本文關(guān)鍵詞：負載富血小板血漿的聚多巴胺明膠微球在脂肪移植中的研究　出處：《南方醫(yī)科大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：研究背景和目的PRP可以顯著提高移植脂肪的保留率,但是因半衰期短的問題,難以在目的區(qū)域持續(xù)發(fā)揮作用。因此,PRP輔助脂肪移植的過程中,如何維持PRP在局部的有效濃度,是充分發(fā)揮其作用的關(guān)鍵。緩控釋給藥系統(tǒng)可以有效地延緩藥物的釋放速率。明膠微球具有理想的機械穩(wěn)定性與降解速率、以及較好的生物安全性。然而,明膠微球?qū)ρ“?細胞因子的作用,以物理吸附為主,因而所負載的血小板數(shù)量有限。聚多巴胺可促進細胞的粘附,且具有良好的生物相容性。我們設(shè)想如果以聚多巴胺為橋梁,對明膠微球進行表面修飾和改性,形成聚多巴胺包被的明膠微球(GM-pDA),則會在很大程度上提升微球的黏附能力,從而能夠負載更多數(shù)量的血小板,且起到緩釋生長因子的作用,最終有效的提高移植脂肪存活率。方法抽大鼠腹主動脈血經(jīng)兩次離心法制備PRP。同時經(jīng)乳化交聯(lián)法制備明膠微球。通過多巴胺的自發(fā)氧化聚合反應(yīng)對GM修飾。將兩者混合后得到GM-PDA-PRP。利用掃描電鏡觀測微球形態(tài)與表面血小板黏附情況。全自動血細胞分析儀測量血小板含量。ELISA法檢測生長因子含量。分別將GM-PDA-PRP、GM-PRP、PRP加入大鼠ASCs培養(yǎng)皿,通過CCK-8檢測并計算細胞增殖率。取大鼠腹溝區(qū)皮下脂肪瓣,聯(lián)合GM-PDA-PRP移植于大鼠背部。設(shè)置GM-PRP、PRP和PBS為對照組。于第4、8、16周后取材。計算脂肪移植的保留率。將標本進行全組織染色、HE染色,計算新生血管的數(shù)量。4周取材的樣本免疫熒光染色,檢測CD31、CD34、Ki67。統(tǒng)計學處理所有統(tǒng)計數(shù)據(jù)均表示為平均值±標準誤。數(shù)據(jù)進行方差分析(ANOVA),以確定兩個平均值之間的統(tǒng)計意義。P值0.05有統(tǒng)計學意義。結(jié)果與討論:1.成功制備富集血小板的微球載體,GM-PDA-PRP表面可見大量血小板固定附著,分布、厚度均勻。GM-PRP表面的血小板數(shù)量、厚度較GM-PDA-PRP組少。2.經(jīng)聚多巴胺進行表面修飾后,約68%的血小板可以被微球吸附。加入激活劑后,PRP組生長因子呈暴發(fā)式釋放,同樣其降低消耗也快。而微球組突釋效應(yīng)不顯著、釋放峰值較低,起到了長效緩釋的作用。PRP組由于其突釋作用,表現(xiàn)出了最強的增殖效應(yīng)。3.GM-PDA-PRP組移植物存活率明顯高于其余3組。早期在PRP組和GM-PDA-PRP組中新生血管較多,16周時,GM-PDA-PRP組可見小葉樣成熟脂肪結(jié)構(gòu),而GM-PRP和PBS組中無此類結(jié)構(gòu),相反其液泡和包囊樣結(jié)構(gòu)較多。GM-PDA-PRP組中CD31、CD34、Ki67的熒光表達量最高,分別是PBS組的6.4、3.5和5.2倍,證明在GM-PDA-PRP長效緩釋生長因子作用下,脂肪及血管內(nèi)皮細胞增殖活躍,移植物中形成成熟的血管結(jié)構(gòu),脂肪組織成活。結(jié)論:聚多巴胺包被的明膠微球可以富集大量血小板,從而能夠促進ASCs的增殖,當與脂肪組織共移植時,其長效緩釋生長因子,有利于移植物的再血管化,提高了其存活率。
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R622

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1 姜丹;唐召軍;姜云壘;劉成柏;王飛;林相友;陳霞;;生物可降解明膠微球的制備及體外降解[J];吉林大學學報(理學版);2008年01期

2 褚書鈴,魏樹禮,陳連珊,侯明霞,宋蕾,李松年,彭勃,蔣學祥;明膠微球的研究[J];北京醫(yī)科大學學報;1993年06期

3 于蓮;張傳美;李愛臣;董宇;張U，

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