發(fā)布時間：2018-03-09 11:51

  本文選題：EV71　切入點：TLR7激動劑(GS-9620)　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景:EV71是一種單鏈RNA嗜神經(jīng)性病毒,1969年在美國一次被鑒定出來,但其致病機制至今未明確。它是引起手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)的常見病毒,一般癥狀比較輕微,但偶爾會引起非常嚴重疾病,如無菌性腦膜炎,新生兒致死性腦炎等。自1997年第一次在馬來西亞爆發(fā)致使41名兒童死亡至今己引起包括中國、新加坡、澳大利亞、越南和柬埔寨等亞洲—太平洋等國的大規(guī)模流行,并造成了嚴重后果。目前并沒有有效的臨床治療方案應(yīng)對,雖然有兩種疫苗上市,但其預(yù)防效果并沒有經(jīng)歷實戰(zhàn)考驗。Toll樣受體(Toll like receptor,TLR)可以激活抗病毒免疫反應(yīng),其中TLR7的激活可以誘導(dǎo)產(chǎn)生多種細胞因子,包括Ⅰ型干擾素(IFNs),起到抗病毒的作用。方法:建立EV71感染的小鼠模型,給予TLR7激動劑(GS-9620),進行生存率和臨床癥狀的比較。實驗檢測出最佳給藥劑量和方式,在明顯提高感染小鼠生存率和緩解臨床癥狀的前提下,HE和熒光免疫對感染小鼠和感染給藥小鼠進行檢測,利用CBA、real-time PCR、對正常組小鼠,感染小鼠,感染后給藥組小鼠和單獨給藥組小鼠3天的血清中細胞因子/趨化因子、NF-κ B和PI3K相關(guān)基因和細胞因子/趨化因子的相關(guān)基因的表達。之后進行NF-κ B和PI3K的作用對其關(guān)鍵蛋白NF-κB和PI3K進行抑制和/或激活,分組為:正常組,感染組,給藥組,PI3K和NF-κB抑制劑組,PI3K抑制劑組;P13K抑制劑加NF-κ B激動劑組,NF-κB抑制劑組,NF-κB抑制劑組加PI3K激動劑組;對這8組實驗動物進行生存率和臨床癥狀的觀察和分析;在得出有明顯差異的情況前提下,進行感染、給藥72小時,利用real-time PCR和HE染色方法,檢測肌肉中病毒載量、兩條信號通路下游的免疫因子的表達情況和肌肉組織的病理損傷情況。IFN-AR敲除小鼠感染EV71,觀察死亡率與病毒載量。結(jié)果:MP10為EV71的小鼠適應(yīng)株,腹腔感染10日齡的ICR小鼠100μl(109TCIDso/ml)的過半數(shù)致死率,在感染2、26和50小時,給予TLR7激動劑(GS-9620)4.5mg/kg能明顯的提高感染小鼠的生存率和臨床癥狀。利用CBA對四組小鼠進行血液細胞因子/趨化因子的檢測,發(fā)現(xiàn)TLR7激動劑(GS-9620)能夠激活免疫反應(yīng),增加血液中的 IL-1β,IL-5,IL-6,IL-12,IFN-α,IFN-β,IFN-γ,TNF-α,MIP-1α和MCP-1的表達量。為了進一步研究TLR7激動劑(GS-9620)是通過激活機體的免疫反應(yīng)抑制EV71病毒的復(fù)制,從而減輕EV71對于機體的炎癥反應(yīng),研究顯示TLR7激動劑是通過激活NF-κ B和PI3K產(chǎn)生免疫反應(yīng),利用PI3K和NF-κB的激動劑和/或抑制劑進行檢測,發(fā)現(xiàn)同時給予PI3K和NF-κ B抑制劑,感染小鼠在兩天內(nèi)全部死亡,說明PI3K和NF-κB兩條信號通路在EV71感染過程中發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。抑制PI3K和NF-κB任何一個蛋白,都會減弱TLR7激動劑(GS-9620)的抗病毒和減輕病理損傷的作用。IFN-AR敲除的小鼠感染EV71后,促進病毒復(fù)制,增加小鼠死亡率。結(jié)論:TLR7通過激活PI3K和NF-κB信號通路,從而使機體產(chǎn)生免疫反應(yīng),增加相關(guān)細胞因子/趨化因子的分泌,抑制病毒的復(fù)制和病理損傷。背景:乙型肝炎病毒(Heptitis B Vius,HBV)感染是全球主要的公共健康問題。血清學(xué)證據(jù)顯示,全球大約有30%的人現(xiàn)在或過去感染過HBV,且有2.4億人為HBV慢性感染者,其中15%-40%很有可能發(fā)展成為嚴重的肝臟疾病,如:肝硬化和肝細胞肝癌。機體感染HBV后,在肝細胞內(nèi)復(fù)制,分泌病毒顆粒可長達數(shù)十年,給患者個人生活和家庭造成了極大的痛苦,同時也給社會帶來了嚴重的公共健康問題。目前臨床治療中,尚無根除HBV感染的有效藥物。由于HBV感染種屬的局限性,除能感染人以外,目前研究顯示,HBV尚可感染黑猩猩和樹，

本文編號：1588410