雌性小鼠中出現(xiàn)明顯ARHFD/STZ誘導(dǎo)的T2DM小鼠出現(xiàn)體重增加,高血糖和高脂血癥,雖然血漿胰島素水平輕度升高,提示有胰島素抵抗。T2DM雌性小鼠血小板表面CD62P表達(dá)高于正常雌性小鼠,提示糖尿病狀態(tài)下可以增加雌性小鼠的血小板活性;正常組小鼠給予阿司匹林后,無(wú)論雌性還是雄性血小板表面CD62P表達(dá)均顯著下調(diào)而T2DM雌性小鼠給予阿司匹林后血小板表面CD62P表達(dá)與模型組比較無(wú)明顯改變,提示T2DM雌性小鼠給藥后血小板活性任然較高,出現(xiàn)了 AR。T2DM雌性小鼠長(zhǎng)期給予阿司匹林后TXB2/6-keto-PGF1α的比值不僅沒有降低,反而有增高的趨勢(shì),這也和之前血小板表面CD62P表達(dá)結(jié)果相一致。T2DM雌性小鼠給予阿司匹林后血小板表面CD62P表達(dá)及TXB2/6-keto-PGF1α 水平均降低。2.糖尿病狀態(tài)下腎臟相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)體下調(diào)導(dǎo)致SA的蓄積,SA抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞代償性上調(diào)COX-2表達(dá)和活性長(zhǎng)期給予阿司匹林后,T2DM雌性組隨著阿司匹林給藥時(shí)間的增加,SA第1、5、10天谷濃度明顯增加,且在第10天SA各時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度明顯升高,T2DM小鼠長(zhǎng)期給予阿司匹林后出現(xiàn)了 SA蓄積,而T2DM雄性小鼠沒有出現(xiàn)SA蓄積現(xiàn)象。在預(yù)先給予SA的T2DM雌性小鼠較模型組出現(xiàn)了SA濃度及血小板表面CD62P表達(dá)、TXB2/6-keto-PGF1α水平升高,然而給予NaHCO3后逆轉(zhuǎn)了這一結(jié)果。且根據(jù)相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)SA濃度和血漿TXB2/6-keto-PGF1α水平有相關(guān)性。我們進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)SA高濃度的T2DM雌性小鼠腹主動(dòng)脈COX-2的mRNA和蛋白水平水平都顯著下調(diào),且伴隨著COX-2下游產(chǎn)物前列環(huán)素(PGI2)的穩(wěn)定代謝物6-keto-PGF1α的降低,從而間接導(dǎo)致血漿中TXB2/6-keto-PGF1α水平升高,因此增加了 T2DM雌性小鼠的血小板活性。我們發(fā)現(xiàn)T2DM雌性小鼠腎臟相關(guān)SA排泄依賴轉(zhuǎn)運(yùn)體如OAT1、OAT3、SMCT1、URAT1mRNA水平較正常組下調(diào)明顯,且出現(xiàn)腎小管空泡病變,該結(jié)果表面SA蓄積和腎臟轉(zhuǎn)運(yùn)體下調(diào)相關(guān)。3.TMP對(duì)糖尿病狀態(tài)下AR的干預(yù)伴隨對(duì)相關(guān)代謝通路的調(diào)節(jié)運(yùn)用代謝組學(xué)GC/MS研究手段,結(jié)合之前的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,我們從小鼠血漿中測(cè)定分析得出120個(gè)化合物,經(jīng)過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)鑒定得到79種代謝物。在PLS-DA的score-plot上可以發(fā)現(xiàn),對(duì)照組和糖尿病模型組可以較好地區(qū)分,同時(shí)對(duì)照組和對(duì)照給藥組間的趨離程度明顯大于模型組和模型給藥組;與T2DM雌性小鼠中AR相關(guān)指標(biāo)較為一致。我們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)模型狀態(tài)下顯著升高的代謝物質(zhì)有丙酮酸、三羥基丁酸、4-羥丁酸、花生四烯酸、葡萄糖、松二糖、膽固醇等,下降的物質(zhì)有乳酸、異亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸。然而,TMP聯(lián)合阿司匹林可以逆轉(zhuǎn)上述部分異常代謝物水平,如花生四烯酸、葡萄糖、丙酮酸、膽固醇、尿酸和尿素,提示TMP可能通過(guò)改變花生四烯酸代謝,丙酮酸代謝,糖酵解,檸檬酸循環(huán),色氨酸代謝通路從而干預(yù)糖尿病狀態(tài)下的AR。結(jié)論本研究揭示了長(zhǎng)期給予T2DM雌性小鼠阿司匹林后出現(xiàn)SA蓄積和AR。其可能機(jī)制是SA抑制了病理狀態(tài)下血管內(nèi)皮細(xì)胞COX-2表達(dá)和活性的代償性上調(diào),打破了機(jī)體原有的COX-1/COX-2功能平衡,從而減少保護(hù)性PGI2的生成。通過(guò)代謝組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)TMP通過(guò)改變多條代謝通路從而干預(yù)糖尿病狀態(tài)下的AR。研究結(jié)果提示干預(yù)SA代謝障礙可能為AR提供了一個(gè)新的治療策略;臨床聯(lián)合應(yīng)用TMP可能通過(guò)糾正機(jī)體的代謝紊亂而發(fā)揮改善糖尿病狀態(tài)下AR的效應(yīng)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R587.1

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 朱啟仁;“亞糖尿病狀態(tài)”麻痹不得[J];家庭醫(yī)學(xué);2004年05期

2 齊懷儉;劉杰坤;;外科性糖尿病狀態(tài)與輸液的選擇[J];天津藥學(xué);1991年04期

3 劉英莉;忻菁;顧勇;林善錟;;血管緊張素Ⅱ 1a型受體基因敲除對(duì)糖尿病狀態(tài)下腎小球足細(xì)胞及其骨架蛋白的影響[J];上海醫(yī)學(xué);2009年09期

4 萬(wàn)奇;吳水清;宋冰鑫;李友元;劉洋洋;;糖尿病狀態(tài)下影響血腦屏障上P-糖蛋白表達(dá)的因素[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2013年23期

5 張璐璐;劉曉東;;糖尿病狀態(tài)下P-糖蛋白表達(dá)和功能的改變及其臨床意義[J];藥物生物技術(shù);2011年06期

6 胡夢(mèng)s，

本文編號(hào)：1599750