本文關鍵詞：小檗堿對同型半胱氨酸損傷內(nèi)皮細胞保護機制研究　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學院》2017年博士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： 人臍靜脈內(nèi)皮細胞 一氧化氮 非對稱性二甲基精氨酸 同型半胱氨酸 小檗堿

【摘要】：背景與目的在心血管疾病的發(fā)生發(fā)展中,內(nèi)皮細胞功能不全是重要的發(fā)病機制和表現(xiàn),其中內(nèi)皮細胞產(chǎn)生一氧化氮(nitric oxide,NO)下降,引起內(nèi)皮介導的血管舒張功能、抑制血管平滑肌增殖和遷移等功能受損,是心血管疾病中內(nèi)皮功能不全的研究熱點。高同型半胱氨酸血癥是心血管危險因素之一,同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)可影響非對稱性二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine,ADMA)代謝的相關酶,導致ADMA累積,而ADMA可競爭性抑制一·氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的活性,降低內(nèi)皮細胞NO產(chǎn)量,損傷內(nèi)皮功能。小檗堿(berberine,BBR)是從中草藥黃連等植物中提取分離得到的一類異喹啉類生物堿。細胞及動物研究發(fā)現(xiàn),小檗堿具有保護內(nèi)皮的功能,可減少氧化應激、增加NO的表達、減少凋亡等,臨床研究也發(fā)現(xiàn),小檗堿在控制血壓、血糖、抗心室重構等方面有良好作用。但目前尚無研究探究小檗堿在同型半管氨酸損傷條件下對內(nèi)皮功能的保護作用,以及此保護作用是否與ADMA代謝通路相關。本研究在人臍靜脈內(nèi)皮細胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)體系中,探究小檗堿對同型半胱氨酸損傷的保護作用及機制,為小檗堿的內(nèi)皮保護機制提供新的思路。方法在體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞。細胞同步化后,在培養(yǎng)體系中加入3000μM或5000μM濃度的同型半胱氨酸,培養(yǎng)12h、24h、48h后收集細胞和上清,并提取細胞中總mRNA,逆轉錄為cDNA。用CCK8試劑盒細胞活性,用Griess法測定細胞上清液中NO濃度,用LC-MS法測定細胞上清液中ADMA濃度,并用熒光定量聚合酶鏈式反應(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)法測定 NO 及 ADMA代謝相關酶mRNA表達水平的變化,以探究Hcy損傷內(nèi)皮細胞的表現(xiàn)和機制。之后,在上述加入Hcy的損傷體系中,加用0、1.25μM、2.5μM、5.OμM、10.0μM濃度的小檗堿干預,培養(yǎng)12h、24h、48h后,用同樣的方法收集細胞和上清,并測定上述指標的變化情況,以探究小檗堿對Hcy損傷條件下的內(nèi)皮細胞的保護作用。結果同型半胱氨酸在3000μM濃度下對HUVEC細胞活性無顯著影響,但500μM濃度則可引起細胞活性顯著降低。同型半胱氨酸可降低eNOS和DDAH1表達、增加PRMT表達,導致ADMA累積,損傷內(nèi)皮細胞產(chǎn)生NO的能力。在同型半胱氨酸損傷條件下,小檗堿干預可提高HUVEC細胞活性,降低ADMA水平,增加HUVEC的NO產(chǎn)量,但在大劑量同型半胱氨酸損傷、小檗堿干預時間較長以后,可導致NO水平進一步降低。在某些條件下,小檗堿可增加eNOS和DDAH1的表達,降低PRMT1表達,發(fā)揮內(nèi)皮保護作用。結論同型半胱氨酸對HUVEC細胞活性和NO產(chǎn)生有損傷作用,可能與降低eNOS和DDAH1表達、增加PRMT1表達,從而引起ADMA累積有關,但具體機制尚需進一步研究。小檗堿可提高HUVEC細胞活性,降低同型半胱氨酸損傷條件下的ADMA水平,增加NO產(chǎn)量,保護作用持續(xù)時間大約為12～24h,若濃度不足以拮抗同型半胱氨酸損傷,或超出保護作用持續(xù)時間,小檗堿干預反而會使NO水平進一步降低。小檗堿的保護作用可能與影響eNOS、DDAH1和PRMT1等NO和ADMA代謝相關酶的表達有關,但具體機制尚需進一步實驗證實。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285

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本文編號：1351038