本文關(guān)鍵詞： 肥厚型心肌病 全外顯子測(cè)序 非肌小節(jié)基因突變 多突變 異質(zhì)性 心尖肥厚型心肌病 冠脈肌橋 釓對(duì)比劑延遲強(qiáng)化 心血管死亡 心血管事件　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2017年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景:肥厚型心肌病(Hypertrophic Cardiomyopathy,HCM)是由編碼心肌肌小節(jié)蛋白的基因突變所導(dǎo)致的最常見(jiàn)的遺傳性心臟病,其主要特點(diǎn)為無(wú)繼發(fā)原因的左室肥厚,發(fā)病率大約1/500。異質(zhì)性突出是HCM一大特點(diǎn),其原因除了不同的致病基因、致病位點(diǎn)以及修飾因子等多重因素影響之外,基因突變劑量效應(yīng)或基因突變負(fù)載亦是HCM基因型及表型產(chǎn)生巨大異質(zhì)性的重要機(jī)制,但對(duì)該機(jī)制的分子遺傳學(xué)基礎(chǔ)研究暫未明確。研究目的:本研究擬采用二代基因測(cè)序的技術(shù)如全基因組測(cè)序(Whole-Genome Sequencing,WGS)以及全外顯子測(cè)序(Whole-EXome Sequencing,WES)對(duì)以雙室極度肥厚伴右室流出道梗阻為表型的HCM先證者以及其以非梗阻性單純左室肥厚為表型的父母所在的兩個(gè)異質(zhì)性突出的家系進(jìn)行表型與基因型相關(guān)性的探討與研究,從而明確HCM患者心臟結(jié)構(gòu)異質(zhì)性的分子遺傳基礎(chǔ)。研究方法:對(duì)兩個(gè)HCM家系的三代共38名家庭成員(家系1成員共27名,家系2成員共11名)進(jìn)行了臨床表型和致病基因的研究。先證者Ⅲ:11是家系1的11:14與家系2的Ⅱ:15的子代成員,是兩家系共有成員。收集所有健在家系成員的臨床表現(xiàn)、心電圖、超聲心動(dòng)圖以及患病成員的心臟磁共振成像資料,同時(shí)采集所有家系成員靜脈血5ml并提取DNA。依據(jù)孟德?tīng)栵@性遺傳方式的規(guī)則,在家系1即母親所在家系中選擇2名患病成員(Ⅰ:2,11:14)和1名未患HCM患者(Ⅱ:2),同時(shí)在家系2即父親所在家系中選擇3名患病成員(1:3,Ⅱ:15,Ⅱ:16)和1名未患HCM的家系成員(11:19)進(jìn)行WES測(cè)序,兩個(gè)家系共有的先證者Ⅲ:11進(jìn)行WGS測(cè)序。將WES數(shù)據(jù)高級(jí)分析后篩選出的家系1與家系2候選致病突變與先證者WGS測(cè)序結(jié)果進(jìn)行比對(duì),明確先證者致病突變來(lái)源,最后在所有家系成員和216例正常對(duì)照樣本中通過(guò)Sanger測(cè)序驗(yàn)證相應(yīng)候選突變。研究結(jié)果:1.家系1中Ⅰ:2、Ⅱ:3、Ⅱ:8、Ⅱ:14、Ⅲ:6、Ⅲ:11成員患病,其余成員未患病;家系2中1:3、Ⅱ:15、Ⅱ:16、Ⅲ:Ⅱ成員患病,其余成員未患病;2.WES數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)生物信息學(xué)高級(jí)分析后,家系1中篩選出34個(gè)候選突變,家系2中篩選出9個(gè)候選突變;3.對(duì)候選突變的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能改變進(jìn)行分析后,家系1中篩選出4個(gè)候選突變(SYNE2 E6435K、LTBP1 D591H、LAMA1 A2022T、IRF9 c.496-5CT),家系2中篩選出2個(gè)候選突變(CTNNA1 N257S、FOXM1 R754H);4.一代測(cè)序驗(yàn)證:家系1中SYNE2E6435K、IRF9c.496-5CT兩個(gè)突變符合共分離標(biāo)準(zhǔn),家系2中CTNNA1 N257S、FOXM1 R754H也符合共分離標(biāo)準(zhǔn),結(jié)合候選基因編碼蛋白質(zhì)、突變所在結(jié)構(gòu)域以及在心肌組織的表達(dá)水平,最終確認(rèn)家系1的致病突變?yōu)镾YNE2 E6435K,家系2的致病突變?yōu)镃TNNA1N257S;5.先證者Ⅲ:11 攜帶SYNE2E6435K、CTNNA1 N257S雙突變加重其臨床表型。本研究首次直接明確HCM患者多突變的來(lái)源以及多突變?cè)谛呐K結(jié)構(gòu)形態(tài)以及臨床癥狀等顯著異質(zhì)性中的作用機(jī)制。研究結(jié)論:在兩個(gè)常規(guī)心肌肌小節(jié)基因檢測(cè)陰性的肥厚型心肌病家系中,本研究應(yīng)用全外顯子測(cè)序的方法發(fā)現(xiàn)兩個(gè)家系可能的新致病突變SYNE2 E6435K、CTNNA1 N257S,而且兩家系的共有成員先證者攜帶雙突變,先證者臨床表型的加重與雙致病突間的相互作用有關(guān),證實(shí)了多突變?cè)诜屎裥托募〔〖蚁当硇彤愘|(zhì)性中的作用。研究背景及研究目的:肥厚型心肌病(hypertrophic cardiomyopathy,HCM)是最常見(jiàn)的一種遺傳性心臟病,總體人群患病率約為0.02～0.23%,其主要特點(diǎn)為無(wú)繼發(fā)原因的左室肥厚。心尖肥厚型心肌病(apical hypertrophic cardiomyopathy,AHCM)是HCM中的少見(jiàn)亞型,多見(jiàn)于亞洲人群,近期高加索人群中亦有報(bào)道,其肥厚部位主要累及左心室乳頭肌以下的心尖區(qū)。30%～50%的HCM患者合并冠脈肌橋(myocardial bridging,MB),少見(jiàn)亞型AHCM患者合并MB的發(fā)病率、臨床特點(diǎn)和預(yù)后未明。本研究旨在探討MB在AHCM患者中的發(fā)病率和對(duì)AHCM患者長(zhǎng)期預(yù)后的影響。研究方法:本研究回顧了阜外醫(yī)院1994年1月至2016年2月間所有進(jìn)行過(guò)冠脈造影檢查的心尖肥厚型心肌病患者的病歷資料。研究對(duì)象納入標(biāo)準(zhǔn):1.冠脈肌橋組:冠脈肌橋壓縮程度≥50%的患者;2.冠脈陰性組(對(duì)照組):既不存在冠脈肌橋也不存在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄。研究對(duì)象排除標(biāo)準(zhǔn):1.合并冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病,即為冠狀動(dòng)脈管腔狹窄≥50%的患者;2.合并左室流道梗阻、左室中部梗阻的AHCM患者。主要終點(diǎn)事件是心血管死亡,次要重點(diǎn)是心血管事件。通過(guò)隨訪(fǎng)來(lái)確定是否發(fā)生終點(diǎn)事件,及終點(diǎn)事件發(fā)生的時(shí)間。研究結(jié)果:本研究回顧了212例進(jìn)行過(guò)冠脈造影檢查的心尖肥厚型心肌病患者的病歷資料。其中冠脈肌橋組納入了60例患者,冠脈陰性組納入了 100例患者,排除了48例合并冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的患者(10/48的患者同時(shí)合并冠脈肌橋)和4例同時(shí)合并梗阻與冠脈肌橋的患者。與冠脈陰性組的患者相比,冠脈肌橋組患者的臨床癥狀明顯加重,其中心絞痛(63.2%vs 40%;p = 0.003)、癥狀類(lèi)似非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)((15%vs 3%,p = 0.013))以及紐約心臟協(xié)會(huì)心功能(NYHA)Ⅲ/Ⅳ級(jí)(14.7%對(duì)4%;p = 0.01)的發(fā)生率明顯升高。冠脈肌橋組與冠脈陰性組經(jīng)過(guò)相同的隨訪(fǎng)時(shí)間(56.9±49.9 vs.55.7±45個(gè)月,p = 0.378),發(fā)現(xiàn)兩組間心血管死亡率無(wú)差別(2.9 9%vs.2%;p = 0.9)。Kaplan-Meier曲線(xiàn)分析提示冠脈肌橋組患者的無(wú)次要終點(diǎn)事件生存率低于冠脈陰性組的患者(73.5%vs.88%;p = 0.031),進(jìn)一步的Cox多元素回歸分析發(fā)現(xiàn)冠脈肌橋(HR:2.69,9 95%置信區(qū)間1.14-6.38)、女性(HR:2.42,95%置信區(qū)間1.02-5.75)和釓延遲增強(qiáng)(late gadolinium enhancement,LGE)(HR:3.62,95%置信區(qū)間1.34-9.75)是心血管事件的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。研究結(jié)論:對(duì)于心尖肥厚型心肌病的患者,冠脈肌橋的存在會(huì)加重心尖肥厚型心肌病患者的臨床癥狀,尤其能提高類(lèi)似NSTEMI的發(fā)生率,而且可升高心尖肥厚型心肌病患者心血管事件的發(fā)病率,但冠脈肌橋并不會(huì)增加心尖肥厚型心肌病患者的心血管死亡率。冠脈肌橋是心尖肥厚型心肌病患者發(fā)生心血管事件的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一。
[Abstract]:Background: hypertrophic cardiomyopathy (Hypertrophic Cardiomyopathy HCM) is caused by cardiac sarcomere protein encoding gene mutations are the most common genetic heart disease, the main characteristics of left ventricular hypertrophy without secondary causes, incidence rate of about 1/500. HCM is a prominent heterogeneity characteristics, in addition to the reasons of different pathogenic gene the effects of disease loci and modification factor of multiple factors such as gene mutation or gene mutation load dose effect is also an important mechanism of HCM genotype and phenotype have great heterogeneity, but the mechanism of molecular genetics research not yet clear. Objective: This study used two generation sequencing technologies such as whole genome sequencing (Whole-Genome, Sequencing, WGS) and whole exome sequencing (Whole-EXome Sequencing, WES) on the double chamber extreme hypertrophy and right ventricular outflow tract obstruction phenotype HCM The proband and the non obstructive pure left ventricular hypertrophy two heterogeneity prominent family phenotype where parents the correlation between phenotype and genotype in study and research, so as to clear the molecular genetic basis of HCM patients with cardiac structural heterogeneity. Methods: the two HCM families of the three generation of a total of 38 family members (1 family members 27, 2 family members of a total of 11) of clinical phenotype and pathogenicity genes. The proband of family 1: 11 is 11:14 and 2 families of offspring: 15 members, two department there are collecting all members. Living family members of the clinical manifestations, ECG, cardiac magnetic resonance imaging data of echocardiography and sick members of all family members, while collecting venous blood 5ml and DNA. extraction based on Mendel dominant genetic rules in the family where the mother is 1 families 2 affected members (I: 2,11: 14)鍜，

本文編號(hào)：1463314