本文關(guān)鍵詞：哈它各其-7涂擦療法對壓瘡缺血再灌注損傷大鼠的作用及機(jī)理研究　出處：《北京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 哈它各其-7 蒙醫(yī)涂擦療法 壓瘡 缺血再灌注損傷 炎癥因子

【摘要】：研究目的1.本研究從不同層面觀察哈它各其-7涂擦療法對壓瘡缺血再灌注損傷(I/RI)大鼠的影響,初步闡明哈它各其-7涂擦療法治療壓瘡的作用及其可能機(jī)制。。2.制備壓瘡I/RI大鼠模型,觀察哈它各其-7涂擦療法對壓瘡創(chuàng)面病理學(xué)變化,對血清細(xì)胞因子及壓瘡創(chuàng)面組織相關(guān)基因的mRNA和蛋白表達(dá)的影響,從而探討其創(chuàng)面愈合的作用機(jī)制,為臨床應(yīng)用與研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究方法1.動(dòng)物篩選及分組:購入健康清潔級SD大鼠80只,雄性,體重為280土20g,在實(shí)驗(yàn)室習(xí)慣性飼養(yǎng)一周后造模。根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組,模型組,哈它各其-7組,云南白藥對照組,每組各20只大鼠。2.壓瘡I/RI大鼠模型的復(fù)制:10%水合氯醛300mg/kg腹腔注射麻醉大鼠,脊柱右側(cè)臀部處脫毛消毒。做一約2.5cm橫向切口,切開全層皮膚,鈍性分離,將高溫滅菌后的直徑為25mm×1.5mm的圓形磁鐵植入大鼠臀部皮膚深筋膜下,最后用4-0絲線縫合全層切口。術(shù)后24h將一塊25mm×2.5mm的永久性磁鐵,吸附于實(shí)驗(yàn)大鼠臀部磁片植入?yún)^(qū),并開始皮膚缺血再灌注損傷循環(huán)。外源磁鐵對皮下的磁鐵產(chǎn)生壓力,造成局部組織缺血,每次缺血2h后將外源磁鐵取下,讓局部血流恢復(fù)30min。如此為1個(gè)循環(huán),每日每只大鼠進(jìn)行5個(gè)連續(xù)的循環(huán),連續(xù)5天。假手術(shù)組僅在臀部相同位置做一深至深筋膜的切口即可。以皮膚變黑,變硬,針刺不出血潰瘍作為判斷標(biāo)準(zhǔn)。3.治療方法:模型組、哈它各其-7組和云南白藥對照組中選取符合III期壓瘡模型大鼠,各組16只。其中假手術(shù)組采用隨機(jī)數(shù)字表法選取16只大鼠。每組又分7天、14天2個(gè)時(shí)間點(diǎn),每個(gè)時(shí)間點(diǎn)8只大鼠。各治療組給予相應(yīng)藥物外涂擦,1次/天,以無菌紗布覆蓋創(chuàng)面,繃帶固定包扎。假手術(shù)組和模型組不給予任何方式的治療。4.取材與指標(biāo)檢測:①一般情況觀察:觀察大鼠創(chuàng)面愈合情況,如大鼠創(chuàng)面顏色、滲出液等;計(jì)算大鼠創(chuàng)面面積。②各組在治療后的兩個(gè)時(shí)間段麻醉大鼠,采集腹主動(dòng)脈血5mL,放入不含抗凝劑的試管中,以3000r/min,4℃離心15min,根據(jù)試劑盒說明檢測大鼠血清SOD、MDA、MPO、NO含量,利用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法測定血清TNF-α、ICAM-1水平。③壓瘡創(chuàng)面為中心,切取各組左側(cè)創(chuàng)緣全層皮膚及肌肉組織,4%多聚甲醛固定,脫水,常規(guī)石蠟包埋,HE染色進(jìn)行觀察和IHC法檢測樣本組織HIF-1α、VEGF蛋白表達(dá)。④壓瘡創(chuàng)面為中心,切取各組右側(cè)創(chuàng)緣全層皮膚及肌肉組織,放入凍存管內(nèi),置液氮中保存后移入-80℃冰箱,RT-PCR法測樣本組織中HIF-1α、VEGF mRNA及Western blot法測創(chuàng)面組織的HIF-1α、VEGF蛋白表達(dá)。5.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用SPSS21.00軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差表示,多個(gè)樣本均數(shù)比較采用重復(fù)測量數(shù)據(jù)的方差分析,組間兩兩比較采用LSD比較,P0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究結(jié)果1.創(chuàng)面大體觀察哈它各其-7組大鼠創(chuàng)面滲出液較多,肉芽組織生長迅速,色澤鮮艷,呈淡紅色,切割后出血明顯。肉眼觀術(shù)后第3天創(chuàng)面開始愈合,第14天基本愈合。云南白藥組大鼠創(chuàng)面濕潤,創(chuàng)面愈合比較迅速,肉芽生長迅速,色澤淡紅。肉眼觀術(shù)后第4天開始愈合,第14天基本愈合。模型組大鼠傷口痂和紗布粘連,需用生理鹽水濕潤,才能避免撕扯引起出血,傷口愈合緩慢,肉眼觀術(shù)后第7天開始愈合,直到第14天愈合率仍是不高。2.哈它各其-7涂擦療法對壓瘡I/RI模型大鼠創(chuàng)面愈合的影響各組間創(chuàng)面殘余面積比較情況如下,給藥3天,各組小鼠殘余創(chuàng)面面積沒有顯著性差異(P0.05)。給藥第7天,14天時(shí),與模型組比較,哈它各其-7組與云南白藥對照組有顯著性差異(P0.01)。各時(shí)間段,哈它各其-7組與云南白藥對照組之間無顯著性差異(P0.05)。表明哈它各其-7組和云南白藥對照組對壓瘡I/RI模型大鼠創(chuàng)面均具有較好的修復(fù)作用。3.哈它各其-7涂擦療法對壓瘡I/RI模型大鼠創(chuàng)面組織病理變化的影響假手術(shù)組大鼠皮膚為復(fù)層鱗狀上皮,上皮組織結(jié)構(gòu)比較清晰,肌纖維排列緊密有序,未見明顯炎癥細(xì)胞浸潤。模型組大鼠皮膚表面不完整,復(fù)層鱗狀上皮較正常組薄,結(jié)構(gòu)不清,部分上皮結(jié)構(gòu)出現(xiàn)斷裂,肌纖維明顯的水腫,組織間充血嚴(yán)重,真皮內(nèi)見較多的炎癥細(xì)胞浸潤。哈它各其-7組與云南白藥對照組上皮結(jié)構(gòu)較清晰,肌纖維水腫減輕,組織間無充血,真皮內(nèi)可見少量炎性細(xì)胞浸潤。說明哈它各其-7能有效減輕局部損害。4.哈它各其-7涂擦療法對壓瘡I/RI模型大鼠血清SOD、MDA、NO、MPO、TNF-α、ICAM-1 的影響4.1對SOD的影響治療的兩個(gè)時(shí)間點(diǎn),與假手術(shù)組比較,模型組大鼠血清SOD含量明顯降低(P0.01),與模型組比較,哈它各其-7組與云南白藥組血清SOD含量明顯升高(P0.01)。4.2對MDA的影響治療的兩個(gè)時(shí)間點(diǎn),與假手術(shù)組相比,模型組血清MDA含量明顯提高(P0.01)。與模型組比較,哈它各其-7組與云南白藥組血清MDA含量明顯降低(P0.01)。哈它各其-7組與云南白藥組MDA含量無顯著性差異(P0.05)。4.3對NO、MPO的影響治療的兩個(gè)時(shí)間點(diǎn),與假手術(shù)組相比,模型組血清NO、MPO水平明顯提高,具有顯著性差異(P0.01),與模型組相比,哈它各其組與云南白藥組大鼠血清MPO水平明顯降低(P0.05)。與云南白藥組相比,給藥7天,哈它各其-7組大鼠血清MPO水平顯著降低(P0.05)4.4 對TNF-α、ICAM-1 的影響治療的兩個(gè)時(shí)間點(diǎn),與假手術(shù)組相比,模型組血清TNF-α、ICAM-1含量顯著升高(P0.01),與模型組相比,哈它各其組與云南白藥組大鼠血清TNF-α、ICAM-1含量顯著降低(P0.01)。與云南白藥組相比,哈它各其-7組血清ICAM-1含量顯著降低(P0.05)。5.哈它各其-7涂擦療法對壓瘡I/RI模型大鼠創(chuàng)面HIF-1α、VEGF的影響5.1RT-PCR結(jié)果:治療的兩個(gè)時(shí)間點(diǎn),與假手術(shù)組比較,各組HIF-1α、VEGFmRNA水平明顯提高(P0.01),與模型組比較,哈它各其-7組與云南白藥組HIF-1α、VEGFmRNA水平明顯提高(P0.05)。給藥7天,與哈它各其-7組比較,云南白藥組VEGFmRNA水平明顯提高(P0.05)。5.2 Western blot結(jié)果:治療的兩個(gè)時(shí)間點(diǎn),與假手術(shù)組比較,各組HIF-1α蛋白水平明顯提高(P0.01)。與模型組比較,哈它各其-7組與云南白藥組HIF-1α蛋白水平明顯提高(P0.01)。哈它各其-7組和云南白藥組之間沒有顯著性差異(P0.05)。治療的兩個(gè)時(shí)間點(diǎn),與假手術(shù)組比較,各組VEGF蛋白水平提高,其中哈它各其-7組與云南白藥組顯著提高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。與模型組比較,哈它各其-7組與云南白藥組VEGF蛋白水平明顯提高(P0.01)。與哈它各其-7組比較,給藥14天,云南白藥組VEGF蛋白水平顯著提高(P0.05)。5.3 IHC結(jié)果:治療的兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，與假手術(shù)組比較,各組HIF-1α、VEGF平均光密度值明顯提高(P0.05)。與模型組比較,哈它各其-7組與云南白藥組HIF-1α、VEGF平均光密度值進(jìn)一步提高(P0.05)。哈它各其-7組和云南白藥組之間沒有顯著性差異(P0.05)。結(jié)論1.哈它各其-7涂擦療法能顯著減小壓瘡I/RI模型大鼠創(chuàng)面面積,病理結(jié)果顯示可減少創(chuàng)面組織的炎癥細(xì)胞浸潤,對創(chuàng)面愈合有修復(fù)作用,能有效促進(jìn)創(chuàng)面的愈合。2.哈它各其-7涂擦療法能提高壓瘡I/RI模型大鼠血清SOD的活性,降低MDA含量,降低NO含量,減輕脂質(zhì)過氧化反應(yīng),提高抗氧化酶活性,清除自由基,從而促進(jìn)傷口愈合。3.哈它各其-7涂擦療法可顯著降低壓瘡模型大鼠血清TNF-α、MPO、ICAM-1含量,其機(jī)制可能與抑制壓瘡引起的炎癥反應(yīng)有關(guān),從而促進(jìn)傷口愈合。4.哈它各其-7涂擦療法可通過提高壓瘡創(chuàng)面組織HIF-1α及其下游因子VEGFmRNA及蛋白的表達(dá),進(jìn)而減輕缺血再灌注損傷,有效改善壓瘡創(chuàng)面局部的血液循環(huán),促進(jìn)血管及纖維組織的增生,進(jìn)而促進(jìn)創(chuàng)面的修復(fù)。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R29

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 于長志;劉衛(wèi)明;張銘杰;;踝關(guān)節(jié)炎藥膏涂擦療法的臨床療效觀察[J];臨床骨科雜志;2011年01期

2 何晉;;中藥涂擦療法在Colles骨折早期的應(yīng)用體會(huì)[J];內(nèi)蒙古中醫(yī)藥;2012年03期

3 哈斯高娃;;蒙醫(yī)涂摩療法研究進(jìn)展[J];云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2013年03期

4 ;[J];;年期

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 本報(bào)記者 羅旭;古老藏醫(yī)有了“國際范兒”[N];光明日報(bào);2013年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 包蘇布道;哈它各其-7涂擦療法對壓瘡缺血再灌注損傷大鼠的作用及機(jī)理研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2017年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 張莉;中藥涂擦療法對痔成纖維細(xì)胞功能影響的機(jī)制研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2015年

2 張莉;滋陰補(bǔ)腎飲聯(lián)合康復(fù)新液治療肝腎陰虛型口腔扁平苔蘚的臨床研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2015年

，

本文編號：1322500