本文選題：EV71　切入點(diǎn)：TLR7激動(dòng)劑(GS-9620)　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景:EV71是一種單鏈RNA嗜神經(jīng)性病毒,1969年在美國一次被鑒定出來,但其致病機(jī)制至今未明確。它是引起手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)的常見病毒,一般癥狀比較輕微,但偶爾會引起非常嚴(yán)重疾病,如無菌性腦膜炎,新生兒致死性腦炎等。自1997年第一次在馬來西亞爆發(fā)致使41名兒童死亡至今己引起包括中國、新加坡、澳大利亞、越南和柬埔寨等亞洲—太平洋等國的大規(guī)模流行,并造成了嚴(yán)重后果。目前并沒有有效的臨床治療方案應(yīng)對,雖然有兩種疫苗上市,但其預(yù)防效果并沒有經(jīng)歷實(shí)戰(zhàn)考驗(yàn)。Toll樣受體(Toll like receptor,TLR)可以激活抗病毒免疫反應(yīng),其中TLR7的激活可以誘導(dǎo)產(chǎn)生多種細(xì)胞因子,包括Ⅰ型干擾素(IFNs),起到抗病毒的作用。方法:建立EV71感染的小鼠模型,給予TLR7激動(dòng)劑(GS-9620),進(jìn)行生存率和臨床癥狀的比較。實(shí)驗(yàn)檢測出最佳給藥劑量和方式,在明顯提高感染小鼠生存率和緩解臨床癥狀的前提下,HE和熒光免疫對感染小鼠和感染給藥小鼠進(jìn)行檢測,利用CBA、real-time PCR、對正常組小鼠,感染小鼠,感染后給藥組小鼠和單獨(dú)給藥組小鼠3天的血清中細(xì)胞因子/趨化因子、NF-κ B和PI3K相關(guān)基因和細(xì)胞因子/趨化因子的相關(guān)基因的表達(dá)。之后進(jìn)行NF-κ B和PI3K的作用對其關(guān)鍵蛋白NF-κB和PI3K進(jìn)行抑制和/或激活,分組為:正常組,感染組,給藥組,PI3K和NF-κB抑制劑組,PI3K抑制劑組;P13K抑制劑加NF-κ B激動(dòng)劑組,NF-κB抑制劑組,NF-κB抑制劑組加PI3K激動(dòng)劑組;對這8組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行生存率和臨床癥狀的觀察和分析;在得出有明顯差異的情況前提下,進(jìn)行感染、給藥72小時(shí),利用real-time PCR和HE染色方法,檢測肌肉中病毒載量、兩條信號通路下游的免疫因子的表達(dá)情況和肌肉組織的病理損傷情況。IFN-AR敲除小鼠感染EV71,觀察死亡率與病毒載量。結(jié)果:MP10為EV71的小鼠適應(yīng)株,腹腔感染10日齡的ICR小鼠100μl(109TCIDso/ml)的過半數(shù)致死率,在感染2、26和50小時(shí),給予TLR7激動(dòng)劑(GS-9620)4.5mg/kg能明顯的提高感染小鼠的生存率和臨床癥狀。利用CBA對四組小鼠進(jìn)行血液細(xì)胞因子/趨化因子的檢測,發(fā)現(xiàn)TLR7激動(dòng)劑(GS-9620)能夠激活免疫反應(yīng),增加血液中的 IL-1β,IL-5,IL-6,IL-12,IFN-α,IFN-β,IFN-γ,TNF-α,MIP-1α和MCP-1的表達(dá)量。為了進(jìn)一步研究TLR7激動(dòng)劑(GS-9620)是通過激活機(jī)體的免疫反應(yīng)抑制EV71病毒的復(fù)制,從而減輕EV71對于機(jī)體的炎癥反應(yīng),研究顯示TLR7激動(dòng)劑是通過激活NF-κ B和PI3K產(chǎn)生免疫反應(yīng),利用PI3K和NF-κB的激動(dòng)劑和/或抑制劑進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)同時(shí)給予PI3K和NF-κ B抑制劑,感染小鼠在兩天內(nèi)全部死亡,說明PI3K和NF-κB兩條信號通路在EV71感染過程中發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。抑制PI3K和NF-κB任何一個(gè)蛋白,都會減弱TLR7激動(dòng)劑(GS-9620)的抗病毒和減輕病理損傷的作用。IFN-AR敲除的小鼠感染EV71后,促進(jìn)病毒復(fù)制,增加小鼠死亡率。結(jié)論:TLR7通過激活PI3K和NF-κB信號通路,從而使機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng),增加相關(guān)細(xì)胞因子/趨化因子的分泌,抑制病毒的復(fù)制和病理損傷。背景:乙型肝炎病毒(Heptitis B Vius,HBV)感染是全球主要的公共健康問題。血清學(xué)證據(jù)顯示,全球大約有30%的人現(xiàn)在或過去感染過HBV,且有2.4億人為HBV慢性感染者,其中15%-40%很有可能發(fā)展成為嚴(yán)重的肝臟疾病,如:肝硬化和肝細(xì)胞肝癌。機(jī)體感染HBV后,在肝細(xì)胞內(nèi)復(fù)制,分泌病毒顆�？砷L達(dá)數(shù)十年,給患者個(gè)人生活和家庭造成了極大的痛苦,同時(shí)也給社會帶來了嚴(yán)重的公共健康問題。目前臨床治療中,尚無根除HBV感染的有效藥物。由于HBV感染種屬的局限性,除能感染人以外,目前研究顯示,HBV尚可感染黑猩猩和樹，

本文編號：1588410