本文關(guān)鍵詞： 腹腔高壓癥 緊密連接 褪黑素 p38 MAPK　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景與目的:正常人的腹腔內(nèi)壓力(Intra-Abdominal Pressure,IAP)為0-5mm Hg,當(dāng)IAP達(dá)到或者超過12mm Hg時(shí),定義為腹腔高壓癥(Intra-Abdominal Hypertension,IAH)。繼發(fā)性IAH是指由非起源于盆腹腔的病變所導(dǎo)致的IAP的升高,通常見于創(chuàng)傷、燒傷、膿毒癥、休克等需要大量補(bǔ)液的患者。繼發(fā)性IAH發(fā)生的病理生理過程主要表現(xiàn)為缺血再灌注損傷,在此過程中大量炎癥因子釋放、腸道通透性增高、液體滲漏、腸管缺血水腫并最終導(dǎo)致繼發(fā)性IAH。繼發(fā)性IAH病情危重,死亡率高。因此,如何在對(duì)患者實(shí)施復(fù)蘇時(shí)降低繼發(fā)性IAH的發(fā)生是防治的重點(diǎn)。褪黑素(Melatonin,MT)是由松果體合成并分泌的一種激素,在體內(nèi)具有強(qiáng)大的抗氧化的作用,可通過清除自由基、增強(qiáng)抗氧化酶活性等作用來對(duì)抗氧化應(yīng)激損傷。近年來,MT對(duì)炎癥反應(yīng)的調(diào)控作用也受到人們的關(guān)注,且外源性MT被證實(shí)可通過抑制炎癥反應(yīng)來發(fā)揮其臟器保護(hù)作用。因此,能否通過在復(fù)蘇時(shí)使用外源性MT來抑制炎癥反應(yīng)、降低腸道的缺血再灌注損傷而減少腸道損害、降低繼發(fā)性IAH的發(fā)生?本課題通過對(duì)SD大鼠實(shí)施失血性休克后過量液體復(fù)蘇來構(gòu)建繼發(fā)性IAH的大鼠模型,并在此模型的基礎(chǔ)上對(duì)比使用MT、7.5%高滲鹽溶液(Hypertonic Saline,HS)和羥乙基淀粉(Hydroxyethyl Starch,HES)聯(lián)合LR來實(shí)施復(fù)蘇的方案對(duì)繼發(fā)性IAH的治療、預(yù)防作用的優(yōu)劣,明確各類復(fù)蘇方案對(duì)腸屏障功能的保護(hù)效能。最后通過篩選分析信號(hào)通路研究,明確這些復(fù)蘇方案發(fā)揮保護(hù)作用所調(diào)控的信號(hào)通路的具體情況。主要實(shí)驗(yàn)方法與實(shí)驗(yàn)步驟:1.繼發(fā)性IAH大鼠模型的建立及其發(fā)生機(jī)制通過對(duì)SD大鼠制作門靜脈恒定縮窄、股動(dòng)脈放血導(dǎo)致失血性休克、腹部放置束縛裝置后,再使用乳酸林格氏液(Lactated Ringer's Solution,LR)(30ml/h×6h)進(jìn)行復(fù)蘇,能成功構(gòu)建SD大鼠的繼發(fā)性IAH模型,并通過酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn),高效液相色譜檢測(cè),蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn),免疫熒光組織化學(xué)染色和電鏡等方法來論證在構(gòu)建繼發(fā)性IAH過程中腸道通透性及緊密連接蛋白的變化情況。2.不同復(fù)蘇方案對(duì)繼發(fā)性IAH復(fù)蘇效果的對(duì)比研究在先前構(gòu)建的繼發(fā)性IAH的大鼠模型的基礎(chǔ)上,通過在復(fù)蘇開始階段使用MT、HS、HES對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行治療,然后再使用LR進(jìn)行液體復(fù)蘇,我們通過酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn),高效液相色譜檢測(cè),蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn),免疫熒光組織化學(xué)染色和電鏡等方法對(duì)比觀察這些方案在預(yù)防繼發(fā)性IAH中對(duì)腸道通透性、緊密連接的保護(hù)效果。3.MT對(duì)繼發(fā)性IAH腸道損害保護(hù)作用及其機(jī)制研究為進(jìn)一步探明褪黑素保護(hù)效果的潛在機(jī)制,我們采用免疫印跡實(shí)驗(yàn)來分別檢測(cè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子(Signal Transducers and Activators of Transcription,STAT)信號(hào)通路和核因子κB(Nuclear Factor-κB,NF-кB)和絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen-Activated Protein Kinase,MAPK)信號(hào)通路,這三個(gè)信號(hào)通路的變化情況。同時(shí),我們還通過在復(fù)蘇開始階段使用p38 MAPK的阻滯劑(SB203580)來觀察腸道損害的情況,明確MT是否通過影響p38 MAPK來發(fā)揮其對(duì)腸道的保護(hù)作用。主要研究結(jié)果:1.成功建立繼發(fā)性IAH的大鼠模型立通過對(duì)SD大鼠采用恒定的門靜脈縮窄,腹部使用束縛帶,失血性休克2h后實(shí)施LR復(fù)蘇6h,復(fù)蘇結(jié)束后的IVCP為(20.99±3.50)mm Hg,均達(dá)到繼發(fā)性IAH的診斷標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)在繼發(fā)性IAH的發(fā)生過程中,腸道炎癥反應(yīng)、氧化損傷加劇,通透性增高,緊密連接被破壞,緊密連接蛋白表達(dá)下降。2.MT對(duì)繼發(fā)性IAH腸道損害的保護(hù)作用顯著通過通過對(duì)比使用MT+LR、HS+LR和HES+LR進(jìn)行復(fù)蘇,我們發(fā)現(xiàn),這些方案與單獨(dú)應(yīng)用LR相比均能夠降低繼發(fā)性IAH的發(fā)生率,同時(shí)還能降低腸道通透性、保護(hù)腸道上皮細(xì)胞間的緊密連接、抑制炎癥反應(yīng)和氧化損傷。而在這三類方案中,MT+LR的效果則更為顯著,在復(fù)蘇結(jié)束時(shí)無一動(dòng)物達(dá)到繼發(fā)性IAH的診斷標(biāo)準(zhǔn)。3.MT發(fā)揮繼發(fā)性IAH腸道損害后的保護(hù)作用的機(jī)制研究本部分實(shí)驗(yàn)通過檢測(cè)并對(duì)比MAPKs,STATs和NF-кB這三類信號(hào)通路,發(fā)現(xiàn)STAT-1、STAT-3信號(hào)通路,ERK1/2、JNK信號(hào)通路雖然有改變,但是不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。NF-кB p65和p38 MAPK信號(hào)通路的變化顯著,但是p38 MAPK信號(hào)通路的變化趨勢(shì)更加明顯,揭示了MT可能通過調(diào)控p38 MAPK信號(hào)通路來發(fā)揮其保護(hù)作用。通過應(yīng)用p38 MAPK信號(hào)通路的阻滯劑SB203580進(jìn)一步發(fā)現(xiàn),MT對(duì)繼發(fā)性IAH的保護(hù)效應(yīng)可能依賴于抑制p38 MAPK信號(hào)通路來實(shí)現(xiàn)。結(jié)論:1.通過制作門靜脈恒定縮窄、腹部放置束縛裝置后,股動(dòng)脈放血導(dǎo)致失血性休克(40mm Hg×2h),再使用LR進(jìn)行復(fù)蘇,能成功構(gòu)建大鼠的繼發(fā)性IAH模型。同時(shí)還證實(shí)在繼發(fā)性IAH過程中,缺血再灌注損傷所誘發(fā)的炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激并由此導(dǎo)致的腸屏障緊密連接的破壞、腸道通透性增高為基本的病理生理變化。2.與單獨(dú)應(yīng)用LR復(fù)蘇相比,在復(fù)蘇階段使用MT+LR、HS+LR和HES+LR進(jìn)行復(fù)蘇,可以抑制腸上皮細(xì)胞的炎癥反應(yīng),降低其氧化損傷,從而降低腸道通透性,減輕腸道水腫,降低繼發(fā)性IAH的發(fā)生,而其中MT的保護(hù)效果則更為顯著。3.褪黑素可能通過阻滯p38 MAPK信號(hào)通路來發(fā)揮對(duì)繼發(fā)性IAH過程中腸道損害的保護(hù)作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R459.7

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本文編號(hào)：1552776